Индикация Staphylococcus aureus методами ДНК-диагностики в молоке и молочных продуктах

• Автор: Горяинова, Галина Михайловна
• Шифр специальности: 16.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 126 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Характеристика стафилококков.

1.2 и другие возбудители мастита коров

1.3 Санитарное значение золотистого стафилококка в молоке и

молочных продуктах.

1.4 Методы индикации

1.4.1 Микробиологические методы.

1.4.2 Методы ДНК диагностики

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы
2.1.1 Методы идентификации
2.1.2 Методы определения в молоке и
молочных продуктах.
2.1.3 Метод дифференциального получения и индикации
вегетативных и форм в молоке и молочных продуктах.
2.1.4 Методика выделения ДНК из .
2.1.5 Включение метки в ДНК методом никтрансляции
2.1.6 Получение и мечение ДНКзондов в реакции амплификации
2.1.7 Методика ДНКгибридизации на мембранных фильтрах с
ДНК, меченной тритием
2.1.8 Методика ДНКгибридизации на мембранных фильтрах с
ДНК, меченной биотином.
2.1.9 Методика гибридизации колоний.
2.1. Методика полимеразной цепной реакции
2.1. Амплификация ДНК методом рассеянной затравки
2.1. Статистическая обработка результатов





Результаты исследований.
Разработка методики ускоренной индикации в молоке и молочных продуктах на основе
полимеразной цепной реакции.
Разработка методики ускоренной индикации в молоке и молочных продуктах с использованием
генных зондов.
Идентификация бактерий на основе гомологии ДНК для ускоренной оценки микробных контаминаций молока от
коров, больных маститом.
Оценка методов ДНКдиагностики для быстрой индикации при мониторинге молока и молочных
продуктов
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Методика идентификации бактерий на основе гомологии ДНК для ускоренной оценки микробных контаминации молока, от коров больных маститом. Стафилококки широко распространены в природе, обитают на кожном покрове и слизистых оболочках дыхательных путей, пищеварительных и половых органов животных. При снижении устойчивости организма они являются причиной многих заболеваний. По морфологическим признакам стафилококки представляют собой правильной шаровидной формы клетки, размером 0,,5 мк располагающиеся единично, парами или гроздьями, , , . Стафилококки не имеют жгутиков, не образуют капсул и спор. При окраске по Граму они удерживают первоначальную окраску после обработки раствором Люголя и спиртом и считаются наиболее выраженными грамположительными микроорганизмами. Метаболизм респираторный или ферментативный. Продуцируют катапазу. Могут утилизировать широкий спектр углеводов. В анаэробных условиях основным продуктом ферментации глюкозы является молочная кислота. В аэробных условиях основной продукт уксусная кислота с небольшим количеством СОг 4, б, 8, , . Многие из стафилококков патогенны, вызывают различные заболевания и интоксикации у человека и животных. Патогенные золотистые стафилококки . Кроме перечисленных токсинов, стафилококки продуцируют фермент коагулазу, под воздействием которой плазма крови животных коагулируется, а также фибринолизин фермент, растворяющий фибрин. Выраженная патогенетическая активность стафилококков обусловлена также наличием у этих микроорганизмов гиалуронидазы или диффузионного фактора способствующего проникновению микробов в ткани 1, ,,. Все штаммы золотистого стафилококка вырабатывают коагулазу, три гемолизина а, р и А, различающиеся по типу и степени гемолиза овечьих, кроличьих и человеческих эритроцитов. Каждый штамм часто образует более одного гемолизина. Бетагемолизин является общим для штаммов, выделенных из источников животного происхождения. Рост на скошенном агаре обильный, непрозрачный, гладкий, ровный, влажный, белого, желтого или оранжевого цвета. Большинство штаммов вырабатывают каротиноидный пигмент от насыщенооранжевого до палевожелтого цвета в зависимости от условий роста. У одного и того же штамма пигмент может быть различным , , . Стафилококки образуют Б, Я, б и Ь формы колоний. Колонии Бформы круглые, размером мм, выпуклые, мутноватые, гладкие, блестящие. Имеют характерную окраску желтую, темнозолотистую, лимонножелтую, кремовую, палевую или белую. Окраска колоний зависит от наличия пигмента из группы каротиноидов, нерастворимых в воде, но растворимых в эфире, бензине, ацетоне, хлороформе и алкоголе. Он возникает только в присутствии кислорода и хорошо выражен при выращивании на средах, содержащих углеводы, кровь и молоко 6, , , , , . Колонии бформы образуются при замедлении роста микроба вследствие нарушения метаболизма. Такие колонии выявляют в старых культурах на средах, содержащих соли лития или бария. Также возникновение вформы колоний наблюдается под действием антибиотиков. Б, Л и б варианты обладают различной антигенной структурой. У животных, иммунизированных Я и в штаммами, не вырабатывается иммунитет к исходному Б штамму. Антигены Б и II вариантов могут быть разделены специфическими сыворотками. Ьформы колоний стафилококков получают путем обработки культур патогенных стафилококков пенициллином. Они представляют собой шаровидные тела различной величины, вакуолизированные тела или мельчайшие зернистые образования, проходящие через бактериальные фильтры. При посевах на сывороточные среды без пенициллина Ьформа реверсирует в исходное состояние , , , , , , , , 0, 8. В аэробных условиях стафилококки используют углеводы как источник углерода и энергии. Гексозы, пентозы, дисахариды и сахарные спирты метаболизируются, образуя кислоту. Не вырабатывается кислота из арабинозы, целлобиозы, декстрина, инозита, рафинозы, рамнозы и ксилозы. Эскулин и крахмал не расщепляют, гидролизуют гиалуроновую кислоту. Ацетоин вырабатывается как конечный продукт метаболизма глюкозы. Редуцируют нитраты. Продуцируют аммиак из аргинина. При расщеплении цистеина могут давать следы Н.