Взаимодействие лимфоцитов с эпителиальными клетками различного происхождения in vitro

• Автор: Лиепиньш, Дмитрий Янович
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 111 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Лимфоидная ткань, ассоциированная со слизистыми и иммунная система кожи
1.2 Популяции Тлимфоцитов, контактирующих с эпителиальными клетками ко жи и легких.
1.2.1 Активированные эффекторные Тлимфоциты и Тклетки памяти.
1.2.2 Интраэпителиальные лимфоциты кожи и легких.
1.3 Тлимфоциты с уб ТКР.
1.4 Хемокины и Тклетки
1.5 Эпителиальные клетки.
1.5.1 Эпителиальные клетки кожи
1.5.2 Эпителиальные клетки бронхолегочного аппарата
1.5.2 1 Эпителиальные клетки трахеи, бронхов и бронхиол
1.5.2.2 Альвеолярные эпителиальные клетки
1.6 Пролиферация Тлимфоцитов после взаимодействия с эпителиоцитами кожи и легких
1.6.1 Пролиферация Тклеток в сингенной системе
1.6.1.1 Покоящиеся Тклетки
1.6.1.2. Тклетки, активированные митогенным лектином ФГА или конканавапи ном А
1.6.1.3 Ответ на стимуляцию антиСБЗ антителами
1.6.1.4 Ответ на суперантигены.
1.6.2 Пролиферация Тклеток в аллогенной системе.
1.6.2.1 Покоящиеся Тклетки
1.6.2.2 Ответ на стимуляцию антиСОЗ антителами
1.6.3 Ответ на стимуляцию другими активаторами
1.7 Апоптоз в процессе взаимодействия Тклеток с эпителиоцитами.
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Клетки и их источники
2.2 Животные.
2.3 Моноклональные антитела
2.4 Проточная лазерная цитометрия
2.5 Образование клеточных агрегатов розеток.
2.6 Оценка пролиферации и клеточного цикла лимфоцитов
2.6.1 Оценка пролиферации лимфоцитов.
2.6.2 Оценка клеточного цикла лимфоцитов.
2.7 Оценка апоптоза лимфоцитов.
2.7.1 Ранний апоптоз Тлимфоцитов
2.7.2 Поздний апоптоз лимфоцитов.
2.8 Определение внутриклеточной продукции цитокинов Тлимфоцитами
2.9 Статистическая обработка полученых данных
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Получение клеток и их совместное культивирование.
3.1.1 Получение культур эпителиальных клеток и мононуклеаров периферической
крови МНПК.
3.1.2. Активация эпителиальных клеток и лимфоцитов.
3.1.3 Образование комплексов между эпителиальными клетками и лимфоцитами.
3.2 Пролиферация лимфоцитов.
3.2.1 Подавление пролиферации лимфоцитов, активированных ФГА в совместной
культуре с аллогенными эпителиальными клетками, но не их супернатантами. Дозозависимость цитостатического эффекта.
3.2.2 Определение роли молекул главного комплекса гистосовместимости в цитостатическом эффекте эпителиальных клеток на лимфоциты, активированные ФГА.
3.2.3 Цитостатический эффект эпителиальных клеток на аллогенные активированные ФГ А лимфоциты не опосредован Т ФРР
3.2.4 Роль дефицита ИЛ2 и экспрессии СИ в угнетении пролиферации лимфоцитов эпителиальными клетками
3.3 Отсутствие изменения поверхностного фенотипа лимфоцитов при их совместном культивировании с базальными кератиноцитами, клетками БАЗ или эпителиальными супернатантами.
3.4 Апоптоз лимфоцитов.
3.4.1 Ранний апоптоз.
3.4.2 Поздний апоптоз
3.5 Экспрессия активированными Тклетками ИФНу и ИЛ4.
