Иммунобиологические свойства возбудителей парвовирусного энтерита и чумы плотоядных, используемых для изготовления биопрепаратов

• Автор: Галкина, Татьяна Сергеевна
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 138 с. : ил.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Парвовируеный энтерит собак.

1.1.1. Общие сведения

1.1.2. Эпизоотология.

1.1.3. Патогенез

1.1.4. Клинические признаки

1.1.5. Характеристика возбудителя

1.1.5.1. Морфология возбудителя

1.1.5.2. Устойчивость

1.1.5.3. Антигенная вариабельность и родство.

1.1.5.4. Локализация вируса и вирусовыделение

1.1.5.5. Антигенная и гемагглютинирующая активность
1.1.5.6. Экспериментальное заражение.
1.1.5.7. Культивирование вируса
1.1.6. Лабораторная диагностика
1.1.7. Специфическая профилактика
1.2. Чума плотоядных
1.2.1. Общие сведения
1.2.2. Эпизоотология.
1.2.3. Патогенез.
1.2.4. Клинические признаки
1.2.5. Характеристика возбудителя
1.2.5.1. Морфология возбудителя
1.2.5.2. Устойчивость
1.2.5.3. Антигенная вариабельность и родство
1.2.5.4. Локализация вируса
1.2.5.5. Антигенная активность.
1.2.5.6. Экспериментальное заражение.
1.2.5.7. Культивирование вируса.
1.2.6. Лабораторная диагностика
1.2.7. Специфическая профилактика
1.3. Ассоциированные вакцины против болезней плотоядных
1.4. Заключение по обзору литературы.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы исследований
2.1.1. Анализ эпизоотической ситуации по ЧП и ПВЭСоб в г. Владимире
2.1.2. Вирусы
2.1.3. Культуры клеток.
2.1.4. Животные
2.1.5. Растворы и реактивы.
2.2. Методы исследований I.
2.2.1. Постановка для выявления антител против вируса ТО
2.2.2. Постановка РТГА для выявления антител против возбудителя ПВЭСоб.
2.2.3. Постановка ИФА для выявления антигенов ЧП и ПВЭСоб
2.2.4. Определение гемагглютинируклцей активности ПВЭСоб
2.2.5. Выделение полевых изолятов ПВЭСоб в культуре клеток
2.2.6. Концентрирование возбудителя ПВЭСоб.
2.2.7. Идентификация полевых изолятов возбудителя ПВЭСоб
2.2.8. Подбор чувствительных культур клеток для культивирования ПВЭСоб.
2.2.9. Инактивация возбудителя ПВЭСоб
2.2 Изготовление экспериментальной инактивированной сорбированной вакцины против ПВЭСоб
2.2 Определение стерильности, безвредности, биологической и
антигенной активности вакцин
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Оценка эпизоотической ситуации по чуме плотоядных и парвовирусному энтериту собак в условиях г. Владимира за период гг.
3.1.2. Анализ исследований биоматериалов и сывороток крови собак при изучении ситуации по чуме плотоядных
3.1.3. Анализ исследований биоматериалов при изучении ситуации
по парвовирусному энтериту собак
3.2. Оптимизация условий выделения полевых изолятов возбудителя ПВЭСоб и изучение их биологических свойств
3.2.1. Выделение полевых изолятов возбудителя ПВЭСоб из патматериалов.
3.2.2. Изучение иммунобиологических свойств полевых изолятов
возбудителя ПВЭСоб
3.2.2.1. Изучение патогенных и антигенных свойств изолятов возбудителя ПВЭСоб
3.2.2.2. Выделение полевых изолятов вируса в культуре клеток
3.2.2.3. Идентификация изолята возбудителя ПВЭСоб методами электронной микроскопии и ПЦР.
3.3. Культивирование возбудителя иарвовирусного энтерита собак штамма Грей и изучение его иммунобиологических свойств.
3.3.1. Чувствительность различных культур клеток к возбудителю ПВЭСоб
3.3.2. Влияние приема замораживанияоттаивания на выход возбудителя ПВЭСоб
3.3.3. Приготовление экспериментальной инактивированной сорбированной вакцины против парвовирусного энтерита собак
3.3.4. Определение оптимального содержания парвовирусного антигена в инактивированной вакцине.
3.3.5. Изготовление экспериментальных образцов инактивированной сорбированной вакцины против парвовирусного энтерита собак и
изучение е свойств.
3.4. Оценка эффективности применения вакцин против ЧП и ПВЭСоб
3.4.1. Изучение динамики накопления вирусспецифических антител против ЧП и ПВЭСоб при вакцинации собак.
3.4.2. Изготовление производственных серий живой лиофилизированной вакцины против ЧП и ПВЭСоб
3.4.3. Оценка антигенных свойств моно и ассоциированных вакцин против ТО и I ШЭСоб.
3.4.5. Сроки формирования и напряженность иммунитета у животных, иммунизированных экспериментальными вакцинами против ТО и ПВЭСоб.
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
5. ВЫВОДЫ
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АЭЭИ аминоэтилэтиленимин ВЭН вирусный энтерит норок ГАЕ гемагглютинирующая единица ГЛА гидролизат лактальбумина ГОА гидроокись алюминия И1 инфекционный гепатит ИФА иммуноферментный анализ ПВЭСоб парвовирусиый энтерит собак
ПК первичнотрипсинизированная культура клеток почки котенка ПЛК панлейкопения кошек
ППК перевиваемая культура клеток почки пороснка ПСП полусинтстическая питательная среда ПСС синтетическая питательная среда ПЦР полимеразная цепная реакция
ПЩ первичнотрипсинизированная культура клеток почки щенка
РГА реакция гемагглютинации
РДП реакция диффузионной преципитации
реакция нейтрализации
РНГА реакция непрямой гемагглютинации
РСК реакция связывания комплемента
РТГА реакция торможения гемагглютинации
СК первичнотрипсинизированная культура клеток селезенки котенка ТК первичнотрипсинизированная культура клеток тестикул козленка ТЦД5о тканевая цитопатическая доза ЦПД цитопатическое действие ЧГ1 чума плотоядных
ЭИ перевиваемая культура клеток эмбриона норки
МОСК перевиваемая культура клеток почки щенка
СгРК перевиваемая культура клеток почки кошки
Р8 перевиваемая культура клеток селезенки кошки
Уего перевиваемая культура клеток почки зеленой мартышки
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


