Исследование молекулярно-генетических механизмов нейрогенеза неокортекса и сетчатки человека in vivo и in vitro

• Автор: Вердиев, Бахтияр Исраил оглы
• Шифр специальности: 03.03.05, 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 140 с. : ил.

ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ.

Развитие неокортекса

Развитие сетчатки

Культивирование НСК мозга

Культивирование НСК сетчатки.

Транскрипционные факторы в развитии ЦНС

X2 в развитии ЦНС

ix3 в развитии ЦНС

Транскрипционный фактор Рахб в развитии ЦНС

Экспрессия Рахб в развитии ЦНС.

Транскрипционная регуляция нейрогенеза в эмбриональный период

развития.
Участие гена Рахб в регуляции пролиферации и дифференцировки
клеток ЦНС.
Изоформы Рахб в регуляции развития ЦНС.
Рахб в регуляции транскрипции в нейрогенезе
Эффекторы Рахб в эмбриональном нейрогенезе.
Рахб в ностнатальном нейрогенезе.
x в нейрогенезе
Ост4 в эмбриональных стволовых и соматических клетках
Регуляция экспрессии
Функции 4 в развитии
Транскрипционный фактор
МА ТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Полимеразная цепная реакция
Препарирование тканей для молекулярных исследований
Выделение тотальной РНК
Синтез кДНК библиотек
олимеразная цепная реакция.
ПЦР в реальном времени.
Иммуногистохимичсское окрашивание
Фиксирование материала для иммуногистохимии
Приготовление срезов глаза и мозга.
Иммуногистохимичсское окрашивание
Вестерн блот.
Выделение белков.
Форез белков в ПЛАТ с
Подготовка проб
Электрофорез.
Перенос белков на НЦ мембрану
Гибридизация мембраны с антителами.
Детекция.
Культивирование клеток
РЕЗУЛЬТА ТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Исследование молекулярногенетических механизмов нейрогенеза неокортекса и сетчатки человека i viv
Исследование молекулярногенетических механизмов нейрогенеза неокортекса и сетчатки человека i vi.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


На стадии ранней гаструлы часть клеток эктодермы эмбриона претерпевает морфогенетические изменения, в ходе которых клетки направляются по нейральному пути развития. Эти клетки образуют нервную пластинку, состоящую из слоя нейроэктодермальных НСК, которые в процессе нейруляции формируют трехмерную структуру нервную трубку рис. Нейроэпителиальные клетки НСК на этой стадии делятся симметрично, что приводит к быстрому наращиванию изначального пула НСК. Рисунок 1. Образование нервной пластинки. Кигойа II. Ч а. Нервная трубка образована монослоем нейроэпителия из вытянутых клеток биполярной формы с плотными контактами в их апикальной части, обращенной к просвету желудочка. Для нейроэпителиальных клеток характерна экспрессия белка промежуточных филаментов нестина и транскрипционного фактора X2 ЬепбаЫ и. М.У. Нейроэпителиальные клетки, по сути, являются мульти потентным и стволовыми клетками ЦНС, поскольку они дают начало всем трем типам нейральных клеток нейронам, астроцитам и олигодендроцитам. Макгйа Р. Оо1г М. Характер экспрессии этих маркеров у грызунов и приматов значительно различается В. М., . В то же время, клетки радиальной глии сохраняют сходство с нейроэпителиальными стволовыми клетками по форме и поведению. Для них характерна биполярная форма с длинным базальным отростком, доходящим до пиальной поверхности мозга, и коротким апикальным отростком, обращенным в просвет желудочка. В клетках радиальной глии сохраняется интеркинетическая миграция ядер в клеточном цикле. Прежнее представление о том, что клетки радиальной глиии служат только для миграции нейробластов вдоль их базальных отростков к пиальной поверхности мозга и являются предшественниками глии, было коренным образом пересмотрено в ходе исследования нейральных стволовых клеток. Стало очевидно, что радиальная глия функционирует как мультипотентные НСК, генерируя основной пул нейробластов, астроциты и олигодендроциты , . Клетки радиальной глии представляют собой гетерогенную популяцию, которая включает как мультипотентные, так и линейно ограниченные нейральные предшественники i . Основными зонами роста мозга являются первичная пролиферативная вентрикулярная зона ВЗ, вокруг желудочка мозга и вторичная пролиферативная субвснтрикулярная зона СВЗ рис. Вентрикулярная
Рисунок 2. Развитие нсокортекса аЦапцаЬ В. В ВЗ сначала активно пролиферируют клетки нейроэпителия, затем радиальной глии с базальными клетками. Нейробласты, потомки базальных клеток, первыми начинают формировать СВЗ. Она быстро расширяется за счет миграции и пролиферации множества нейробластов, происходящих уже от клеток радиальной глии. Миграция нейробластов происходит по отросткам клеток радиальной глии тянущихся к пиальной поверхности мозга, где формируется кортикальная пластинка будущая кора больших полушарий Ма1а1еБ1а Р. Поскольку в ходе эмбриогенеза клетки радиальной глии прекращают активное деление, ВЗ истончается и, параллельно с ее редукцией, пролиферативная зона перемещается в СВЗ. Таким образом, на разных этапах развития мозга, стволовые клетки имеют разные цитофенотипы. В эмбриогенезе это клетки нейроэпителия и радиальной глии, экспрессирующие нестин, x2, 2 маркер радиальной глии, а во взрослом мозге они сходны с астроцитами по морфологии и экспрессии . Эта последовательная трансформация ИСК была показана в серии исследований с использованием генноинженерных методов, позволяющих пометить клетку и затем длительно следить за судьбой ее самой и ее потомков i , . Начало нейрогенеза маркируется переходом к ассимметричному делению, при котором ИСК продуцируют промежуточные прогениторные клетки, коммитированные к нейрогенезу. Переход к глиогенезу включает возврат к симметричному делению НСК. Механизмы этих изменений в поведении прогениторов в нейрогенезе мало изучены. Предполагается, что они включают как изменения внутренних свойств прогениторов, гак и изменения в их сигнальном окружении. М.Е. Нервная пластинка образует нервную трубку, на ростральном конце которой формируется передний мозговой пузырь, в латеральной области его образуются выпячивания, из которых формируются глазные пузырьки рис.