Применение полимеразной цепной реакции для идентификации микобактерий и ее диагностическая значимость при туберкулезе крупного рогатого скота

• Автор: Осипова, Елена Петровна
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 147 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
1. Введение

2. Обзор литературы

2.1. Общая характеристика заболевания.

Возбудитель, эпизоотологические данные и клиническое проявление туберкулеза у крупного рогатого скота

2.2. Методы диагностики туберкулеза крупного рогатого скота

2.3. Методы прижизненной диагностики

2.3.1. Туберкулинодиагностика аллергическая диагностика, внутрикожная туберкулиновая проба

2.3.2. Серологическое исследование

2.4. Методы послеубойной посмертной диагностики

2.4.1. Патологоанатомическое исследование

2.4.2. Бактериологическое исследование
2.4.2.1. Бактериоскопическое исследование
2.4.2.2. Культуральное исследование
2.4.2.3. Биологическое исследование биопроба
2.5. Полимеразная цепная реакция при диагностике
туберкулеза крупного рогатого скота
3. Собственные исследования
3.1. Материалы и методы
3.1.1. Исследования различных видов культур микобактерий
3.1.2. Исследования экспериментально зараженных М. vi
телок
3.1.3. Исследования в благополучных и
неблагополучных по туберкулезу хозяйствах
3.1.4 Сбор биоматериала, обработка его и выделение ДНК перед постановкой полимеразной цепной реакции
3.1.5. Методика постановки полимеразной цепной реакции с использованием тестсистемы X3X
4. Результаты исследований
4.1. Исследования полимеразной цепной реакцией различных видов культур микобактерий
4.2. Сравнительное изучение диагностической ценности ПЦРметода и традиционных методов диагностики туберкулеза на экспериментально зараженных М. vi телках
4.3. Изучение диагностической ценности ПЦРметода в благополучных по туберкулезу хозяйствах,
где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями
4.4. Изучение диагностической ценности ПЦРметода в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах
5. Обсуадение полученных результатов
6. Выводы
7. Практические предложения
8. Список использованной литературы
1. ВВЕДЕНИЕ
1. Актуальность темы. Среди инфекционных болезней животных особенного внимания заслуживает туберкулез крупного рогатого скота, наносящий большой экономический ущерб животноводству и представляющий серьезную опасность для здоровья людей в настоящее время.
Учитывая сложившуюся ситуацию по туберкулезу людей в мире, Всемирная организация здравоохранения и Международный Союз борьбы с туберкулезом объявили туберкулез Проблемой всемирной опасности и Экономическим бедствием XXI века, а марта Всемирным днем борьбы против туберкулеза.
В России Постановлением правительства 2 от июня года утверждена целевая программа Неотложные меры борьбы с туберкулезом в России на годы, а Постановлением 2 от декабря г. утвержден Федеральный закон О предупреждении распространения туберкулеза в Российской Федерации.
Известно, что основным звеном в проведении профилактических и оздоровительных мероприятий при туберкулезе животных является своевременная и точная диагностика болезни. Для прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота основным, массовым и доступным для применения в широкой ветеринарной практике методом является внутрикожная туберкулиновая проба с применением ППДтуберкулина для млекопитающих.
В настоящее время диагностика туберкулеза крупного рогатого скота имеет две основные проблемы с одной стороны, выявление здоровых животных с парааллергическими или неспецифическими реакциями на туберкулин в благополучных хозяйствах, а с другой, недовыявление зараженных туберкулезом животных в неблагополучных хозяйствах. Поэтому, при проведении исследований на туберкулез в благополучных хозяйствах необходимо повысить специфичность, а в неблагополучных чувствительность диагностических исследований.
Учитывая масштабность проведения исследований на туберкулез, отстандартизовать организмы всех исследуемых животных по реактивности изза различных внешних и внутренних влияний мы не можем и вряд ли это возможно, так как в разных хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу, имеются разные животные с различным проявлением микобактериальной инфекции. Поэтому, прижизненная диагностика туберкулеза крупного рогатого скота на основе только аллергической внутрикожной туберкулиновой пробы в настоящее время становится недостаточной А.Х. Найманов, .
Лабораторные методы диагностики туберкулеза крупного рогатого скота являются трудоемкими, длительными до 6 мес. и не позволяют в короткие сроки поставить точный диагноз.
Одной из главных проблем при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота является выявление в благополучных хозяйствах реагирующих животных с парааллергическими реакциями, по причине сенсибилизации организма животных различными видами атипичных микобактерий А.Н. Шаров, , Донченко, , Н.П. Овдиенко, А.Х. Найманов, .
Актуальность


