Изучение эпитопной структуры пероксидазы щитовидной железы человека

• Автор: Зубков, Александр Владимирович
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 0 с. : 221 ил.

1. Реагенты и оборудование

1.1. Химические реагенты

1.2. Сыворотки, антисыворотки и коньюгаты антител

1.3. Клонирование фрагментов ДНК, кодирующих последовательность антигенных детерминант ТПО
1.4. Посуда

1.5. Оборудование

2. Методы исследования

2.1. Буферные растворы

2.2. Лабораторные животные

2.3. Культуральные среды

2.4. Выделение антигенов щитовидной железы человека тиреопероксидазы ТПО и тиреоглобулина ТГ
2.5. Иммунизация животных и получение иммунных спленоцитов
2.6. Клеточная линия миеломы
2.7. Приготовление фидерного слоя клеток
2.8. Получение гибридных клонов и клонирование гибридом
2.9. Криоконсервация культур
2 Культивирование гибридных клеток i viv
2 Получение пероксидазных коньюгатов МкАт
2 Исследование специфичности, иммунохимических и эффекторных свойств МкАт
2 Определение антител к ТПО и ТГ в сыворотке крови человека
2 Определение ТГ
2 Методы изучения эпитопной специфичности антител к ТПО
2 Методы изучения химерных белков ТПО с МкАт и аутоантителами
2













2 Определение связывания МкАт и аутоантител с химерными белками в непрямом ИФА
2 Определение констант образования иммунных комплексов между МкАт и пероксидазой щитовидной железы
2 Мембранный иммуноанализ на пористых носителях
2 Электрофорез
2 Иммуноблоттинг
2 Определение ферментативной активности пероксидазы щитовидной железы
2 Определение концентрации белка
2 Статистические методы
III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 1. Выделение пероксидазы щитовидной железы и характеристика е свойств
Глава 2. Создание коллекции гибридомпродуцентов МкАт к ТПО
2.1. Получение первичных культур гибридных клеток
2.2. Клонирование первичных культур гибридомпродуцентов МкАткТПО
2.3. Определение констант образования иммунных комплексов образования между моноклональными антителами и пероксидазой щитовидной железы
2.4. Определение эпитопной специфичности МкАт
2.5. Определение эпитопной специфичности МкАт с помощью химерных белков
Глава 3. Изучение эпитопной специфичности аутоантител к ТПО сывороток крови больных с различными заболеваниями щитовидной железы
IV. ЗАКЛЮЧЕНИЕ ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


По мнению ряда авторов, именно тиреоидный статус имеет ведущее значение в генезе вышеописанных иммунных сдвигов 7, 5. Однако существуют факты, свидетельствующие, что изменения тиреоидного статуса вторичны. Вопервых, доказано наличие связи между аутоиммунными заболеваниями ЩЖ и носительством определнных генов системы НЬА 9, , 3, 0, 3. Вовторых, иммунные сдвиги встречаются при аутоиммунных поражениях других органов и систем . Втретьих, при введении высоких доз тироксина для создания экспериментального медикаментозного гипертиреоза не удатся воспроизвести иммунные сдвиги, характерные для АИТ или диффузного токсического зоба 3. Единственным заболеванием щитовидной железы, для которого доказано, что иммунологические сдвиги действительно
являются вторичными тиреоидит де Кервена 4. Основная роль в развитии этого заболевания принадлежит инфекции 4, 9. Таким образом, изменения тиреоидного статуса не могут быть первичными в генезе аутоиммунных заболеваний ЩЖ и возникают в процессе развития патологии, а роль самих тиреоидных гормонов является скорее регуляторной. При аутоиммунном процессе у пациентов часто обнаруживаются сывороточные антитела к специфическим аутоантигенам 4, , , 9, 5, 6, 8, 0. Продемонстрировано, что при АИЗ ЩЖ наблюдается сенсибилизация лимфоцитов периферической крови и особенно интратиреоидных лимфоцитов к антигенам шитовидной железы 4, 7, сопровождающаяся их активацией экспрессией НЬА ОЛ антигенов, пролиферацией и синтезом большого количества ауто антител. Продукцию этих антител осуществляют Влимфоциты, которые, в свою очередь, активируются С клетками Тхелперами .