Сестринские хроматидные обмены в раннем эмбриогенезе мышей в норме и при воздействии деметилирующими агентами

• Автор: Кустова, Мария Евгеньевна
• Шифр специальности: 14.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 122 с. : ил

1.1 Сестринские хроматидные обмены механизмы возникновения
и обнаружения
1.2.Механизмы дифференциальной окраски хроматид
1.3.Влияние различных веществ на образование СХО.
1.4.СХО в эмбриогенезе млекопитающих.
1.5.Метилирование ДНК в эмбриогенезе млекопитающих.
1.6.Влияние различных агентов на уровень метилирования ДИК.
1.7. Связь между метилированием ДНК и дифференциальной
окраской хроматид
1.8. Особенности дифференцировки клеток мышиной эмбриональной
тератокарциномы линии Р
Г лава . Материал и методы
2.1. Культивирование доимплангационных зародышей мышей при воздействии деметилирующих агентов
2.2. Приштовление препаратов из доимплангационных зародышей мышей
2.3. Реакция никтрансляции ш БПи с использованием рестриктаз Мэр I
и НраН.
2.4. Обработка препаратов для получения дифференциальной окраски хроматид и исследования СХО
2.5. Окраска препаратов с использованием антителам к БДУ.
2.6. Культивирование клеток мышиной эмбриональной тератокарциномы Р
2.7. Приготовление препаратов из культуры клеток мышиной эмбриональной
тератокарциномы Г
Глава III. Результаты исследований
3.1. Исследование возможных механизмов возникновения спонтанной дифференциальной организации сестринских хроматид.
3.1.1.Выявление включения бромдезоксиуридина БДУ в хромосомы с помощью антител к БДУ
3.1.2. Изучение роли метилирования и УФ облучения в формировании дифференциальной окраски хроматид хромосом зародышей.
3.2. Влияние деметилирующих агентов этионина и 5азацитидина на развитие предимплантационных зародышей мыши.
3.2.1. Влияние этионина на развитие предимплантационных
зародышей мышей.
3.2.2. Влияние 5азацитидина на предимплантационное развитие мыши
3.2.3.Изучение уровня метилировния хромосомной ДНК i i при помощи рестрикгазы после воздействия этионином и азацитидином.
3.3.Исследование особенностей хромосом дифференцирующихся клеток эмбримональной тератокарциномы линии
3.3.1. Сестринские хроматидные обмены в ходе дифференцировки клеток
3.3.2. Изучение метилирования хромосомной ДНК при помощи рестриктаз Ира II и I в клетках тератокарциномы
9.
3.3.3. Образование одноцепочечных разрывов ДНК в хромосомах клеток
тератокарциномы линии 9.
Глава IV. Обсуждение.
Выводы.
Список литературы


Другая возможность такого рода обменов состоит в том, что
нереплицированная брешь, сохраняющаяся в течение ДНК репликации, приводит к случайному никированию родительских цепей, которые позже воссоединяются неправильно Iii . При таких моделях учитывается роль топоизомераз в процессах индукции и воссоединению разрывов цепей ДНК, которые приводят к формированию СХО i . Клевер v, обнаружил, что частота СХО зависит от размера репликона, то есть существует увеличенное формирование СХО с большими репликонами. Такие же выводы были сделаны на основе исследований с клетками млекопитающих, инфицированных вирусом, в результате чего происходило увеличение размеров репликона и такие клетки имели повышенную частоту образования СХО . Это может быть обусловлено тем, что маленькие репликоны, которые топоизомеразам I и II легче раскручивать, реплицируют свою ДК в отдельные дочерние хеликсы быстрее, что предоставляет меньше возможностей для ошибки и формирования СХО. Последующие исследования показали, что топоизомеразы I и или II действительно могут быть вовлечены в образование разрывов цепей ДНК в точках напряжения суперспирали около репликационных вилок, и, следовательно, могут вовлекаться в образование СХО i . Воссоединение ДНК после репликации может либо сохранять первоначальное расположение цепей, либо приводить к формированию спонтанных СХО если концы цепей меняют свое направление перед воссоединением. Повреждения ДИК различными агентами, вероятно, может увеличивать частоту формирования СХО за счет блокирования движения репликационной вилки, что в свою очередь может приводить к большей вероятности ошибок при последующих корректирующих механизмах в реплицированной ДНК.