Микроэкологические и биотехнологические основы создания и эффективного применения новых бактериальных пробиотических препаратов

• Автор: Петров, Леонид Николаевич
• Шифр специальности: 03.02.03, 03.01.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 265 с. : ил.

Введение

Глава 1 Обзор литературы

1.1 Современные представления о роли микробиоценозов

в поддержании гомеостаза человека

1.2 Устойчивость микроэкологических равновесий и последствия их нарушений

1.3 Бактериальные пробиотики, особенности получения и некоторые элементы механизма их влияния на

микроэкологический статут макроорганизма

Глава 2 Материалы, объекты и методы исследования

2.1 Микробиологические исследования

2.2 Химикоаналитические исследования

2.3 Иммунологические исследования

2.4 Токсикологические исследования
2.5 Биотехнологические исследования
Глава 3 Результаты исследования и их обсуждение
3.1 Феноменологическая модель механизма
пробиотического действия бактериальных препаратов
3.2 Разработка технологии получения пробиотика на основе симбиотической композиции бактериальных
штаммов и результаты доклинических исследований
3.2.1 Перспективность использования симбиотической композиции штаммов как основы пробиотика
3.2.2 Создание искусственной симбиотической композиции основы бактериального пробиотического
препарата
3.2.3 Разработка технологии получения БАД Симбиотический комплекс ацидофильных бактерий ВитафлорЛ в различных формах
3.2.4 Результаты доклинических исследований различных форм Симбиотического комплекса ацидофильных бактерий Витафлор
3.2.5 Формы выпуска БАД Симбиотический комплекс ацидофильных бактерий Витафлор и сферы их применения
3.3 Алгоритмы выбора пробиотика для решения терапевтических задач
3.3.1 Критерии выбора бактериального пробиотического препарата для решения терапевтических задач, вытекающие из анализа модели
3.3.2 Примеры использования алгоритмов выбора бактериального пробиотика для решения терапевтических задач
3.4 Опыт клинического применения пробиотика Витафлор в различных формах
Заключение Выводы Литература Приложения 1 Паспорта на штаммы Ь.аск1орЫ1ш Д и Д и идентификация их до вида с помощью Б РНК Приложения 2 Акты внедрения результатов работы
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

Вклетки
II, I2I2 и т.д.
адефенсины 5 или 6, и р
дефенсиныВО или
или кателицидин
Мклетки

i i i


i
полимерная форма иммуноглобулина А, п
секреторный иммуноглобулин А
Влимфоциты, синтезирующие 5А
Тклетки определенные популяций Тлимфоцитов, присутствующих в энтеральной среде
специфические в зависимости от номера интерлейкины или хемокины молекулярные иммунные интермедиаторы
семейства дефенсинов основного класса антимикробных пептидов эпителия слизистых
антибиотическое вещество,
идентифицированное на слизистой поверхности
у человека
клетки, находящиеся в фолликулах, ассоциированных с эпителием слизистых и осуществляющие захват и транслокацию антигенов и микроорганизмов из просвета полости в базолатеральную область эпителия
дендритные клетки
иммунная система слизистых оболочек
лимфоидная ткань слизистых оболочек
лимфоидные образования, ассоциированные с кишечником
лимфоидные образования, ассоциированные с бронхами
лимфоидные образования, ассоциированные с носом
лимфоидные образования, ассоциированные с евстахиевой трубой
молекулярные поверхностные структуры бактериальных клеток
патогенассоциированны молекулярные паттерны

