Полимеразная цепная реакция и иммуноферментный анализ в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота

• Автор: Усольцев, Константин Валерьевич
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 134 с.

1.1 Биохимическая структура микобактериальной клетки

1.2 Иммунитет при туберкулезе

1.3.Методы диагностики туберкулеза крупного рогатого скота

1.3.1 Эпизоотологическис данные

1.3.2 Клинический метод

1.3.3 Аллергический метод

1.3.4 Патолгоанатомический и гистологический методы

1.3.5 Бактериоскопический метод

1.3.6 Бактериологический метод

1.3.7 Биологический метод

1.3.8 Серологическая диагностика

1.4 Иммуноферментный анализ
. .5 Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота иммуноферментным
методом
.6 Полимеразная цепная реакция
.7 Полимеразная цепная реакция в диагностике туберкулеза
I. Материалы и методы исследований
1.1 Материалы
1.2 Методы исследования
. Результаты собственных исследований
.2 Оценка методов выделения ДНК М.vi и проведение амплификации
азличными тестсистемами. Определение чувствительности полимеразной 1епной реакции. Определение специфичности полимеразной цепной реакции.
.2.1 Оценка методов выделения ДНК М.vi и проведение амплификации
азличными тестсистемами.
.2.1.1 Оценка метода выделения ДНК М.vi и проведения амплификации
огласно инструкции тестсистемы МТБсош ЦНИИ эпидемиологии.
.2.1.2 Оценка метода выделения ДНК .vi и проведения амплификации
огласно инструкции тестсистемы НПО Нарвак.
.2.1.3 Оценка метода выделения ДНК .vi согласно инструкции набора
еагентов Фастпреп ООО НПБО г. Пущино, Московская область, Вл. Баранов и проведение амплификации согласно инструкции тестсистемы ШО Нарвак.
.2.2 Определение чувствительности полимеразной цепной реакции.
.2.3 Определение специфичности полимеразной цепной реакции.
.1 Результаты комплексного исследования на туберкулез крупного рогатого
кота в хозяйствах республики Татарстан. РТ
. Обсуждение результатов
выводы
фактические предложения
Гписок литературы
ВВЕДЕНИЕ


Основная часть мелкогранулярных включений представлена, вероятно, рибосомами, осуществляющими синтез специфического белка. Наряду с рибосомами в цитоплазме микобактерий туберкулза имеются валютиновые гранулы в виде небольших до 0,1 мкм электроннооптических включений 8. В цитоплазме микобактерий туберкулеза встречаются липидные включения, локализующиеся по полюсам клетки. Они имеют более крупные размеры 0,3 0,6 мкм, округлую форму и окружены мембраной. Кроме того, в цитоплазме имеются плазмиды, содержащие двухцепочную ДНК образования определяющие многие свойства бактерий, связанные с размножением, патогеностью, устойчивостью к лекарственным препаратам и т. Ядерная структура, или нуклеоид, микобактерий отличается от ядер клеток высших организмов большой вариабельностью форм, отсутсвием ядрышка и мембраны, отделяющей ее от цитоплазмы. Она образована хроматиновыми структурами, расположенными в виде тяжей конгломератов, фазовых мембран 8. Химический состав микобактерий туберкулеза сложен и своеобразен. В него входят вода, белки, углеводы, липиды и соли. Установлен состав туберкулезных культур воды , органических веществ липиды, протеины, фосфатиды и др. При развитии тубекулезного процесса различные компоненты микробной клетки могут действовать как самостоятельно, так и совместно. Нельзя исключить возможность того, что одни из них несут защитные свойства, другие участвуют в развитии в организме повышенной чувствительности замедленного типа, третьи индуцируют антителообразование 1. В составе минеральных веществ микобактерий туберкулеза выявлены кальций, магний, железо, натрий, калий, фосфор, цинк и марганец в виде кальциевых и магниевых солей, а также глицеринофосфорной кислоты. Углерода содержится , азота 9, 5 7 9. Белки туберкулопротеиды составляют сухой массы микобактерий, из них около нуклеопротеиды и 8 свободные нуклеиновые кислоте 2. Нуклеиновые кислоты микобактерий изучены довольно подробно, определена полная последовательность генома М. В клеточных стенках микобактерий туберкулопротеиды находятся в составе сложных комплексов с полисахаридами и липидами. На долю полисахаридов приходится до сухой массы микобактериальных клеток и находятся они в клетке как в свободном, так и в связанном состоянии с белками, нуклеиновыми кислотами, фосфатидами и восками. Полисахариды микобактерий представлены в основном высшими мукополисахариды и нейтральными сахаридами. Клеточные стенки содержат также гексозамины. Установлено, что полисахариды являются одним из основных компонентов полисахаридобелковолипидного комплекса и определяют видовую принадлежность штаммов микобактерий 1 . Наиболее характерным для химического состава возбудителя туберкулеза является значительное количество липидов, составляющих от до их веса . С наличием липидных компонентов и избирательной проницаемостью клеточной стенки связывают кислотно и спиртоустойчивость микобактерий. Эти два фактора тесно взаимосвязаны, так как избирательность клеточной стенки обуславливается определенными компонентами липидного происхождения миколовые кислоты, некоторые полисахариды 4. У микобактерий выявлены три фракции липидов фосфатиды, жиры и воска, которые являются как резервными, так и структурными компонентами клетки. Липиды микобактериальной клетки своеобразны по химическому составу. Они содержат в значительных количествах группы соединений, отсутствующие у других микрооорганизмов, такие как некоторые фосфолипиды, миколовые кислоты. В клетках микобактерий встречаются самые крупные молекулы миколовых кислот Сбо С, боковые радикалы которых имеют до атомов углерода, а главные цепи являются сложными чрезвычайно вариабельными структурами. На основе различий в химической структуре миколовых кислот разработано несколько методов идентификации микобактерий и родственных микроорганизмов, которые имеют значение как в таксономических исследованиях, так и в лабораторной диагностике микобактериозов. Большое содержание липидов у микобактерий объясняется тем, что они входят в структуру клеточных стенок, образуя сложные полимеры с пептидами и полисахаридами.