Инфекционный ринотрахеит и вирусная диарея крупного рогатого скота : диагностика, молекулярно-биологические свойства возбудителей, эффективность противовирусных препаратов

• Автор: Глотова, Татьяна Ивановна
• Шифр специальности: 16.00.03, 16.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 364 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Характеристика инфекционного ринотрахеита

крупного рогатого скота

2. Латентная форма инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, ее влияние на диагностику, специфическую профилактику заболевания и

эпизоотологическое значение

3. Структура и функционирование генома вируса

инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота

4. Методы молекулярной биологии и их использование в

диагностике и молекулярной эпизоотологии инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота

4.1. Рестрикционное картирование.

4.2. Исследования по молекулярной эпизоотологии
инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
4.3. Конструирование молекулярных зондов для выявления
нуклеотидных последовательностей вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и их применение для диагностики болезни
4.4. Разработка и применение полимеразной цепной
реакции для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого.
4.5. Методы оценки полиморфизма ДНК
5. Иммунный ответ на инфекцию вирусом







инфекционного рииотрахеита крупного рогатого скота Экспериментальные инфекции, вызванные вирусом инфекционного рииотрахеита крупного рогатого скота Характеристика вирусной диареиболезни слизистых
крупного рогатого скота
Особенности клинического проявления вирусной
диареиболезни слизистых крупного рогатого скота.
Особенности патогенеза вирусной диареиболезни
слизистых крупного рогатого скота
Серологическая диагностика вирусной диареиболезни
слизистых крупного рогатого скота
Экспериментальные инфекции, вызванные вирусом вирусной диареиболезни слизистых крупного рогатого
скота.
Иммунология вирусной диареиболезни слизистых
крупного рогатого скота
Иммуносупрессивное действие нецитопатогенных и цитопатогенных биотипов вируса вирусной диареи
болезни слизистых крупного рогатого скота
Подавление врожденного иммунитета с последующим
установлением персистентной инфекции.
Роль вирусов инфекционного рииотрахеита и вирусной диареиболезни слизистых в развитии респираторных
болезней молодняка крупного рогатого скота.
Влияние вирусов на клетки эпителия респираторных
путей.
Влияние вирусов на иммунные механизмы
Применение противовирусных препаратов при инфекционном ринотрахеите и вирусной диарее
болезни слизистых крупного рогатого скота
. Заключение по обзору литературы.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Материалы и методы
2. Результаты исследований
2.1. Усовершенствование методики постановки реакции
нейтрализации для серологической диагностики вирусной диареиболезни слизистых крупного рогатого скота
2.2. Распространение инфекционного ринотрахеита и
вирусной диареиболезни слизистых крупного рогатого скота в хозяйствах Сибири
2.3. Спектр возбудителей инфекционных заболеваний, 2 выделенных от больных телят, в неблагополучных по инфекционному ринотрахеиту крупного рогатого скота хозяйствах
2.4. Выделение и характеризация изолятов вируса
инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота
от животных в Сибири.
2.5. Выделение и характеризация изолятов вируса вирусной
диареиболезни слизистых крупного рогатого скота от животных в Сибири
2.6. Разработка диагностической ПЦР для выявления
вируса ИРТКРС
2.7. Сравнительная эффективность полимеразной цепной
реакции, молекулярной гибридизации и метода выделения вируса в культуре клеток в диагностике ИРТКРС.
2.8. Типирование Российских штаммов и изолятов вируса 2
ИРТ КРС при помощи ПЦРПДРФанализа.
2.9. Сравнительное изучение патогенности штаммов и
изолятов вируса ИРТ КРС на естественно восприимчивых животных
2 Патогенность изолятов вируса вирусной диареи
болезни слизистых крупного рогатого скота для естественно восприимчивых животных в зависимости
от их интерферон индуцирующей активности
2 Смешанная экспериментальная инфекция телят,
вызванная вирусами инфекционного ринотрахеита и вирусной диареиболезни слизистых крупного рогатого скота.
2 Противовирусная активность препаратов различных
классов в опытах i vi в отношении вирусов инфекционного ринотрахеита и вирусной диареиболезни слизистых крупного рогатого скота.
2 Лечебнопрофилактическая эффективность препарата 9 1фенил2,3диметил4йодпиразолон в опытах на животных с использованием экспериментального заражения вирусами инфекционного ринотрахеита и вирусной диареиболезни слизистых крупного рогатого скота.
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
ЛИТЕРАТУРА


