Роль опухолевого супрессора ARF в канцерогенезе и молекулярных механизмах активации аутофагии

• Автор: Пимкина, Юлия Сергеевна
• Шифр специальности: 14.00.16
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 82 с. : 33 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1 Молекулярные механизмы действия опухолевого
супрессора .
1.1.1 Роль онкогенов и опухолевых супрессоров в патогенезе
новообразований.
1.1.2 Опухолевый супрессор р р и его функции
1.1.3 Регуляция стабильности опухолевого супрессора р
1.1.4 Влияние на процессинг рРНК.
1.1.5 Взаимодействие и белков семьи 2.
1.1.6 Роль короткой митохондриальной формы р в
аутофагии.
1.1.7 Спектр опухолей, вызываемых инактивацией опухолевого
супрессора
1.2 Аутофагия и е роль в канцерогенезе
1.2.1 Аутофагия и е функции.
1.2.2 Вакуолярные изменения при аутофагии
1.2.3 Регуляция аутофагии
1.2.4 Семейство белков 2 и рсуляция аутофагии.
1.2.5 Аутофагия и программируемая клеточная смерть.
1.2.6 Аутофагия и канцерогенез.
1.2.7 Методы измерения аутофагии в клетках животных .
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1 Культивирование клеток
2.2 Трансформация химически компетентных клеток Е. i
X. .
2.3 Выделение плазмид в препаративном формате .
2.4 Трансфекция клеток плазмидами.
2.5 Выделение митохондрий
2.6 Иммуноблотинг .1.
2.7 Йммунопреципигация
2.8 Иммуноцитофлюорссцентпый анализ 1
2.9 Флоуцитометричсский анализ xi ..
2. Трансмиссионная электронная микроскопия
2. ПЦР в реальном времени.
2. РНКинтерференция..
2. Инфекция клеток ретровирусами
2. Двухмерный разностный гельэлектрофорез 2I
2. Измерение деградации долгоживущих белков.
2. Методы статистического анализа.
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1 Роль 49 опухолевого супрессора в
митохондриальном р опосредованном пути аиоитоза
3.2 Опухолевый супрессор активирует аутофагию 6
3.3 Роль опухолевого супрессора в условиях
метаболического стресса.
3.4 Опухолевый супрессор АИР взаимодействует с ВСБХЬ и ингибирует формирование комплекса ВссНпВс1х1
3.5 Влияние статуса АИР на чувствительность опухолей к ингибированию аутофагии
3.6 Подавление экспресии АЛР ингибирует прогрессию В и Тклеточной лимфом.
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ ,. ,.
г I I . г
ЛИТЕРАТУРА


Подавление экспресии АЛР ингибирует прогрессию В- и Т-клеточной лимфом. ГЛАВА IV. ВЫВОДЫ ,. I * I > • . Количество онкологических заболеваний в последнее время неуклонно растёт. Изучение механизмов лежащих в основе развития опухоли - залог успеха в разработке новых методов диагностики и лечения. Важную роль в патогенезе новообразований играет активация протоонкогенов и нарушение функций опухолевых супрессоров [7]. Поэтому детальное изучение механизмов действия как нротоонкогенов, так и опухолевых супрессоров является актуальной задачей. Локус ШК4а/АРР, кодирующий опухолевый супрессор ЛИР - второй по'частоте мутаций -локус опухолевого супрессора после р при развитии новообразований, что, говорит о • его важной роли в механизмах канцерогенеза [3,5]. К настоящему моменту хорошо изучены р-зависимыс функции АМ7, которые включают участие в процессах стабилизации р, приводящих к остановке клеточного цикла и запрограммированной гибели клетки. Однако р-нсзависимые функции белка АШ7 остаются, малоизученными. В последнее время было показано, что опухолевый супрессор АКР независимо от р участвует в образовании комплексов с . Е2Б-1, ЭР1, РохМ1, НИПа [5]. АИР так или иначе связаны с подавлением клеточного роста. Если это так, то почему экспрессия АИР повышается при развитии многих новообразований; как то: в % случаев лимфом Беркита [,], в % случаев аденокарциномы яичников [] и молочной железы [2]. В литературе имеются данные об укороченной форме АШ7, которая располагается в митохондриях и активирует аутофагию, хотя механизмов, при помощи которых происходит активация аутофагии и роль полноценного опухолевого супрессора АИР в процессе аутофагии, изучено не было [7]1 Необходимость изучения роли- полноценного белка ЛЮ7 в молекулярных механизмах активации аутофагии- объясняется важной ролью данного процесса в механизмах канцерогенеза. Аутофагия - это эволюционно консервативный механизм самопереваривания повреждённых белков и органел и1 высвобождения энергии и аминокислот, при помощи которого поддерживается гомеостаз. Однако нельзя не отметить. Вес1|п1 - один из главных регуляторов, молекулярных механизмов аутофагии - склонны к развитию опухолей. С другой стороны, в генах отвечающих за регуляцию аутофагии всегда удалён только один аллель. Данный факт, может свидетельствовать о том, что на первоначальных этапах развития опухоли аутофагия является сдерживающим механизмом, а при уже развившейся опухоли базовый уровень аутофагии необходим для её выживания в условиях метаболического стресса. Очевидно, данная гипотеза требует дальнейшего изучения и подтверждения. С практической точки зрения понимание молекулярных механизмов активации аутофагии и механизмов регуляции данного процесса может послужить основой для разработки целенаправленных и эффективных методов лечения новообразований. I • . Целью настоящего исследования являюсь изучение роли опухолевого супрессора АКР в молекулярных механизмах аутофагии и влияние АЛР-опосредованной аутофагии на развитие и прогрессию новообразований. Изучить влияние оказываемое опухолевым супрессором АЯР на транспорт р в митохондрии. Определить клеточную локализацию опухолевого супрессора АКР. Оценить роль митохондриальной формы АШ7 в регуляции молекулярных механизмов запрограммированной гибели клеток первого и второго типа. Изучить роль АИР в молекулярных механизмах аутофагии в условиях метаболического стресса. Изучить молекулярный механизм АЯР-опосредованной аутофагии . Оценить чувствительность опухолевых клеток к метаболическому стрессу при отсутствии экспрессии АКР. Изучить влияние подавления экспрессии АЯР и АЯР-опосредованной аутофагии на рост и развитие различных опухолей. В данной работе описан новый молекулярный механизм активации аутофагии, опосредованный. АЯР. Впервые показана неоднозначная роль белка АИР в канцерогенезе. До сих пор считалось, что АЛР является опухолевым супрессором, и что его активация способствует подавлению опухолевого роста. Нами впервые показано, что эта точка зрения справедлива не для всех опухолей.