В мировой ветеринарной практике используются как живые, так и инактивированные вакцины различной валентности против вышеуказанных болезней. В связи со сложной эпизоотической обстановкой среди поголовья плотоядных в России, большим разнообразием штаммов возбудителей, их высокой мутагенностью, разработка вакцин против чумы плотоядных и парвовирусного энтерита является актуальной, несмотря на обилие вакцинных препаратов, выпускаемых отечественной и зарубежной биопромышленностью. Кроме того, анализ эпизоотической обстановки в г. Владимире по чуме плотоядных и парвовирусному энтериту не проводился в течение многих лет, также как и выделение полевых изолятов, их изучение в различных иммунохимических реакциях с целью отбора штаммов,
пригодных для изготовления иммунобиологических препаратов против указанных вирусных болезней плотоядных. Учитывая частоту возникновения заболеваний собак чумой плотоядных и парвовирусным энтеритом в г. Владимире задачей наших исследований стало изучение эпизоотологии вышеуказанных болезней, выделение полевых изолятов этих вирусов и изучение их иммунобиологических свойств, для изготовления биопрепаратов. Цели и задачи исследования. Целью настоящего исследования было изучение эпизоотической ситуации по чуме плотоядных ЧП и парвовирусному энтериту ГШЭСоб в условиях г. Владимира, выделение полевых изолятов вирусов с целью изучения их иммунобиологичеких свойств и подбор наиболее иммуногенных штаммов, пригодных для изготовления средств специфической профилактики и диагностики этих болезней. ЧП и ПВЭСоб в г. Владимире за период гг. ЧП и ПВЭСоб. Научная новизна исследования. Впервые в условиях г. Владимира проанализированы эпизоотические данные по чуме плотоядных и парвовирусному энтериту собак. Отобраны полевые изоляты возбудителя ПВЭСоб и изучены их иммунобиологические свойства. Выделен оригинальный штамм возбудителя ПВЭСоб Грей. В биологической характеристике этого штамма возбудителя ПВЭСоб изучены данные о его морфологии, культуральных, патогенных и антигенных свойствах, изучены его иммунобиологические свойства. Штамм пригоден для изготовления средств специфической профилактики и диагностики этого заболевания. Оптимизированы условия выделения изолятов возбудителя ПВЭСоб из патологических материалов в культурах клеток и с помощью РГА и РТГА. Определено оптимальное содержание парвовирусного антигена в прививной дозе экспериментальной инактивированной вакцины. Изучена динамика коллострального иммунитета у щенков при ЧП и ПВЭСоб. Изучены антигенные свойства разработанных экспериментальных образцов вакцин против ЧП и ПВЭСоб в лабораторных и производственных условиях. Практическая ценность исследований. В результате проведенных исследований разработаны следующие методические указания, которые одобрены ученым советом и утверждены директором ФГУ ВНИИЗЖ . Методические указания по выявлению антител к парвовирусу в сыворотках крови собак. На производственный штамм Грей возбудителя. Штамм Грей парвовируса собак хранится в Коллекции экзотических типов ящура и других патогенов животных ФГУ Федерального центра охраны здоровья животных. Данные, полученные в результате анализа эпизоотической обстановки в г. Инструкция по применению вакцины ассоциированной против парвовирусиого энтерита, инфекционного гепатита и чумы плотоядных. ЧП и ПВЭСоб. Апробация работы. Кострома, , XV Московского международного ветеринарного конгресса Москва, и докладывались на заседаниях учного совета ФГУ ВНИИЗЖ в гг. Публикация научных исследований. Основные результаты отражены в 7 опубликованных работах, в том числе 4 работы опубликованы в изданиях по перечню ВАК РФ. Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы выполнены совместно с д. А.Г1. Пономаревым, к. О.П. Бьядовской, м. А.Е. Вечеровым, за что автор выражает им сердечную благодарность. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 8 страницах и содержит следующие разделы введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и приложения. Работа иллюстрирована 8 рисунками и таблицами.