Разработка новых тест-систем Drosophila melanogaster для оценки отрицательных последствий загрязнения окружающей среды

• Автор: Сидорская, Виола Анатольевна
• Шифр специальности: 11.00.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Арзамас
• Количество страниц: 192 с. : ил.

Содержание

Содержание .

Общая характеристика работы

1. Генетический контроль скорости индуцированного соматического мозаицизма у i .

2. Материал и методика.4

2.1.Линии дрозофилы

2.2.Получение синхронных яйцекладок у дрозофилы

2.3.Препараты и обработка ими личинок

2.4.Воздействие тепловым шоком .

2.5.Методика проведения анализа

2.6.Учт доминантных деталей .

2.7.Статистическая обработка результатов экспериментов
3. Новые тестсистемы в анализе ,
1 1 3 и 1 1 3 2 .
3.1.Генетические особенности новых линий .
3.2.Возможности использования новых тестсистем в анализе для оценки генетического риска прямых и. косвенных мутагенов
3.2.1 Анализ частоты соматического мозаицизма .
3.2.2. Анализ зависимости соматического мозаицизма от дозы мутагена.
3.2.3. Модификация частоты соматического мозаицизма тепловым шоком .
4.П роблема истинных и ложных мутантных пятен в методе у i .
4.1.Анализ природы морфозных клонов
4.2.Зависимость образования морфозных пятен от типа мутагена и от его дозы7
4.3.Изучение морфогенной активности теплового шока .
5. Характеристика линий 1, 3 и по показателю летальности
потомства на разных стадиях развития
5.1.Исследование генетической детерминированности спонтанной доминантной летальности у мутантных линий
дрозофилы.
5.2.Определение чувствительности тестерных линий дрозофилы
к токсическому эффекту мутагенов .
5.3.Модификация гипертермией токсичности этиленимина и
диэтилнитрозоамина.
Заключение
Выводы и рекомендации
Список использованных источников


Единственное требование исследуемый ген должен лежать дистальнее области предпочтительной локализации разрывов для соматического кроссинговера. Эту уверенность как раз и дат свойство соматического кроссинговера локализоваться в излюбленных областях 9,,. Практически все пятна двойные и более одиночных имеют кроссинговерное происхождение . Чем раньше произошла рекомбинация с последующей сегрегацией, тем крупнее результирующее пятно 9. Вышеизложенное и предопределяет использование метода соматического мозаицизма для исследования многих вопросов экологической генетики, онтогенеза и мутагенеза. В г. Мутация у жлтое тело, i опалнные щетинки. Оба гена находятся в Xхромосоме, а центромера расположена справа от гена . Исследуемые дигетерозиготы имели дикий фенотип по обоим признакам, однако изредка на теле насекомых появлялись двойные пятна половина пятна жлтая с нормальными щетинками, другая половина нормального серого цвета, но покрытая опалнными щетинками. Появление таких двойных пятен . А. Нетрудно убедиться, что картина соматического мозаицизма у особей с транс и цис положением маркеров будет отличной рис. Так, кроссинговер между проксимальным локусом и цетромерой ведт к появлению двойного пятна у трансособей рис. А, либо к появлению пятна, в котором проявляется действие сразу обоих генов у цисособей рис. А кроссинговер между обоими локусами ведт к появлению ткани, гомозиготной по дистально расположенному гену рис. Б2, Б одиночные пятна, проявляющие действие проксимального гена рис. В2,В, появляются в результате двойного кроссинговера и будут соответственно более редкими. Рис. А образование двойного пятна уэп в результате кроссинговера между геном бп и центромерой Б образование одиночного пятна у в результате кроссинговера между генами у и эп В образование одиночного пятна эп в результате двойного кроссинговера между генами у и эп, эп и центромерой. Рис. А образование двойного пятна уел в результате кроссинговера между геном эп и центромерой Б образование одиночного пятна у в результате кроссинговера между генами у и эп В образование одиночного пяггна вп в результате двойного кроссинговера между генами у и бп, бп и центромерой. В настоящее время исследователи, отдавая дань уважения системе гетерозигот как первой системе, позволившей объяснить суть явления соматического мозаицизма, мало применяют е в работе. В немногих современных работах , авторы для оценки мутагенности тех или иных химических агентов систему используют в сравнении с другими тестами. Проанализировав литературные источники за последние лет, касающиеся природы и характера возникновения мозаиков, следует отметить, что большинство работ посвящены изучению соматического мозаицизма в глазах у мух. Глаз образован 0 клетками и представляет жестко детерминированную дефинитивную систему. Системы и послужили началом истории открытия феномена индуцированного радиацией соматического кроссинговера. Так, на появление белых пятен в глазах у гетерозиготных особей впервые обратили внимание в г. Н.В. ТимофеевРессовский и . Но объяснить это явление с позиции соматического кроссинговера смог двумя годами позже, используя систему гетерозигот 2 . Выбранные им аллели и давали в различных комбинациях разные фенотипы. Кроме особей с белыми и тмноабрикосовыми одиночными пятнами,
обнаружил насекомых, имеющих двойные пятна одна половина которых была представлена фасетками белого , а другая тмноабрикосового цвета, окружающие фасетки были светлоабрикосовыми соответственно генотипу облучнных личинок. Объяснить появление двойных пятен ни элиминацией одной из двух Ххромосом, ни возникновением делеций бьшо нельзя, и высказывает предположение о наличии обмена между хроматидами обеих Ххромосом с последующей сегрегацией. Впервые использовать системы гетерозигот для скрининга на мутагенную активность различных химических веществ предложили независимо друг от друга П. Я. Шварцман и . В настоящее время применение системы в тестах на мутагенность утратило свою актуальность. Причины этого, отмеченные и .