ii
1,
I
i i
А4Ь7интегрины
ФНО
липополисахариды
пептидогликаны
наиболее изученные рецепторы на
колоколоподобные Торецепторы
белки нуклеотид связывающей области олигомеризации, принадлещие к семейству рецепторов
фактор транскрипции
эффекторные белки
упероксисомный пролифераторактивирующий рецептор
Тхелперные 3 или регуляторные Тклетки
эффекторный участок ИСС
рецепторы адрессины, имеющиеся на эндотелии сосудов
специальные молекулы на поверхности
лимфоцитов, праймированных в пейеровых
бляшках, которые узнают МАбСАМ
адрессины периферических шейных лимфоузлов
фактор некроза опухоли а
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Микроворсинки связаны с плотной сетыо актиновых нитей, которые объединены с адгерентами, а плотные соединения эпителиальных клеток обеспечиваются специальными трансмембранными белками изоформами клаудина и окюподина Бигизе М. Таким образом, вероятность преодоления физического барьера бактериями, не влияющими на нормальную динамическую функцию регуляторных белков микроворсинок или на плотные соединения эпителиоцитов, минимальна. Физический барьер эпителиальной поверхности возникает также благодаря слою гл и кокал икса, который выделяется специальными клетками и покрывает апикальную мембрану эпителия. Толстый слой слизи, состоящий из различных муцинов, формирует дополнительную диффузионную систему защиты. Бокаловидные клетки клетки, продуцирующие муцин присутствуют как в крипте, так и на ворсинчатом эпителии по всей тонкой кишке, толстой кишке и в прямой кишке. Физические или химические факторы, а также инфекционные агенты могут индуцировать массивный выброс муцина бокаловидными клетками, причем количество и качество муциновых зерен зависят от характеристик индуктора БреЫап Я. О., . Основная функция слизистого слоя формирование полупроницаемого защитного барьера, что позволяет кишечнику восстанавливаться после повреждения в относительно стерильных условиях Ктс1оп Н. В ряде работ . Такая гликанопосредованная адгезия может обеспечивать молекулярную базу для конкурентного включения микроорганизмов в состав микробиоценозов и объяснить некоторые из генотипических различий бактерий, находящихся на стенках тонкого кишечника и толстой кишки. В целом, бактерии не способны преодолеть этот защитный физический барьер, если они не экспрессируют муциназы или факторы, обеспечивающие адгезию, колонизацию, инвазию , . Основное различие патогенных микроорганизмов от комменсальных заключается в том, что первые, используя различные механизмы, могут достигать апикальной поверхности кишечного эпителия и вызывать при этом нарушение его барьерных характеристик. Рассмотрим некоторые аспекты врожденного иммунитета. Гомеостаз эпителия требует постоянного поддержания тонко настроенного баланса между реактивностью и толерантностью к микроорганизмам просвета кишечника. Разрушение этого баланса ведет к развитию воспаления кишечника. В этом взаимодействии бактериальных микроорганизмов и эпителия два главных эффекторных элемента регулируют апикальную плотность микроорганизмов антибактериальные пептиды и нейтрофилы. Антимикробные пептиды обладают широким спектром действия i vi против грамположительных и грамотрицательных бактерий. Механизм их действия связан с разрушением мембранных структур и лизосом микробных клеток Кокряков В. Н., . Основной класс таких пептидов дефенсины, которые могут быть разделены на два семейства адефенсины и дефенсины. Панета, которые находятся в основном в тонкой кишке. У человека известны два основных адефенсина человеческий дефенсин 5 5, или 5 и 6 . I. Т. Дефенсины синтезируются по всему желудочнокишечному трактату, включая толстую кишку. Вероятно, им принадлежит важная регулирующая роль в контроле численности большинства популяций бактерий. Среди дефенсинов человеческий дефенсин 1 1 экспрессируется постоянно, тогда как человеческий 2 синтезируется на низких уровнях и только в ответ на инфекцию или на провоспалительные интерлейкины. Известен также отдельный класс антибактериальных пептидов кателицидины, в которых область кателина связана с пептидом с антимикробной активностью. У людей идентифицирован только один кателицидин или , который постоянно присутствует в кишечном эпителии. В поддержании барьерной функции эпителия слизистой участвуют и привлекаемые с базальной стороны нейтрофилы. Привлечение к месту инфекции происходит главным образом в ответ на градиент СХСхемокина лиганда 8 X8, или интерлейкина 8, I8, который синтезируется эпителиальными клетками в ответ на действие метаболитов микроорганизмов, сорбированных на эпителии. С базальной стороны эпителия по градиенту патогензависимых аттрактантов нейтрофилы могут проникать в просвет полости и проявлять свою антибактериальную функцию.