Дифференцировочные потенции мезенхимальных стволовых клеток костного мозга у детей

• Автор: Пурбуева, Базарма Баяровна
• Шифр специальности: 14.00.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 104 с. : 11 ил.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материал исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Клоног енное культивирование стромальных фибробластов.

2.2.2. Культивирование кроветворных клеток

ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ДИФФЕРЕНЦИРОВОЧНОГО ГЮТЕНЦИАЛА МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК МСК в НОРМЕ.

3.1. Стандартизация условий клоногенного культивирования стромальных фибробластов

3.2. Индукция диффереицировки стромальных предшественников фибробластов.

3.3. Опенка дифференцировочных потенций клоногенных фибробластов МСК в нормальном костном мозге.
ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ДИФФЕРЕНЦИРОВОЧНОГО ПОТЕНЦИАЛА
МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПРИ ЛЕЙКОЗАХ
4.1. Оценка дифференцировочных потенций клоногенных фибробластов МСК в костном мозге при ОМЛ.
4.2. Оценка дифференцировочных потенций клоногенных фибробластов МСК в костном мозге при ОЛЛ
4.3. Сравнительная оценка дифференцировочных потенций клоногенных фибробластов МСК в костном мозге при ОМЛ и ОЛЛ с нормой
4.4. Связь показателей клонирования стромальных фибробластов с длительностью медикаментозной аплазии костного мозга при программной
полихимиотерании первичных лейкозов.
ГЛАВА 5. СВЯЗЬ СТРОМАЛЬНОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ КОСТНОГО
МОЗГА С КРОВЕТВОРЕНИЕМ
5.1. Модель влияния МСК костного мозга на рост грану лоцитарно
макрофагальных предшественников.
ГЛАВА 6. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ ДАННЫХ.
ВЫВОДЫ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Независимо от используемой терминологии, во всех исследованиях имеются в виду прилипающие костно-мозговые клетки, при культивировании ex vivo образующие колонии веретенообразно-вытянутых клеток, по морфологии напоминающих фибробласты. Это даст основание при характеристике клонального роста МСК использовать термин КОЕф. А.Я. Фриденштейном с соавг. Дальнейшие исследования дифференцировочных потенций МСК позволили Мига^Па с соавт. МСК. Эти данные получены при экспансии в культуре клонов, выделенных из первичной культуры КОЕф. Неясным остается состав и иерархия первичной культуры КОЕф костного мозга человека, что могло бы служить функциональной характеристикой МСК и быть использовано в качестве референтных показателей для оценки стромального микроокружения костного мозга в клинических целях. Зависимости кроветворения от стромального микроокружения посвящено много исследований, в основном, экспериментальных [7,,,,], продемонстрирована преимущественная связь отдельных элементов стромы (жировые клетки и остеобласты) с определенными ростками кроветворения [,,,7]. Однако до сих пор отсутствует метод определения стимулирующих гемопоэз свойств костно-мозговой стромы у конкретного пациента и стандартные критерии их оценки. Стандартизация методов и разработка критериев клинической оценки диффсренцировочных потенций мезенхимальных стволовых клеток (МСК) костного мозга и их связей с кроветворением у пациентов. Стандартизировать условия индукции дифференцировки МСК в первичных культурах клоногенных фибробластов костного мозга человека. Разработать критерии оценки дифференцировочных потенций МСК костного мозга в первичных культурах и получить референтные значения этих показателей для условно нормального костного мозга детей. Проанализировать изменения дифференцировочного потенциала МСК при острых лейкозах у детей. Создать культуральную модель, позволяющую оценивать индуктивную роль МСК в кроветворении у пациента. Оценить колониестимулирующую активность различных видов МСК при культивировании гранулоцитарио-макрофагальных предшественников в агаровой культуре. Научная новизна. В настоящей работе впервые были рассмотрены дифференцировочные потенции МСК костного мозга детей в первичной культуре КОЕф и их влияние на кроветворение. С згой целью была разработана культуральная модель, позволяющая оценить индуктивное влияние МСК и их дифференцированных предшественников на пролиферацию 1рапулоцитарно-макрофагальных предшественников. Впервые предложены новые критерии количественной оценки дифференцировочных возможностей МСК, разработаны референтные значения этих показателей в норме и исследованы их изменения при острых лейкозах у детей. Данные, полученные при индукции остеогенной и адипогенной дифференцировки клопогонных стромальных фибробластов условно нормального костного мозга позволяют утверждать, что МСК костного мозга не являются сборной группой клеток, состоящей из стромальных элементов различных линий днффсрсицировки, а построены по иерархическому принципу, характерному для пула стволовых клеток. Основная часть клеточных элементов МСК в стабильном состоянии (около %) представлена ранними недифференцированными предшественниками. Было установлено также, что индукторы дифференцировки включают генетически детерминированную программу дифференцировки, приводящую к стабильному соотношению адипогснных и остеогенных предшественников, независимо от вида индукции. МСК не происходит. Научное значение имеют и выявленные впервые особенности качественного состава МСК при острых лейкозах у детей. Так, установлено, что строма костного мозга при ОМЛ у детей до лечения не несет признаков выраженного повреждения, существенно не отличаясь от МСК условно нормального костного мозга, как в количественном, так и в качественном отношениях. При ОЛЛ, напротив, отмечается значительное снижение общего количества клоногенных фибробластов, снижение их способности к дифференцировке с преимущественным подавлением адипогенной трансформации. В разработанной нами культуральной модели взаимосвязи МСК и кроветворения показано, что МСК обладает колониестимулирующим воздействием на пролиферацию гранулоцитарно-макрофагальиых предшественников, близким к таковому стандартного лейкоцитарного фидера.