Целесообразность применения ПЦРметода в лабораторной диагностике туберкулеза крупного рогатого скота для дифференциации культур М. М. i и от других видов микобактерий и в качестве дополнительного экспрессметода при исследовании биоматериала от реагировавших на туберкулин и убитых с диагностической целью животных. Апробация работы. Межлабораторном совещании сотрудников ВИЭВ, Москва, . Публикации результатов исследований. По материалам диссертационной работы опубликовано пять статей. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 7 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений и списка литературы. Список использованной литературы включает 5 наименований, из них 4 иностранных автора. Работа иллюстрирована таблицами и 8 фотографиями. Общая характеристика заболевания. Туберкулез инфекционная, хронически протекающая болезнь животных всех видов и человека, характеризующаяся поражением органов и тканей с образованием в них туберкулов. Возбудитель бактерии из рода i, в который входят более самостоятельных видов. Микобактерии туберкулеза бычьего вида М. Микобактерии человеческого вида М. При подозрении на заболевание крупного рогатого скота туберкулезом проводят эпизоотологическое обследование. При этом обобщают и анализируют статистические данные ветеринарной отчетности о туберкулезе не менее чем за пять лет. Учитывают данные боенской статистики. Выясняют, когда и по каким ветеринарным документам поступили в хозяйство животные, условия их размещения в карантине, дату и результаты исследования в период профилактического карантина возможность контакта животных данного хозяйства на пастбищах, водоемах и скотопрогонных трактах с животными неблагополучных по туберкулезу хозяйств. Возбудитель туберкулеза может быть занесен в благополучные стада с необеззараженным обратом, доставленным с молочного завода, куда поступало молоко от больных туберкулезом коров из неблагополучной фермы. В таких случаях заболевание обычно регистрируют у телят. Одна из особенностей туберкулеза крупного рогатого скота заключается в том, что при заражении в молодом возрасте болезнь, как правило, начинает
проявляться у коров после первого, второго или третьего отела. Поэтому очень важно выяснить условия выращивания ремонтного молодняка в ранее неблагополучном по туберкулезу хозяйстве. Человек также может заражать крупный рогатый скот возбудителем туберкулеза бычьего вида, в случаях, если он сам болеет туберкулезом, вызванным М. Возбудитель туберкулеза человеческого вида сенсибилизирует крупный рогатый скот к туберкулину и лишь изредка вызывает ограниченные изменения, преимущественно в лимфатических узлах, регионарных местам проникновения микобактерий в организм животного. Поэтому, выясняют также наличие больных туберкулезом людей среди обслуживающего персонала. Анализ этих данных способствует своевременному и более точному установлению диагноза на туберкулез. Течение туберкулеза у крупного рогатого скота обычно хроническое, с постоянно нарастающими симптомами. От момента заражения до появления признаков болезни может пройти несколько месяцев или лет. Клинические признаки туберкулеза у крупного рогатого скота не всегда типичны. У одних больных животных они вообще могут отсутствовать, у других наблюдают неяркие симптомы, по которым можно лишь подозревать заболевание туберкулезом. При нормальных условиях кормления и содержания туберкулез у крупного рогатого скота обычно протекает без видимых клинических признаков. Клинические признаки болезни могут проявляться только при далеко зашедшем клиническом процессе. Чаще поражаются легкие, кишечник, вымя, а также заглоточные, подчелюстные, средостенные, бронхиальные, брыжеечные и другие лимфатические узлы. Каким бы путем ни возникло заболевание, оно поначалу носит в основном ограниченный характер в виде мелких очагов, преимущественно в легких. При легочной форме вначале повышается температура тела до С, появляется резкий, короткий и сильный кашель особенно по утрам, который потом становится слабым, частым.