ГЛАВА IV. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


В активированном состоянии в условиях инфекции, воспаления или повреждения, эпителиальные клетки становятся активными иммуноцитами, продуцирующими ряд цитокинов в том числе хемокинов, обладают повышенной способностью к непосредственному взаимодействию с другими участниками иммунного ответа, посредством поверхностных молекул и, при определенных условиях, становятся способными процессировать и представлять на своей поверхности фрагменты антигена вместе с костимулирующими молекулами, превращаясь в воспомогательные антигенпрезентирующие клетки. К Тклеткам, непосредственно контактирующим с эпителиальными клетками легких и кожи, относятся активированные эффскторные Тклстки и интраэпителиальные лимфоциты ИЭЛ. Абсолютное большинство ИЭЛ любых слизистых и кожи являются Тклетками. Несмотря на высокий процент уб Гклеток среди ИЭЛ, основную массу составляют Тклетки с ар Т клеточным рецептором из которых, в свою очередь, большинство клеток являются Тклетками памяти. В условиях активации эпителиальные клетки способны увеличивать экспрессию молекул 1САМ1, ЬБАЗ, а также экспрессировать молекулы СО, и молекулы гистосовместимости II класса наряду с продукцией целого ряда провоспалительных цитокинов, стимулирующих иммунный ответ. С другой стороны, эпителиальные клетки способны выделять различные иммуносупрессорные факторы, например простагландин Е2 или трансформирующий фактор роста бета ТФРр, способные угнетать Тклеточную пролиферацию. Взаимодействие лимфоидных и эпителиальных клеток играет важную роль при многих заболеваниях, таких как атопический дерматит, псориаз, лимфомы кожи, бронхиальная астма и др. Это определило цель и задачи нашего исследования. Целью данной диссертации явилось изучение феноменологии, последствий и некоторых механизмов взаимодействия лимфоидных и эпителиальных клеток барьерных тканей человека i vi, в частности в условиях активации взаимодействующих клеток. Оценить адгезию Тлимфоцитов крови человека на эпителиальных клетках кожи и респираторного тракта. Изучить влияние сокультивирования лимфоцитов человека с гомологичными эпителиальными клетками указанного тканевого происхождения на соотношение пролиферации и апоптоза при стимуляции Тклеток митогенами. Определить влияние указанного сокультивирования на соотношение Тлимфоцитов, содержащих внутриклеточные интерферонгамма ИФНу и интсрлейкин4 ИЛ4, т. Тклетками дифференцировки в цигокинпродуцирующие клетки 1го и 2го типов. Оценить влияние активации лимфоцитов и эпителиальных клеток на проявление эффектов их взаимодействия. Проанализировать роль мембранных молекул и цитокинов, выделяемых взаимодей ствующими клетками в совместной культуре, в реализации обнаруженных феноме нов. Научная новизна диссертации. Новизна проведенного исследования состоит в обнаружении комплекса феноменов, опосредованных влиянием эпителиальных клеток человека на лимфоциты при их совместном культивировании. Установлено подавление пролиферации Тклеток, активированных ФГА, при их сокультивировании с эпителиальными клетками кожи и бронхиального тракта. Показана роль контактных взаимодействий между лимфоцитами и указанными эпителиальными клетками в реализации этого цитостатического эффекта. Показано, что в совместной культуре активированных лимфоцитов и эпителиальных клеток указанного происхождения незначительно усиливается апоптоз лимфоцитов, но этим нельзя объяснить наблюдаемое подавление пролиферации Тклеток. Установлено изменение профиля ТЫТЬ2 цитокинов, продуцируемых Тлимфоцитами под влиянием сокультивирования с эпителиальными клетками. Активация лимфоцитов была обязательным условием для проявления вышеуказанных феноменов. Результаты проведенного исследования способствуют пониманию функциональных последствий контактных взаимодействий между лимфоцитами и эпителиальными клетками, прежде всегомодифицирующих эффектов эпителиальных клеток на пролиферативный ответ лимфоцитов. Эти данные проясняют ситуацию, которая складывается при Тклеточном ответе, развертывающемся в барьерных тканях, когда ведущим фактором микроокружения для отвечающих Тлимфоцитов служат эпителиальные клетки и их гуморальные продукты. Таким образом, исследование вносит вклад в понимание условий поддержания иммунного гомеостаза и осуществления иммунных процессов в барьерных тканях.