Биологические свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О и Азия-1

• Автор: Жильцова, Милена Владимировна
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 146 с. : ил.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика вспышек ящура вызванных генетически измененным вирусом ящура.

1.1.1. Вирус ящура типа О Московский.

1.1.2. Вирус ящура типа О Тайвань 7.

1.1.3. Вирус ящура типа О Г1риморский

1.1.4. Вирус ящура типа Азия1, выделенный в России в гг. .

1.1.5. Вирус ящура типа Азия1 Монголия

1.1.6. Вирус ящура типа А Иран и А Турция

1.2. Лабораторнные штаммы вируса яшура типов А и О.

1.3. Методы изучения биологических свойств вируса ящура

1.3.1. Репродукция вируса ящура в различных клеточных культурах

1.3.2. Бляшкообразование вируса ящура
1.3.3. Репродукция вируса ящура в организме лабораторных животных.
1.3.4. Патогенность вируса ящура для естественновосприимчивых животных
1.3.5. Штаммовая дифференциация вируса ящура серологическими методами
1.3.6. Определение антигенного соответствия между вакцинным штаммом и эпизоотическим изолятом в реакции микронейтрплизации .
1.4. Заключение
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы.
2.1.1. Эпизоотические изоляты и лабораторные штаммы вируса ящура.
2.1.2. Сыворотки крови.
2.1.3. Клеточные культуры
2.1.4. Питательные среды и солевые растворы
2.1.5. Животные
2.2. Методы исследований.
2.2.1. Подготовка афтозной суспензии.
2.2.2. Подготовка монослойной клеточной культуры 3.
2.2.3. Вирусовыделение и репродукция вируса ящура в монослойных клеточных культурах.
2.2.4. Реакция микронейтрализации РМН
2.2.5. Иммуноферментный анализ ИФА.
2.2.6. Определение инфекционной активности вируса
2.2.6.1. Определение титра инфекционной активности вируса ящура методом бляшек под агаровым покрытием.
2.2.6.2. Определение титра инфекционной активности вируса микрометодом
2.2.6.3. Определение титра инфекционной активности вируса ящура в КК СП.
2.2.6.4. Определение титра инфекционной активности вируса ящура
на морских свинках.
2.2.6.5. Определение титра инфекционной активности вируса ящура
по методу Гендерсона.
2.2.7. Получение гипериммунных сывороток.
2.2.8. Реакция связывания комплемента РСК
2.2.9. Заражение естественновосприимчивых животных
2.2 Заражение лабораторных животных
2.2 Статистическая обработка результатов исследований
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3. Изучение биологических свойств вируса ящура типа А
3.1.1. Репродуктивные свойства лабораторных вариантов вируса ящура типа А 0.
3.1.2. Бляшкообразующие свойства лабораторных вариантов вируса ящура типа А 0.
3.1.3. Репродуктивные свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типа А
3.1.4. Чувствительность лабораторных животных к вирусу ящура типа АТурция.
3.1.5. Чувствительность естественновосприимчивых животных к вирусу ящура генетической линии А Иран.
3.1.6. Антигенное соответствие эпизоотических изолятов вируса ящура генетической линии А Иран производственным штаммам вируса ящура типа А в реакции микронейтрализации.
3.1.7. Двустороннее антигенное родство вируса ящура типа АТурция в реакции связывания комплемента
3.2. Изучение биологических свойств производственных штаммов и эпизоотических изолятов вируса ящура типа О
3.2.1. Репродуктивные свойства лабораторных штаммов вируса ящура типа 0 4
3.2.2. Бляшкообразующие свойства лабораторных штаммов вируса ящура типа О 4
3.2.3. Репродуктивные свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типа О
3.2.4. Бляшкообразующие свойства эпизоотического изолята вируса ящура типа О Московский
3.2.5. Чувствительность лабораторных животных к вирусу ящура типа
О Тайвань 7
3.2.6. Чувствительность естественновосприимчивых животных к вирусу ящура типа О Приморский.
3.2.7. Антигенное соответствие эпизоотических изолятов вируса ящура типа О производственным штаммам в реакции связывания комплемента.
3.3. Изучение биологических свойств вируса ящура типа Азия1
3.3.1. Репродуктивные свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типа Азия1.
3.3.2. Бляшкообразующие свойства вируса ящура типа Азия
Приморский
3.3.3. Чувствительность не вакцинированных и иммунных естественновосприимчивых животных к штамму вируса ящура типа Азия
Амурский
3.3.4. Антигенное соответствие эпизоотических изолятов вируса ящура типа Азия1 производственному штамму Азия1 Шамир 9 в реакции микронейтрализации
3.3.5. Двустороннее антигенное родство вируса ящура типа Азия1 в . реакции связывания комплемента
3.4. Создание банка сывороток крови вакцинированных животных.
4. ОБСУЖДЕНИЕ.
5. ВЫВОДЫ.
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ1
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.1
ПРИЛОЖЕНИЯ1
ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
а.о. аминокислотные остатки
БОЕ бляшкообразующая единица
ВСЛ Всемирная справочная лаборатория
ВЯ вирус ящура
ГЛА гидролизат лактальбумина
ИДзо инфицирующая доза вируса, вызывающая заболевание ящуром зараженных животных ЦДЛ интрадермолингвалышй ИФА иммуноферментный анализ
КГ перевиваемая культура клеток гонад козы
КК культура клеток
КРС крупный рогатый скот
КСТ перевиваемая культура клеток коронарных сосудов эмбриона теленка
мелкий рогатый скот
НБ неструктурные белки
ПК почка козленка субкультура
ПСГК перевиваемая культура клеток почки сибирского горного козерога
ПСП питательная среда полусинтетическая ПСС питательная среда синтетическая ПТ почка теленка субкультура
ПЦР полимеразная цепная реакция
РДП реакция диффузной преципитации
РМН реакция микронейтрализации
реакция нейтрализации
РИГА реакция пассивной гемагглютииации
РРИД реакция радиальной иммунодиффузии
РСК реакция связывания комплемента
СП первичнотрипсинизированная культура клеток почки поросенка
СПЭВ перевиваемая культура клеток почки эмбриона свиньи ТЦДМЛ тканевая цитопагическая доза в миллилитре ТЦД5ои1 тканевая цитопатическая доза в микролитрах ФБР фосфатнобуферный раствор цпд цитопатическое действие
ВНК перевиваемая клеточная культура почки сирийского хомячка
I2 перевиваемая клеточная культура почки свиньи
перевиваемая культура клеток почки крупного рогатого
перевиваемая клеточная культура кожи кролика ц микролитр
ВВЕДЕНИЕ


