Выбор оптимальных методов культивирования и трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток человека в условиях эксперимента

• Автор: Пулин, Андрей Алексеевич
• Шифр специальности: 14.00.16
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 123 с. : 33 ил.

1.1. Поверхностные маркеры, характеризующие ММСК костного мозга

человека.

1.2. Влияние методов культивирования на фенотип ММСК i vi и поведение i viv

1.3. Кинетика ММСК i viv после трансплантации, распределение по органам и терапевтический эффект.

1.4. Трансплантация ММСК для лечения сахарного диабета 1 типа

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Культивирование клеток и исследование культур i vi

2.2. Объекты исследования и распределение мышей по группам.

2.3. Экспериментальное исследование

2.4. Исследование образцов тканей мышей

2.5. Статистический анализ.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 3. СОПОСТАВЛЕНИЕ КУЛЬТУР ММСК, ВЫРАЩЕННЫХ В ВЫСОКОЙ И НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ
3.1. Исследование клоногенности, жизнеспособности и дифференцировочного потенциала ММСК
3.2. Зависимость агрегации ММСК в суспензии и выживаемости реципиента после внутривенного введения ММСК от времени культивирования
3.3. Исследование экспрессии генов.
3.4. Исследование экспрессии поверхностных белков
3.5. Проточная цитофлуориметрия культур ММСК.
3.6. Исследование динамики экспрессии поверхностных эпитопов культур ММСК.
3.7. Агрегация ММСК, вызванная РНКинтсрфсрснцией к X
ГЛАВА 4. СОПОСТАВЛЕНИЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК ПО ОРГАНАМ I VIV
4.1. Подбор оптимальной дозы для введения животным
4.2. Циркуляция клеток в крови после системного введения.
4.3. Распределение клеток но органам через мин после введения.
4.4. Кинетика нпММСК в легких после внутривенного введения
4.5. Циркуляция и распределение по органам нпММСК, прошедших предварительную обработку, через мин после внутривенного введения
4.6. Распределение нпММСК по органам у животных с моделями острого и хронического заболеваний
ГЛАВА 5. ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЭФФЕКТ ПРИ ВНУТРИАРТЕРИАЛЫЮМ ВВЕДЕНИИ НПММСК ЖИВОТНЫМ С МОДЕЛЬЮ СТРЕПТОЗОТОЦИНИНДУЦИРОВАННОГО САХАРНОГО ДИАБЕТА.
5.1. Модель эксперимента.
5.2. Влияние инфузии нпММСК на уровни глюкозы и инсулина сыворотки крови мышей.
5.3. Исследование образцов тканей поджелудочной железы методом реалтайм ПЦР
5.4. Гистоморфологическое исследование тканей поджелудочной железы
5.5. Гистоморфологическое исследование тканей почек
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


При детальном анализе пептидов при помощи массспектрометрии и секвенирования солюбилизированных мембран ММСК человека в работах . И определены антигены, с которыми реагировали вышеназванные антитела. III, имеющийся у эндотелиальных клеток, синцитиотрофобластов, макрофагов и стромальных клеток соединительной ткани . В ММСК эндоглин играет преимущественно сигнальную роль в процессах хондрогенной дифференцировки и участвует во взаимодействии ММСК и гемопоэтических клеток в костном мозге. Антитела 3 и 4 связывались с экто5нуклеотидазой , имеющейся у клеток лимфоидной ткани . Т и Влимфоцитов, ирает роль в активации Влимфоцитов и в передаче сигналов в гемопоэтическом компартменте костного мозга 2. Роль в дифференцировке ММСК и во взаимодействии стромальных компонентов к настоящему времени до конца не определена. При иммуниоблоттинге в реакцию с очищенным бычьим вступали только антитела II4, но не 3 возможно в связи с повреждением эпитопа при денатурации белка. Кроме этого, оба типа антител имеют одинаковую молекулярную массу, связывание антител с поверхностью человеческих ММСК носит конкурентный характер. Все это свидетельствует о том, что антитела 3 и 4 связываются с различными эпитопами одной и гой же молекулы на поверхности ММСК. В работе 4 получены и охарактеризованы антитела , , , которые связывались с антигенами на поверхности ММСК, отличными от ангигенов для антител 2, I3 и I4. ММСК, изолированные при помощи полученных антител были и негативны, а также экспрессировали , , 5.