Разработка автоматизированного количественного агглютинационного текста (АКАТ) и его применение для иммунодетекции возбудителей и диагностики инфекций

• Автор: Коноплева, Мария Вениаминовна
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 179 с. : ил.

1 Развитие и совершенствование иммунологических методов на

основе феномена агглютинации.

1.1 Теория преципитации и агглютинации в иммунохимии.

1.2 Разработка систем автоматизации и объективизации агглютинационных тестов

2 Применение агглютинационных тестов для серодиагностики

сифилиса, а также для иммунодетекции возбудителей бруцеллеза и туляремии

2.1 Методы серодиагностики сифилиса

2.2 Методы выявления бруцелл.

2.3 Методы выявления РгапаэеПа 1агеп1.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3 Материалы
3.1 Штаммы бактерий и бактериальные антигены.
3.2 Антисыворотки и антитела.
3.3 Формалинизированные эритроциты барана
3.4 Клинический материал.
3.5 Диагностические тестсистемы.
3.6 Комплектующие аппаратнопрограммного комплекса Критерий
4 Методы исследования
4.1 Иммунизация мышей
4.2 Получение гибридом.
4.3 Выделение моноклональных и поликлональных антител
4.4 ИФА для определения ЛПС бруцелл
4.5 ИФА для определения ЛПС Р.иагеп1.
4.6 Приготовление тестовых и контрольных эритроцитов для РПГА
4.7 РИГА для определения ЛПС и микробных клеток бруцелл и Рди1агеп
4.8 РПГА для выявления антитрепонемных антител.
4.9 Аппаратнопрограммный комплекс Критерий 2 и методика автоматизированного
количественного определения реакции агглютинации
4. Клинические исследования АПК Критерий 2
4. Статистические методы
РЕЗУЛЬТАТЫ
5 Общая характеристика программы анализа изображений РПГА
Критерий 2.
6 Разработка РПГААКАТ для серодиагностики сифилиса
7 Разработка РПГААКАТ и системы сравнения на основе ИФА для
иммунодетекции бруцелл.
7.1 Получение и характеристика моноклональных антител, специфичных к Л ПС бруцелл.
7 2 Разработка референсного ИФА для иммунодетекции бруцелл.
7.3 Разработка РПГААКАТ для иммунодетекции бруцелл.
7.4 Определение чувствительности и специфичности РПГААКАТ для иммунодетекции бруцелл в сравнении с референсным тестом ИФА.
8 Разработка РПГААКАТ и системы сравнения на основе ИФА для
иммунодетекции Р.ШагемЬ
8.1 Разработка референсного ИФА для иммунодетекции РлиагспзБ
8 2 Разработка РПГААКАТ для иммунодетекции Р.иагепзз
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Принцип метода заключался в том, что при оседании суспензии эритроцитов через некоторое время можно было различить три слоя верхний прозрачный слой без эритроцитов, средний слой оседающих эритроцитов, имеющий равномерную площадь и нижний слой осевших эритроцитов. Если в пробирку добавляли соответствующее количество антигена например, вирусного, то скорость оседания повышалась благодаря агглютинации эритроцитов. Через некоторое время агглютинированные эритроциты оседают, и в среднем слое получается меньшая концентрация эритроцитов и меньшая оптическая плотность, чем в контрольной пробирке без вируса. Определение оптической плотности среднего слоя дает результат, отражающий количество антигена вируса. Кривая оседания эритроцитов в зависимости от времени в присутствии антигена имела линейный участок, что указывало на то, что в данных условиях не происходило заметного образования эритроцитарных агрегатов с количеством эритроцитов больше двух. После элюции вируса с эритроцитов и количественных расчетов этот метод позволил определить, что на каждом эритроците имеется 0 участков, на которых фиксируется вирус гриппа. Разработка фотометрического метода позволила провести определение абсолютного количества гемагглютинирующих частиц суспензии вируса гриппа 6. Таким образом, в представленных выше исследованиях, которые стали классическими, была строго доказана аналитическая количественность реакции преципитации и агглютинации. В годы XX века поиски простых и чувствительных методов выявления и количественного определения антигенов и антител привели к разработке альтернативных агглютинации методов, вначале радиоиммуноанализа РИА, а затем твердофазного иммуноферментного анализа ИФА.