Жизнеспособность гепатацитов в монослойной культуре при воздействии витрифицирующих концентраций этиленгликоля и 1,2-пропандиола

• Автор: Диалло Мухамаду
• Шифр специальности: 14.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 134 с. : ил.

1. цц 1, О б зор л итерэ I ры

1.1. Основные положения витрнфикации.

1.2. Достигнутые успехи в консервации гспатоцнтов

Глава 2. Материалы и методы исследовании.

2.1. Получение суспензии гепатошпов крыс.

2.2. Получение суспензии гепатошпов человека.

2.3. Подсчет количества гспатоцнтов в единице объема.

2.4. Культура гспатоцнтов

2.5. Насыщение растворами криопотсктора

2.6. Метод насыщения флуорссцеином дилетатом ФДА.

2.7. Метод получения биоматериала

2.8. Растворы и мегод определения лактатдегндрогеназы ДДГ и флуоресцеина
2.9. Раствор и метод определения лактата.
2 Метод определения калия
2 Метод определения биосинтеза белка у гепатошпов человека.
2 Метод определения эндогенного дыхания и его коэффицие1п стимуляции у
I СОЦ ЧСЛОВбКй .
2 Статистическая обработка результатов.
Глава 3. Собственные результаты и нх обсуждение
3.1. Влияние концентрации МаС1 и температуры среды на внутриклеточное содержание флуоресцсйна, ДДГ, лактата н калия.
3.2. Распределение криопротскторов между средой и гспатошпами при условии их насыщения возрастающими концентрациями криопротскторов.
3.3. Влияние композиционного состава среды и температуры инкубации на внутриклеточное содержание флуоресцсйна. ДДГ. лактата и калия.
3.4. Морфофункцноналыюе состояние гепатошпов, использование их в клинической практике
Выводы.
Список литературы


Поворотным пунктом в исследованиях Люйе стал в году, после признания необходимости использования микроскопии было выявлено, что внтрификацня представляет собой процесс кристаллизации, который сопровождается формированием так называемых структур типа бытсро изчезающих сферулитов. Дополнительные прямые доказательства по рассеиванию рентгеновских лучей и данные электронной микроскопии стали свидетельством того, что техника Люйе не приведет к витрификации. К тому времени Люйе и его коллеги внезапно, без предупреждения остановили все попытки достичь витрификации живых систем. Болсс того, сам Люйе охаректезировал свои биологические результаты как неудачные . Таким образом, расмотрение витрификации как метода криоконсервации практически исчезло из криобиологической литературе после года и не появлялось на протеженни последних лет. Сегодня понятно, что первый шаг к достижению витрификации водных растворов может быть осуществлен при использование очень высоких концентраций криопротектора. Хотя в ряде ранних работ описывалось влияние криопротектора на формирование льда. Это направление было подчинено попыткам достичь витрификацию сверхбыстрым замораживанием. Постепенно эти работы привели к довольно стройной серии работ по влиянию крнопротектороп на формирование льда. По ходу этих исследований выяснилось, что полная внтрификацня в водных растворах достижима также и при низких скоростях охлаждения но при условии использования достаточно высоких концентрациях криопротекторов. К сожалению, эти исследования дали очень мало для возможности витрификации живых систем.