Сканирующая проточная цитометрия

• Автор: Мальцев, Валерий Павлович
• Шифр специальности: 01.04.05
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 222 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1. Дисперсная среда. Теоретические и экспериментальные подходы в анализе
1.2. Анализ дисперсной среды методами поштучного счета частиц
1.2.1. Култер принцип
1.2.2. Проточная цитометрия
2. ГЛАВА 2. СКАНИРУЮЩАЯ ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ. ИНСТРУМЕНТАЛЬНОЕ РЕШЕНИЕ
2.1. Введение
2.2. Проточный цитометр стандартной конфигурации
2.3. Сканирующий проточный цитометр прямой конфигурации
2.3.1. Сканирующая оптическая кювета
2.3.1.1. Передаточная и апертурная функции оптической кюветы
2.3.1.2. Матрица Мюллера оптической кюветы
2.3.2. Времяразрешенное измерение фосфоресценции
2.4. Сканирующий проточный цитометр обратной конфигурации
2.5. Поляризационный сканирующий проточный цитометр
2.6. Электронная система сканирующего проточного цитометра
2.7. Программное обеспечение сканирующего проточного цитометра
2.8. Выводы к Главе
3. ГЛАВА 3. СКАНИРУЮЩАЯ ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ. ТЕОРИЯ МЕТОДА
3.1. Введение
3.2. Обратная задача светорассеяния в цитометрии стандартной
конфигурации
3.2.1. Метод двухуглового светорассеяния (Two Angle Light
Scattering, 2ALS)

3.2.2. Метод тройного двухуглового светорассеяния (Triple Two
Angle-Light Scattering, 3x2ALS)
3.3. Индикатриса одиночной частицы
3.3.1. Методы расчета индикатрисы
3.3.1.1. Приближенные методы
3.3.1.2. Точные методы
3.3.2. Особенности формирования индикатрисы сферической
частицы
3.3.2.1. Формирование экстремумов
3.3.2.2. Формирование контраста индикатрисы сферической частицы
3.3.3. Особенности формирования индикатрисы частицы
произвольной формы
3.3.3.1. Формирование контраста индикатрисы несферической частицы
3.3.3.2. Функция распределения плотности набега фазы частицы
3.3.3.3. Функция распределения плотности набега фазы частиц разной формы
3.3.3.4. Связь ширины функции распределения плотности набега фазы с контрастом индикатрисы
3.3.4. Параметризация индикатрисы
3.3.5. Параметрическое решение обратной задачи светорассеяния

3.3.5.1. Гомогенная сферическая частица
3.3.5.2. Гомогенная сферическая частица с поглощением
3.3.5.3. Индикатриса одиночной частицы в сильно сфокусированном световом поле
3.3.6. Индикатриса несферической одиночной частицы
3.4. Несферическая частица в пуазейлевском потоке сканирующего проточного цитометра
3.5. Выводы к Главе

4. ГЛАВА 4. СКАНИРУЮЩАЯ ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
4.1. Сертификация латексных частиц
4.2. Исследование кинетики полимеризации с помощью сканирующего проточного цитометра
4.3. Идентификация частиц по сигналу светорассеяния сканирующего проточного цитометра
4.4. Анализ содержания жира в молоке на сканирующем проточном цитометре
4.5. Определение объёма эритроцитов и концентрации гемоглобина в них на сканирующем проточном цитометре
4.6. Исследование светорассеиваюгцих свойств несферических частиц
4.6.1. Эритроциты
4.6.2. Бактерии Escherichia coli и Salmonella typhimurium
4.7. Кинетические исследования взаимодействия лиганда с поверхностными рецепторами клетки на сканирующем проточном цитометре
4.8. Выводы к главе
5. ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ СВЕТОРАССЕИВАЮЩИХ ХАРАКТЕРИСТИК БАКТЕРИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СКАНИРУЮЩЕГО ЛАЗЕРНОГО НЕФЕЛОМЕТРА
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА

Схема оптической кюветы сканирующего проточного цитометра показана на Рис. 2.6. Поток, образованный гидрофокусирующей головкой, направляется в капилляр оптической кюветы (диаметр капилляра 0.254 мм, показатель преломления 1.458). Сферический рефлектор (радиус 4.45 мм) оптической кюветы направляет параллельные лучи на зеркало, расположенное под углом 45 градусов. При пересечении частицей триггерного луча (точка 0 на Рис. 2.6.) система измерения активируется по сигналу триггерного фотодиода. Для любого расположения частицы внутри измерительной зоны свет, рассеянный только под определенным углом 9 отразится сферическим зеркалом параллельно оси потока. Например, углы 01 и 02 соответствую точкам 1 и 2 соответственно (Рис. 2.6.). Угол, образованный направлением падающего лазерного луча и рассеянным лучом, который отражается параллельно оси потока, непрерывно изменяется от 9i до 02 при движении частицы внутри зоны регистрации оптической кюветы. Параллельные лучи, отраженные 45-ти градусной пластинкой, выходят из оптической кюветы и фокусируются линзой в диафрагму, установленную перед фотоумножителем. Зависимость напряжения на фотоумножителе от времени может быть легко преобразована в зависимость интенсивности светорассеяния от угла. Такая оптическая система позволяет измерять Пролетную индикатрису рассеяния (Flying Light Scattering Indicatrix, FLSI) одиночных частиц в полярных углах, простирающихся от 5 до 120 градусов.
2.3.1.1. Передаточная и апертурная функции оптической кюветы
Во время движения частицы внутри зоны регистрации зависимость амплитуды сигнала от времени можно преобразовать в зависимость интенсивности рассеяния от угла. Диафрагма перед фотоумножителем обеспечивает регистрацию только параллельных лучей. Тогда положение частицы в зоне регистрации, т.е. расстояние I от частицы до дна сферического зеркала, можно определить по следующим образом: