Разработка методов иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней

• Автор: Каньшина, Анжелика Владимировна
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 123 с. : ил.

В связи с этим представляется актуальным и целесообразным использовать в реакциях в качестве стандартного антигена рекомбинантный белок, к преимуществам которого относится неинфекционность, стабильность, известный химический состав, отсутствие посторонних белков и нуклеиновых кислот. Для использования в ИФА самым подходящим рекомбинантным белком является нуклеокапсидный протеин гЫС, так как, вопервых, наибольшее количество вырабатываемых антител в организме при заражении вирусом РРСС образуется на нуклеокапсидный белок Вовторых, нуклеокапсидный белок имеет общие эпитопы для антител, полученных на вирус РРСС как европейской, так и американской геногрупп ,. И, в третьих, исследования ряда авторов показали перспективность использования иммуноферментных тестсистем на основе этого рекомбинантного белка для диагностики РРСС ,,7. Поэтому разработка метода диагностики РРСС с использованием рекомбинантного нуклеокапсидного белка вируса РРСС является актуальной задачей для практической ветеринарии. Цели и задачи исследования. Основная цель наших исследований заключалась в разработке непрямого варианта иммуноферментного анализа с использованием в качестве антигена рекомбинантного белка гМС для выявления антител к вирусу РРСС. ИФА с использованием рекомбинантного нуклеокапсидного белка гЫС для исследования сывороток крови на наличие антител к вирусу РРСС после заражения и иммунизации животных разными вакцинами. Научная новизна исследований. Впервые в России разработана тестсистема на основе непрямого варианта ИФА с применением рекомбинантного нуклеокапсидного белка гЫС для обнаружения антител к вирусу РРСС в сыворотках крови свиней. Предложена тестсистема на основе прямого сэндвичварианта ИФА для оценки активности рекомбинантного нуклеокапсидного белка гЫС и выявления антигена вируса РРСС. Оптимизирован блокирующий вариант ИФА для выявления антител к вирусу РРСС в сыворотках крови свиней. Показана корреляция между результатами выявления антител с помощью тестсистемы на основе непрямого варианта ИФА с применением рекомбинантного белка гЫС и коммерческих наборов ИФА фирмы ЮЕХХ США и фирмы ШРИА Испания. ИФА на основе рекомбинантного нуклеокапсидного белка гЫС. Практическая значимость исследований. На основании проведенных исследований разработаны иммуноферментные тестсистемы для обнаружения антигена или антител к вирусу РРСС. Методика выявления и титрования антигена вируса репродуктивнореспираторного синдрома свиней в прямом сэндвич варианте ИФА утверждена 5г. ЫС утверждена 5г. Методические рекомендации по выделению вируса репродуктивнореспираторного синдрома свиней РРСС с использованием альвеолярных макрофагов свиней утверждены 5г. Публикации научных исследований. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ. Апробация работы. Материалы диссертации доложены на научной конференции Достижения молодых ученых в ветеринарную практику Владимир,г. ВНИИЗЖ в гг. Структура и объем работы. Диссертация изложена на 3 страницах, иллюстрирована таблицами и рисунками. Список используемой литературы включает 9 источников, из которых 1 иностранных. Тестсистема на основе прямого сэндвичварианта ИФА для оценки активности рекомбинантного нуклеокапсидного белка гЫС и выявления антигенов вируса РРСС. Тестсистема на основе непрямого варианта ИФА с использованием в качестве антигена рекомбинантного нуклеокапсидного белка гЫС для выявления антител к вирусу РРСС в сыворотках крови свиней методом одного разведения. Результаты сравнения тестсистемы на основе непрямого варианта ИФА с использованием рекомбинантного нуклеокапсидного белка гЫС с наборами ИФА фирмы ЮЕХХ США и фирмы Н1РИА Испания. Результаты использования разработанных тестсистем для определения антител к вирусу РРСС в сыворотках крови зараженных и вакцинированных свиней и для ретроспективной диагностики заболевания свиней РРСС. Исследования по диссертационной работе выполнены в гг. Всероссийском научноисследовательском институте защиты животных ВНИИЗЖ, г. Владимир. Автор выражает искреннюю благодарность научному руководителю, к. В.Г. Андрееву и сотрудникам института д. Т.З. Байбикову, д. В.Л. Узюмову, к. С.В. Безбородовой, Н. С. Мудрак, Луговскому, к.