Адъювантное действие рекомбинантного белка теплового шока (rHSP70) Mycobacterium tuberculosis на иммунный ответ к бактериальным и вирусным антигенам.

• Автор: Шевчик, Юлия Сергеевна
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 143 с. : 1 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. АДЪЮВАНТЫ И СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О МЕХАНИЗМЕ ИХ ДЕЙСТВИЯ

1.1 Общие сведении об адъювантах.

1.2. Сложные смеси адъювантов.

1.3. Системы доставки антигена носители.

ГЛАВА 2. БЕЛКИ ТЕПЛОВОГО ШОКА АКТИВАТОРЫ ВРОЖДЕННОГО И АДАПТИВНОГО ИММУНИТЕТА.

2.1. Белки теплового шока общая характеристика.

2.2. Роль белков теплового шока в активации врожденного и адаптивного иммунитета.

ГЛАВА 3. АДЪЮВАНТНЫЕ СВОЙСТВА БЕЛКОВ ТЕПЛОВОГО ШОКА ПРИ РАЗРАБОТКЕ ВАКЦИН ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И

ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ

3.1. Противоинфекционные и противоопухолевые вакцины на основе белков теплового шока
3.2. Анализ возможной роли белков теплового шока в развитии аутоиммунных процессов
ЧАСТЬ И. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА I. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1.1. Препараты
1.2. Штаммы микроорганизмов.
1.3. Лабораторные животные
1.4. Иммунизация животных.
1.5. Защита мышей от бактериальной и вирусной инфекции.
1.6. Определение фагоцитарной активности нейтрофнлов
в ИСТ тесте
1.7. Культивирование дендритных клеток
1.8. Анализ фенотипа дендритных клеток
1.Характеристика поверхностных антигенов
мононуклеарных лейкоцитов селезенки мышей
1 Уровень цитокинов.
1 Определение титров антител в сыворотке крови мышей в РПГА.
1 Определение уровня антител к вирусам гриппа в реакции задержки гемагглютннации РЗГА
1 Определение антител в ИФА.
пределение изотннов и субизотинов
иммуноглобулинов в сыворотке крови мышей.
1 Определение аутоантител к антигенам органов и
тканей человека
1 Статистическая обработка данных.
ГЛАВА 2. АКТИВАЦИЯ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА ПРИ СОВМЕСТНОМ ВВЕДЕНИИ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА ТЕПЛОВОГО ШОКА С БАКТЕРИАЛЬНЫМИ АНТИГЕНАМИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ.
ГЛАВА 3. АКТИВАЦИЯ АДАПТИВНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ВВЕДЕНИИ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА ТЕПЛОВОГО ШОКА С БАКТЕРИАЛЬНЫМИ И ВИРУСНЫМ И АНТИГЕНАМИ
3.1. Действие на иммуногенную активность анатоксинов
3.2. Действие на иммуногенную активность сложных бактериальных антигенов полисахариднобелковой природы
3.2.1. Тигры антител к антигенам условнопатогенных микроорганизмов, входящих в состав терапевтической полнкомпонентной вакцины Иммуновак .
3.2.2. Титры антител к клебсиеллезному антигену при конъюгации с
3.2.3. Протектиiii активность и титры антител к антигену стафилококка при введении в смеси с
3.2.4.Иммуногенная активность капсульного
полисахарида iiii i типа в смеси или при конъюгации с
3.2.5. Действие белка теплового шока гН8Р на 1 иммуногенную активность вирусных антигенов.
3.2.5.1. Адъювантное действие гН8Р на титр противогриппозных антител
3.2.5.2. Адъювантное гН8Р на титр антител к антигену Е7 вируса папилломы человека
ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ БЕЛКА ТЕПЛОВОГО ШОКА НА ОБРАЗОВАНИЕ АУТОАНТИТЕЛ ПРИ СОВМЕСТНОМ ВВЕДЕНИИ С БАКТЕРИАЛЬНЫМИ И ВИРУСНЫМИ АНТИГЕНАМИ.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Исходя из этого, в состав новых вакцин необходимо включать адъюванты, активирующие систему врожденного иммунного ответа 4. В этом аспекте перспективными, но малоизученными соединениями, являются белки теплового шока i. Общее свойство защита биологических систем от стрессовых воздействий. Способностью к индукции иммунного ответа обладают представители нескольких семейств, включая , , и др. Большинство авторов считают, что белок теплового шока с молекулярной массой кДа иммунологически является наиболее значимым 5, 6, 9. Адъювантное действие рекомбинантного белка теплового шока i i на активацию систем врожденного и адаптивного иммунитета при его введении в ассоциациях с бактериальными и вирусными антигенами сложной химической природы, высокомолекулярными белковыми соединениями анатоксины, полисахаридами, а также в составе генноинженерных конструкций до настоящего времени изучено недостаточно. Противоречивы сведения о вероятности развития аутоиммунных процессов при совместном введении с бактериальными и вирусными антигенами, что важно вследствие высокой степени гомологии аминокислотных последовательностей этих белков у живых организмов. Изучению данных вопросов посвящена настоящая работа. Цель. Исследование действия рекомбинантного белка теплового шока i i на иммуногенные свойства бактериальных и вирусных антигенов в эксперименте. Изучить влияние иммунизации смесью бактериальных антигенов с гНБР на функциональную активность системы врожденного иммунитета при моделировании у животных инфекционных процессов вирусной и бактериальной этиологии. Исследовать влияние смеси бактериальных антигенов с гН8Р на функциональную активность нейтрофилов периферической крови мышей, созревание дендритных клеток и продукцию цитокинов. Оценить стимулирующее действие Г8Р на систему адаптивного иммунитета при его введении животным в ассоциациях смесь, конъюгат, химерный генноинженерный белок с бактериальными и вирусными антигенами. Определить способность ассоциаций гН8Р с бактериальными и вирусными антигенами стимулировать образование у животных антиШРантител. Выявить потенциальную возможность образования антител, перекрестнореагирующих с тканевыми антигенами человека, в ответ на введение ассоциаций гН8Р с бактериальными и вирусными антигенами в составе препаратов различных конструкций. Продемонстрировано, что гН8Р в составе смеси и химического конъюгата с антигенами условно патогенных микроорганизмов, а также химерного генноинженерного белка Е7 вируса папилломы человека типа является активным стимулятором систем врожденного и адаптивного иммунитета. Иммуноваком оказывает более выраженное стимулирующее влияние по сравнению с действием монопрепаратов на бактерицидную активность нсйтрофилов созревание дендритных клеток увеличение числа дендритных клеток, экспрессирующих на мембране Толлподобные рецепторы i 2, 4, 9 и молекулы МНС класса И, а также приводит к более ранней продукции и тормозит появление в сыворотке крови мышей I. МНС класса И. А и В. Е7ВПЧ Н8Р приводит к увеличению образования и 1С2Ьаитител и снижению продукции аантител, что свидетельствует о поляризации иммунного ответа по ТИ2 пути. Впервые установлено, что введение животным гН8Р ассоциированного с бактериальными и вирусными антигенами в составе препаратов различных конструкций, не вызывает образования антиН8Рантител перекрестнореагирующих с общими тканевыми антигенными эпитопами человека. Практическая значимость гН8Р можно рассматривать в качестве потенциального кандидата в адъюванты при конструировании бактериальных и вирусных вакцин. Конъюгация гНБР с полисахаридными антигенами дает возможность использовать его для индукции Тзависимого иммунного ответа, повышения эффективности иммунизации и формирования иммунологической памяти. Химерный белок Е7 вируса папилломы человека типа может быть использован для получения моноклональных антител, разработки диагностических тестсистем, а также при создании профилактических и лечебных препаратов против инфекций, вызванных вирусами папилломы человека и типов.