Совпадение положительных результатов выявления вируса в культуре клеток и ДНКзондом составило . О разработке тестсистемы для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом молекулярной гибридизации сообщал А. Г. Глотов . ДНКзонд с клонированным фрагментом вирусного генома, конъюгат стрептавидина со щелочной фосфатазой, красители для фосфатазы, раствор протеиназы для обработки проб от животных и раствор для гибридизации. ДНКзонд был получен на основе одноИвйбштьДЖ фффеМШность тестсистема показала при массовых эпизоотологических обследованиях, особенно при исследовании спермы инфицированных быков1 гроизводителей на племпредприятиях. В гг. Урала и Сибири, около проб биоматериала от коров с гинекологической патологией и телят с признаками респираторных заболеваний. Включение тестсистемы в комплекс профилактических и противоэпизоотических мероприятий за счет сокращения сроков на проведение диагностических исследований, ее высокой чувствительности, специфичности и способности выявлять латентных вирусоносителей повышает его эффективность в среднем в 1,7 раза. В настоящее время при помощи тестсистемы оздоровлены 6 головных племпредприятий Сибири. Разработка и применение полимеразной цепной реакции для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота
В настоящее время, важным диагностическим инструментом в ветеринарной вирусологии является полимеразная цепная реакция ПЦР. К числу ее достоинств относится высокая специфичность и быстрота проведения анализа. С помощью этого метода могут определяться низкие концентрации ДНК вируса, которые не выявляются методами дот или блотгибридизации. Эти преимущества делают ПЦР незаменимой при диагностике персистирующих вирусных инфекций, для которых характерны низкие концентрации вируса в тканях и биологических жидкостях организма в латентный период заболевания. К числу таких инфекций относятся заболевания, вызываемые герпесвирусами животных. Поскольку геном герпесвирусов представляет собой молекулу ДНК, их ПЦРдиагностика проводится обычно в классическом варианте, когда необходима только пара праймеров, комплементарных определенному участку геномной ДНК. Правильный выбор их определяет эффективность и воспроизводимость ПЦР. Для диагностики вирусной инфекции необходимо, чтобы выбранная для амплификации область генома вируса была достаточно консервативной внутри вида и не имела гомологии с другими вирусами. Первые сообщения об использовании ПЦР для выявления ДНК вируса ИРТ КРС относятся к началу х годов. В качестве мишеней амплификации исследователи выбирали гены гликопротеинов вируса . Vi, В. Р. iv . Xi . V. . ПЦР, или ПЦР в комбинации с блотгибридизацией в порядке достижения наивысшей чувствительности i . ДНК V1 разработали высокоспецифичную нестедПЦР с праймерами на район гена V . Чувствительность при исследовании вируссодержащей суспензии составила 4,5 ТЦДМл Комбинация нестедТЩР и обратной дотблотгибридизации позволила выявлять вирус в титре 5x1 Р ТЦЦо,5мл в пробах спермы. Проведение полного анализа составляло 8 часов. V . ИРТ в сперме разработали ПЦР с внутренним контролем. Для сравнения чувствительности ПЦР и выделения вируса провели исследования по длительности выделения вируса со спермой 8 быков, зараженных интрапрепуциально. Чувствительность ПЦР оказалась в раз выше, чем выделение вируса в чувствительной культуре клеток. Vi . ПЦР с праймерами на ген выявляли вирус в пробах носовых истечений более дней после экспериментального заражения КРС. Результаты выделения вируса и ПЦР хорошо коррелировали при исследовании полевых проб. Также было успешным выявление ДНК вируса в фетальной сыворотке и пробах спермы. ПЦР для обнаружения V1 в сперме инфицированных быков в сравнении с выделением вируса. ПЦР с праймерами на район гена для прямого обнаружения ДНК V1 в клинических образцах, включая сперму. Чувствительность составила 1 ТЦДзомл. Разработчики предлагают использовать данную ПЦР для мониторинга банкок . ПЦР для выявления ДНК V1 в селективно обработанной сперме быка.