Лабораторная модель для оценки иммуногенности вакцин против ринопневмонии лошадей

• Автор: Алексеенкова, Светлана Валерьевна
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 149 с. : ил.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Герпесвирусные инфекции лошадей

1.2 Патогенез и иммуногенез ВГЛ

1.3 Вакцины живые, инактивированные, генно инженерные

1.4 Биологическая активность вакцин для лабораторных животных и методы контроля иммуногенности вакцин

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.2.1 Культивирование вируса в культурах клеток

2.2.2 Культивирование вируса в организме лабораторных

животных

2.2.3 Иммунизация лабораторных животных

2.2.4 Полимеразная цепная реакция

2.2.5 Гистохимические исследования
2.2.6 Серологические исследования
2.2.7 Статистическая обработка полученных результатов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Изучение гуморального иммунного ответа у мышей
3.1.1 Изучение гуморального иммунного ответа в динамике у мышей зависимости от природы иммуногена
3.1.2 Эффективность комбинированного введения вакцинных препаратов при использовании различных схем иммунизации
3.2 Оценка напряжнности поствакцинального иммунного
ответа на модели ВГЛ1 энцефалита у мышей
3.2.1 Изучение нейропатогенных свойств ВГЛ
3.2.2 Селекция нейротропного штамма ВГЛ1 патогенного
для взрослых мышей
3.2.3 Оценка возможности использования адаптированного штамма ПП1 для контроля иммуногенности вакцин против РПЛметодом контрольного заражения
3.2.4 Определение оптимальной заражающей дозы адаптированного штамма для мышей
3.2.5 Лабораторное испытание иммуногенности вакцинного штамма
3.2.6 Определение оптимальной иммунизирующей дозы для различных вакцин
3.2.7 Экспериментальная оценка иммуногенности вакцин при однократной и двукратной иммунизации мышей против РПЛ
3.3 Оценка напряжнности поствакциналыюго иммунного ответа на модели ВГЛ1 аборта у мышей
3.3.1 Изучение влияния ВГЛ1 па беременность
3.3.2 Оценка напряжнности гашу иного ответа на
модели ВГЛ1 аборта у мышей
4.0БСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Как правило, интродукция ВГЛ1 в гстерологичную популяцию животных сопровождается летальностью до 0 . Представленные данные свидетельствуют об актуальности исследований, направленных на совершенствование средств специфической профилактики инфекции. Учитывая экономический фактор, естественно восприимчивые животные лошади в экспериментальной работе могут быть использованы в весьма ограниченном количестве. Эффективное решение может быть достигнуто путем моделирования инфекционного процесса на лабораторных животных. Проведнные ранее исследования на сирийских хомяках . ВГЛ1 не обладает для хомяков в отличие от лошадей эндотелиотропными свойствами. КуД ВГЛ1 хомякам вызывала энцефалит, характеризуемый репликацией вируса в нейронах и глиальных клетках. По мнению большинства исследователей такая лабораторная модель имеет ограничение использования при выяснении ряда вопросов патогенеза и иммуногенеза инфекции ВГЛ1. Рядом работ vv . С. . Vii . ВГЛ1 мышей линии В удается воспроизвести инфекционный процесс достаточно приближенный к естественному заболеванию лошадей. Моделирование на лабораторных животных иммунной реакции на различные препапаты герпесвируса лошадей с целью изучения особенностей иммунного ответа, обусловленного различной природой использованных вирусных препаратов, представляет значительный интерес. Успешное решение ряда аспектов этой задачи позволяет существенно продвинуться в познании иммуногенеза при герпесвирусной инфекции лошадей, что обеспечивает перспективу создания более эффективных и безопасных средств специфической профилактики болезни. В связи с этим целью работы было разработать лабораторную модель ВГЛ1 инфекции и изучить особенности формирования гуморальных реакций и устойчивости к ВГЛ1 на введение различных вирусных антигенов. ВАЬВс после введения рекомбинантной конструкции рГУТ. УТ. ВАЬВс. Установлено, что рекомбинантная плазмида р1УТ. ВГЛ1. Антитела могут быть выявлены в , РТГА и ИФА. Изучена динамика формирования иммунного ответа в зависимости от природы антигенов. Впервые разработана лабораторная модель неврологической формы ВГЛ1 инфекции на мышах линии ВАЬВс. Полученный селекцией штамм ПП ВГЛ1, патогенный для мышей в возрасте до дней, вызывает у них геморрагический энцефалит с летальным исходом до 0 после интраназальной или интрацеребральной инокуляции. Впервые изучены абортогенные свойства типичного эпизоотического штамма ПП1 ВГЛ1, циркулирующего на территории РФ, для лабораторных животных. Показано, что у беременных мышей линии ВАЬВс штамм ПП1 после подкожной инокуляции вызывает гибель эмбрионов с последующей их резорбцией или рождение нежизнеспособного приплода. Впервые на модели неврологической и абортивной форм ВГЛ1 инфекции на мышах линии ВАЬВс изучена напряжнность иммунного ответа в зависимости от природы антигенов, дозы антигенов, кратности иммунизации и способа контрольного заражения. Обнаружено усиление иммунного ответа при комбинированном введении рекомбинантной плазмиды рГУТЛ и вакцинного штамма СВ. Полученные результаты являются основанием для составления рекомендаций по контролю инактивированных и вирусвакцин против ринопневмонии лошадей, а также испытанию на реактогенность аттенуированнных штаммов и вакцин на их основе. Предлагаемый метод с использованием лабораторной модели существенно снижает затраты биопреприятий при производстве вакцин против ринопневмонии и позволяет, вследствие его доступности, проводить контроль на любой стадии производства препарата. Кроме того разработанная методика может быть использована в научных исследованиях полученный в ходе работы штамм, нейровирулентный для мышей линии ВАЬВс, может быть использован для изучения патогенеза и в частности иммуногенеза инфекции ВГЛ1, а также при испытании препаратов для антивирусной терапии. Разработаны в соавторстве Рекомендации по получению рекомбинантной плазмиды, содержащей гены гликопротеинов вируса ринопневмонии лошадей, и их применению с использованием оптимальных доз для иммунизации восприимчивых лабораторных животных, утвержднные директором ВИЭВ в г.