Культурная инактивированная вакцина против бешенства из штаммов "ВНИИЗЖ" и "ERA"

• Автор: Цеденхуу Пуревхуу
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 131 с.

1 перевиваемая клеточная культура

ИФА иммуноферментный анализ

КРС крупный рогатый скот

МАТ моноклональные антитела

МЛД мышиная летальная доза

МП микроноситель

мелкий рогатый скот

МФА метод флюоресцирующих антител

МЭБ Международное эпизоотическое бюро

ЛД ная летальная доза

Iлогарифм при основании 2 логарифм при основании

СПЭВ перевиваемая клеточная культура почки эмбриона свиньи
РСК реакция связывания комплемента
ПЦР полимеразная цепная реакция
ПАК полиакриловая кислота
II реакция нейтрализации
РПИФреакция прямой иммунофлюоресценции
ТФ ИФАтвердофазный иммуноферментный анализ
ТЦ Дя ная тканевая цитопатическая доза
ЦПД цитопатическое действие.
.I индекс иммуногенности вакцины
СОДЕРЖАНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .
2.1. Вирус бешенства и его свойства .
2.2. Эпизоотологические особенности бешенства .
2.3. Культивирование вируса бешенства .
2.4. Очистка и концентрирование вируса бешенства
2.5. Инактивация вируса и инактиванты .
2.6. Адъюванты и их использование в антирабических вакцинах
2.7. Определение качества вакцин против бешенства .
2.8. Заключение по обзору литературы.
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ .
Материалы
3.1. Вирусный материал
3.2. Культура клеток
3.3. Животные .
3.4. Питательные среды
3.5. Оборудование .
Методы
3.6. Культивирование клеток .
3.7. Культивирование вируса бешенства в монослое культуры клеток
ВНК
3.8. Культивирование вируса бешенства в суспензии культуры клеток
ВНК
3.9. Освежение штамма и подготовка посевного материала
3 Определение титра инфекционности вируса
3 Оценка иммуногенной активности инактивированных вакцин
3 Определение титра вируснейтрализующих антител в сыворотке
крови .
3 Определение стерильности вируссодержащей суспензии, антигена
и вакцины .
3 Определение безвредности вакцины .
3 Статистическая обработка результатов исследований
4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Культивирование штамма ВНИИЗЖ вируса бешенства .
4.2. Сравнительное изучение методов культивирования штамма
ВНИИЗЖ вируса бешенства в монослое и суспензии клеток ВНК .
4.3. Влияние способа подготовки посевного вируса на иммунобиологические свойства штамма ВНИИЗЖ .
4.4. Культивирование штамма ВНИИЗЖ вируса бешенства
с уменьшенным количеством сыворотки
4.5. Культивирование штамма вируса бешенства
4.6. Адаптация штамма вируса бешенства к перевиваемой куль
. туре клеток ВНК .
4.7. Культивирование штамма вируса бешенства в перевиваемой культуре клеток ВНК
4.8. Изучение патогенности штаммов ВНИИЗЖ и вируса бешенства .
4.9. Отработка режима инактивации вируса бешенства
4 Разработка технологии получения инактивированных адсорбиро
ванных и эмульсионных антирабических вакцин из штаммов ВНИИЗЖ и .
4 Иммуногенность вакцин, приготовленных из штамма ВНИИЗЖ
репродуцированного в суспензии и монослое клеток ВНК .
4 Иммуногенные свойства вакцины из штаммов ВНИИЗЖ
4 Влияние адъювантов на эффективность антирабической вакцины
4 Сохраняемость иммуногенности вакцин в процессе хранения
5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
6. ВЫВОДЫ .
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ .
8. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ .
4. ПРИЛОЖЕНИЯ .
1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Диссертация изложена на 2 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений и приложения. Диссертация иллюстрирована таблицами. Список использованной литературы включает 1 наименование работ, из них на русском языке. Благодарю моего научного руководителя доктора ветеринарных наук Валерия Васильевича Михалишина за постоянную помощь при выполнении и оформлении диссертационной работы, а также сотрудников лаборатории биотехнологии ФГУ Федеральный центр охраны здоровья животных за большую помощь при проведении экспериментальной части диссертации. Бешенство i остропротекающая болезнь теплокровных животных, характеризующаяся поражением центральной нервной системы. Классификация вируса. По классификации Международного Комитета по таксономии вирусов МКТВ, вирус бешенства относится к порядку vi, семейству vii, роду vi. Семейство vii включает большую группу вирусов, поражающих позвоночных животных. Род vi включает 7 генотипов. Морфология вируса. Морфология вируса бешенства впервые изучалась при помощи электронного микроскопа в году. Эти и последующие исследования позволили установить форму и размеры вириона, изучить его репликацию в клетке хозяина. Большинство частиц вируса имеет либо пулеобразную, либо бациллообразную форму. Длина и диаметр вирусной частицы вариабельны и имеют размеры на нм, в среднем 0 на нм , , , . В структуре вириона выделяют два компонента центральный плотный цилиндр, сформированный спиралевидным рибонуклеокапсидом. Этот цилиндр окружает тонкая оболочка толщиной не более 8 нм, покрытая снаружи китообразными элементами длиной нм и шириной 5 нм. Спиралевидный рибонуклсокапсид характеризуется очень высокой плотностью типа сжатой пружины. Структура вируса. Биохимические исследования показали, что вириоп состоит из однонитевой геномной РНК и 5 белков, характеризующихся определенными посттрансляционными модификациями. Рибонуклеопротеин содержит геномную РНК, связанную с тремя внутренними протеинами транскриптазой , нуклео протеи ном и фосфопротеином . Данные протеины вместе с РНК образуют активный РНКкомплекс, который контролирует как транскрипцию, так и репликацию , , 4,7, 4, 1. К другим структурным протеинам относятся матричный протеин М, расположенный на внутренней стороне оболочки вируса, и гликопротеин в, который образует поверхностные выступы. Гликопротеин Спротеин. Гликопротеин вируса бешенства является единственным антигеном, способным индуцировать вируснейтрализующие антитела и реагировать с ними. Ген, кодирующий гликопротеин, клонировали и определили последовательность аминокислот нескольких штаммов вируса бешенства. Все эти последовательности содержали единственный участок, кодирующий белок, состоящий из 4 аминокислот. Отмечается приблизительно ная гомология последовательностей на аминокислотном уровне у исследованных штаммов. Зрелый в протеин состоит только из 5 аминокислот, отграничивая Ытерминальный аминокислотный гидрофобный сигнальный пептид. Зрелый гликопротеин имеет три структурных домена Стерминальный цитоплазматический домен эндомен, содержащий аминокислотный остаток гидрофобный аминокислотный трансмембранный домен и наружный антигенный домен, простирающийся от трансмембраны до И конца эктодомсн. Эндодомен выполняет функции взаимодействия с М белком и внутриклеточного транспорта гликопротеина. Эктодомен гликопротеина играет ведущую роль в патогенезе болезни в приклсплении вирионов к мембране клетки, как инициирующий шаг вирусной инфекции, и связывание с нейтрализующими антителами. Изучение конформационных нейтрализующих эпитопов, картированных на эктодомене гликопротеина сайты I, II, III, показано, что III сайт ответственен за вирулентность вируса. Дальнейшие исследования показали, что присутствие положительно заряженной аминокислоты аргинин или лизин в позиции 3 является необходимым условием для поражения нервных клеток. Замена аргинина в позиции 3 на глютамин или изолейцин понижает нейропатогенность. Мутанты с измененной аминокислотой не способны инфицировать нервные клетки в связи с отсутствием возможности распознавания рецепторов.