Изучена способность к репродукции в различных клеточных линиях и бляшкообразующая способность лабораторных штаммов и 8 эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О и Азия1, полученных из различных регионов с по гг. Определена чувствительность лабораторных и естественновосприимчивых животных к заражению изолятами вируса яшура типов А, О, и Азия1, полученным из различных регионов с по гг. Изучено двустороннее антигенное родство вируса ящура типов А, и Азия1, выделенных в различных регионах с по гг. Оптимизирована методика постановки РМН для определения антигенного соответствия производственных штаммов эпизоотическим изолятам вируса ящура. Определено антигенное соответствие в РМН эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О, Азия1 и производственных штаммов вируса, используемых при изготовлении противоящурных вакцин. Практическое значение работы. На основании проведенных экспериментальных исследований определено антигенное соответствие эпизоотических изолятов, выделенных с по гг. А, О и Азия1. Штамм вируса ящура типа Азия1 Амурский после изучения иммунобиологических свойств был депонирован мая г. Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве ФГУ ВППСИ. Материалы диссертационной работы использованы при составлении заявки от г. РФ на изобретение Штамм Амурский вируса ящура типа Азия1 для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики ящура типа Азия1, диагностики, контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин. Создан банк сывороток крови КРС, иммунизированного моновалентными противоящурнымп вакцинами против типов В Я А, О, Азия1, для определения антигенного соответствия эпизоотических изолятов производственным штаммам вируса ящура в I 1. ФГУ ВНИИЗЖ . Апробация работы. Основные положения диссертации были доложены на Международной научной конференции, посвященной летию ФГУ ВНИИЗЖ, на конференции молодых ученых, посвященной проблемам мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных Владимир, марта г. ФГУ Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ ВНИИЗЖ, Владимир, г. ФГУ Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ ВНИИЗЖ, г. Публикации результатов. По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, 4 из которых в изданиях, входящих в перечень ВАК РФ. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 6 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Список литературы
включает 9 источников, из них 4 отечественных и иностранных. Работа иллюстрирована таблицами и 7 рисунками. Личный вклад. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы работы гю проведению ПЦР, секвенироваттию эпизоотических изолятов и определению наличия антител к неструктурному полипептиду ЗА в сыворотках крови экспериментально зараженных животных проводились совместно с к. Щербаковым. Опыты на КРС, МРС и свиньях были проведены совместно с сотрудниками лаборатории Биотехнологии и руководителем отдела биологического и технологического контроля д. В.И. Дневым. Автор выражает искреннюю благодарность научному руководителю к. Кременчугской С. Р. за помощь при выполнении и оформлении диссертационной работы, а также сотрудникам лабораторий Ящура и везикулярных болезней, Биотехнологии, Диагностики особо опасных болезней животных, Отделу биологического и технологического контроля и научной библиотеке за поддержку, практическую помощь и методические советы при выполнении и оформлении диссертации. Вирус ящура, принадлежащий к роду афтовирусов, способен поражать широкий круг видов животных в естественных и экспериментальных условиях и отличается высокой мутационной изменчивостью генома. К фенотипическим проявлениям изменчивости следует отнести антигенность, патогенность, тропизм, термочувствительность репродукции, терморезистентность, бляшкообразование в культуре клеток и др. Выделяют 7 серотипов вируса ящура А, О, С, Азия, 1, 2, САТ3 и более подтипов. Геном вируса ящура кодирует четыре структурных и восемь неструктурных белков.