Тест-системы на основе полимерных микросфер для лабораторной диагностики инфекционного бронхита кур

• Автор: Ондзе Урбен Боско
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 138 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Таксономия вируса ИБК.

1.2. Характеристика вируса ИБК.

1.2.1. Морфология и химический состав

1.2.2. Устойчивость к физикохимическим воздействиям.

1.2.3. Антигенная структура

1.2.4. Антигенная вариабельность.

1.3. Особенности иммунитета при ИБК

1.4. Лабораторные методы диагностики ИБК.

1.4.1. Реакция гемаггл юти нации с трипсинизированным вирусом
1.4.2. Реакция непрямой гемаггл ют и наци и
1.4.3. Реакция связывания комплемента
1.4.4. Реакция диффузной преципитации
1.4.5. Реакция иммунофлуоресценции.
1.4.6. Иммуноферментный анализ.
1.4.7. Полимеразная цепная реакция.
1.5. Использование полимерных микросфер в диагностике инфекционных заболеваний.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы исследования
2.1.1. Антигены
2.1.2. Сыворотки.
2.1.3. Полимерные суспензии
2.1.4. Буферные растворы и реагенты
2.1.5. Оборудование.
2.2. Методы исследования
2.2.1. Метод очистки и концентрирования вируса ИБК
2.2.2. Метод выделения иммуноглобулина с использованием
ПЭГ
2.2.3. Определение белка
2.2.4. Иммунохимическая характеристика препаратов.
2.2.5. Оценка качества полимерных суспензий.
2.2.6. Получение антительных латексных диагностикумов и контрольного латекса.
2.2.7.Метод сенсибилизации ПМ иммуноглобулиновой фракцией сыворотки крови кур.
2.2.8. Определение концентрации 1, адсорбированного на поверхности полимерных микросфср
2.2.9. Метод сенсибилизации ГГМ, модифицированных протеином А,
антителами сыворотки крови кур
2.2 Постановка и учет результатов РАЛ
2.2 Постановка и учет результатов ИФА
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Оценка качества полимерных суспензий при создании иммунодиагностических гестсистсм
3.2. Разработка технологии получения латексной тестсистемы на основе антигенов вируса ИБК
3.3. Испытание эксперименттьных серий латексных диагностику
мов на основе антигенов вируса ИБК
3.4. Разработка технологии получения латексной тестсистемы на основе антител против вируса ИБК
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


По заключению экспертов антительный латексный диагностикум является специфичным, достаточно чувствительным и может быть рекомендован для контроля напряженност и поствакциналыюго иммунитета, ретроспективной диагностики ИНК и серологического мониторинга данного заболевания. Антигенный латексный диагностикум также является специфичным и может быть использован для диагностических и технологических целей при тестировании биологического материала, содержащего не менее 5,0 1ц ЭИДзд вируса ИБК. Комплект НТД на латексную тестсистему для выявления антигена вируса ИБК в РАЛ. В каждый комплект входят технические условия, инструкция по изготовлению и контролю латексного диагностикума и наставление по его применению. Изготовление чувствительного и специфичного антительного латексного препарата для диашостики ИБК возможно только при работе с очищенным и концентрированным вирусом ИБК. Синтетическими носителями вируса ИБК могут быть как полистирольные микросферы, не содержащие на своей поверхности функциональные группы. Иммобилизация антигена вируса ИБК на ПМ происходит за счет физической адсорбции. На чувствительность антительных латексных препаратов для диагностики ИБК влияет жирорастворимый краситель и наличие альдегидных групп на поверхности ПМ. ИБК могут быть полистирольные микросферы, содержащие на своей поверхности как функциональные карбоксильные группы, гак и рсакционносиособныс альдегидные группы, модифицированные протеином А. Разработанные латексные тссгсистсмы могут быть использованы для диагностики ИБК и технологических целей. Установление вирусной природы инфекционною бронхита относится к году, когда американские исследователи i впервые выяснили, что возбудителем респираторной болезни цыплят является фильтрующийся вирус . Культивирование вируса ИБК в развивающихся куриных эмбрионах впервые осуществили и С. В. в году . Позднее было установлено, что вирус ИБК содержит РНК 7. С использованием электронной микроскопии была исследована ультраструктура внриона , . Па основании наличия РНКсодержащего генома, размеров и морфологии, отличающих ею от других вирусов, вирус ИБК стал прототипом новой группы вирусов, в которую вошли также вирус гепатита мышей и вирусы, выделенные от людей с простудными заболеваниями III. Эту новую группу назвази коронавирусами вследствие морфологических особенностей, хорошо заметных на негативно окрашенных вирусных препаратах оболочка их вирионов содержит на своей поверхности большие, радиально расположенные шипы, напоминающие корону , 0. Вирус ИБК относится к семейству vii, которое включает 2 рода vi и vi. РНКсодержащих вирусов оно отличалось морфологией вириона и внутриклеточными сайтами почкования. Род vi включает вирус ИБК IV, коронавирус индюков V, респираторный и кишечный коронавирусы человека V9 и ОС, а также видов коронавирусов млекопитающих вирусы гепатита мышей
V, сиалодакриаденита крыс V, коронавирус телят V, вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней V, энцефаломиелита свиней V, респираторный коронавирус свиней V, коронавирус собак V, вирус инфекционного перитонита кошек IV, кишечный коронавирус кошек V и коронавирус кроликов V. Род vi включает вирусы Берне и Бреда, поражающие лошадей и крупный рогатый скот, а также торовирусы человека, свиней, коз, кроликов и диких мышей. Морфология и химический состав. Вирионы коронавирусов имеют сферическую форму и диаметр от до 0 нм. Геном представляет собой одноцепочечиую молекулу РНК плюсцепь длиной около 0 нуклеотидов она полиаденилирована и имеет кэпструктуру 4. Геномная РНК инфекционна при введении в клетки эукариот 5, 6. Вирионы содержат три основных структурных белка , и М, и четвертый, минорный оболочечный белок или Е. Молекулы основного фосфопротсина кД, взаимодействуя с геномной РНК, образуют гибкий, протяженный нуклеокапсид со спиральной симметрией, диаметром 1 нм. Нуклеокапсид окружает липопрогсиновая оболочка, которая формируется i шероховатого эндоплазматического рстикулума или аппарата Гольджи зараженных клеток. Морфогенез вирионов происходит в цитоплазме, а созревание в цистернах или везикулах клеток мишеней. Ультраструктура вириона инфекционного бронхита кур представлена на рисунке 1.