Технология приготовления и антигенные свойства ассоциированной инактивированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота

• Автор: Вазир Ясер
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 145 с. : ил.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Вирусная диарея крупного рогатого скота.

1.1.1. Таксономическое положение и основные биологические свойства вируса вирусной диареи крупного рогатого скота.

1.1.2. Структурная характеристика вируса вирусной диареи крупного рогатого скота.

1.2. Аденовирусная инфекция КРС

1.2.1. Общая характеристика аденовирусов.

1.2.2.Сведения об аденовирусной инфекции крупного рогатого

скота.

1.2.3. Структурная характеристика аденовириона, структура вирусного нуклиокаисида

1.2.4. Основные структурные белки аденовириона .

1.2.5. Антигенная структура белков.аденовирусов

1.3.Клиникоэпизоотологические особенности и патогенез вирусной диареи КРС.
1.4. Клиникоэпизоотологические особенности и патогенез
аденовирусной инфекции КРС.
1.5. Специфическая профилактика БД КРС.
1.6. Специфическая профилактика аденовирусной инфекции КРС
1.7.Иммуномодуляторы, их природа и иммуномодулирутощий эффект
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы и исследования.
2.2 Результаты исследований
2.2.1. Отработка культивирования аденовируса и вируса вирусной диареи с инфекционными титрами не ниже 6,0 ТЦДмл.
2.2.2. Очистка и концентрирование аденовируса КРС и вируса вирусной диареи КРС.
2.2.3. Отработка оптимальных условий инактивации полученных вирусов.
2.2.4. Изготовление экспериментальных серий моно и ассоциированных вакцин и сравнение их свойств на разных видах животных
2.2.5. Оптимизация схемы введения ассоциированной вакцины.
2.2.6.Влияние срока хранения на антигенную активность ассоциированной инактивированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
2.2.7.Исследование влияния иммуномодуляторов на антигенные свойства вакцины
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
4. ВЫВОД1Л.
5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
6. РЕКОМЕНДАЦИИ НО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ .
7.СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ.0
Список условных обозначений и сокращений
АГ антиген Адено аденовирус АТ антитело БД вирусная диарея
БИРТ вирус инфекционного ринограхеита ВКЧС вирус классической чумы свиней ВЫ антитела вируснейтрализующие антитела ВНА вируснейтрализирующис антитела
ВНИТИБП государственное научное учреждение Всероссийский научноисследовательский и технологический институт биологической промышленности
ВПБО вирус пограничной болезни овец ВПГ3 вирус парагриппа3 ГМФКа гексаметафосфат натрии ГМФЫа гексаметафосфат натрия ГОА гидроокись алюминия ЖКТ желудочнокишечный тракт ИРТ инфекционный римотрахеит ИФА иммуноферментный анализ кД кело Дальтон КРС крупный рогатый скот
КСТ перевиваемые культуры клеток эпителия коронарных сосудов теленка
КЧС классическая чума свиней
МГАВМиБ Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии МПА мясопептонный агар МПБ мясопептонный бульон МПГТБ мясопептонный печеночный бульон МРС мелкий рогатый скот НЦП нецитопатогенный ПБО пограничная болезнь овец ИГ3 парагрипп3 ПЭГ полиэтиленгликоль реакция нейтрализации РС респираторносинцитиальный вирус РСК реакция связывания комплимента РТГА реакция торможения гемагглютинации
Т1перевиваемые культуры клеток почки теленка.
ТБ культура клеток тестикулов бычка ТЦД тканевая цитопатическая доза
ФБРТ фосфатный буферный раствор с твином
ФБФР фосфатный буферный физиологический раствор
ФГОУ ВПО федеральное государственное образовательное учреждение
высшего профессионального образования
Ц 1 центральная нервная система
Д цитопатогенный
Ц цитопатогенный агент
Ц Д цитопатическое действие
ЦПЭ цитопатический эффект
5 5 i
тысяча нуклеотидов
десятый логарифм
открытая рамка считывания

Введение


Исследовать влияние иммуномодуляторов на антигенные свойства вакцины. Впервые разработана ассоциированная инактивированная концентрированная вакцина против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота. Предложена модифицированная методика получения очищенных и концентрированных препаратов аденовирусов и вируса вирусной диареи КРС, пригодных для создания вакцин. Дано научное обоснование и показана эффективность применения иммуномодуляторов и ассоциированной инактивированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота. Практическая значимость работы. Результаты исследований во шли в нормативную техническую документациювременнаяинструкция по изготовлению и контролю вакцины ассоциированной концентрированной инактивированной против аденовирусной инфекции и вирусной диа
реи крупного рогатого скота технические условия изготовления и контроля вакцины ассоциированной концентрированной инактивированной против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота наставление по применению ассоциированной инактивированной концентрированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота. Полученные результаты являются основой для дальнейших исследований механизмов и закономерностей формирования поствакцинального противовирусного иммунитета у КРС и могут быть использованы при изучении патогенеза и иммуногенеза инфекций, вызываемых аденовирусами и вирусом вирусной диареи КРС. Полученные результаты используются в учебном процессе по дисциплине Молекулярная биология вирусов для студентов 4 и 5 курсов ветеринарнобиологического факультета ФГОУ ВПО МГАВМиБ. Апробации работы. Результаты работы доложены на международной научной практической конференции молодых ученых ВНИиТИБП, Щелково, , 3ей конференции по учебнометодической, воспитательной и научнопрактической работе ФГОУ ВПО МГАВМиБ Москва, конференции по актуальным проблемам инфекционной патологии и иммунологии животных Москва, , конференции Вопросы физикохимической биологии в ветеринарии Москва, . Публикации. По материалам диссертации опубликовано научных ста гей, в т. ВАК РФ. Структура н объем работы. Диссертация изложена на 5 страницах и содержит следующие разделы введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, приложения. Список использо
ванной литературы включает 7 источников, из которых 8 иностранных авторов. Работа иллюстрирована рисунками и таблицами. Личный вклад соискателя. Работа выполнена соискателем самостоятельно. В выполнении отдельных этапов, связанных с культивированием, очисткой и концентрированием вирусов, принимали участие к. И.В. Третьякова, к. Т.П. Лобова, д. Е.И. Ярыгина, за что автор приносит им благодарность. Основные положения и результаты, выносимые на защиту. Вирусная диарея зарегистрирована во всех странах мира Великобритании 3, 7,1, Канаде 8, 1, Италии 1, 5, Испании 0, Австралии 5, Бельгии 4, Египте 6, 5, Японии 3, Австрии 2, России и др. В некоторых штатах США обнаруживают до серопозитивпых животных . Вирус вирусной диареи К является типовым представителем рода ivi. До года род ivi входил в состав семейства vii, которое включает РНКсодержащие диаметром нм оболочечные вирусы с кубическим икосаодрическим типом симметрии нуклеокапсида. Впервые термин пестивирус был введн в году 9 для того, чтобы сгруппировать три антигенно родственных вируса классической чумы свиней, вирусная диарея болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота и пограничной болезни овец. В году Международным комитетом по таксономии вирусов было принято решение о переводе рода ivi в семейство vivii 6, 7, 0. Но действию на культуру клеток различают два биотипа вируса вирусной диареи КРС цитопатогенные ЦП и нецитопатогеные НЦГ1. Клетки, инфицированные цитопатогенным вирусом диареи КРС, погибают в процессе апоптоза 7, 9. ППЭК и телят ППТ, эпителий кожи лошади ЭКЛ, эпителий коронарных сосудов телят КСТ и др.