Конструирование аттенуированных штаммов Yersinia Pestis с пониженной реактогенностью

• Автор: Агеев, Сергей Андреевич
• Шифр специальности: 03.02.03, 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Оболенск
• Количество страниц: 122 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕР АТУ РЫ

1.1 Молекулярные механизмы патогенеза чумы

1.2 Особенности формирования специфического иммунитета при чуме

1.3 Чумные вакцины

1.3.1 Краткая история вакцинопрофилактики чумы

1.3.2 Коммерческие чумные вакцины

1.3.3 Основные направления конструирования чумных вакцин нового поколения

1.4 Заключение по обзору литературы

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Штаммы микроорганизмов
2.2 Плазмиды
2.3 Олигонуклеотидные праймеры
2.3 Среды и условия культивирования
2.4 Бактериофаги
2.5 Лабораторные животные
2.6 Клеточные линии и первичные культуры клеток экспериментальных животных
2.7 Генноинженерные манипуляции
2.7.1 Конструирование мутанта У. ревИя ЕУ линии НИИЭГ, содержащего дефектный ген 1рхМ
2.7.2 Секвенирование ДНК
2.8 Биохимические методы
2.9 Иммунологические методы
Глава
2. Методы химического анализа
2. Методы биофизического анализа структуры ЛПС
2. Изучение основных фенотипических характеристик вакцинного штамма У. реэШ
2. Метод оценки ТЫЕ индуцирующей активности ЛПС
2. Определение количества ТМЕо
2. Определение ЬО препаратов ЛПС У. реэИу
2. Определение безвредности штамма У. реяШ
2. Определение уровня обсемененности органов
2. Изучение иммуногенности на биологических моделях
3 КОНСТРУИРОВАНИЕ рММУТАНТА ВАКЦИННОГО ШТАММА У реэШ ЕУ 6
3.1 Конструирование 1рхМ мутанта вакцинного штамма У. резИэ ЕУ линии НИИЭГ, лишенного маркеров лекарственной устойчивости
3.2 Изучение основных фенотипических характеристик полученных ЕрхМ вариантов вакцинного штамма У. реБШ ЕУ лилии НИИЭГ
3.3 Сравнение иммуногенности полученных ЬрхМ вариантов вакцинного штамма У. реяНя ЕУ линии НИИЭГ с помощью феномена переживания.
3.4 Определение структуры липополисахарида рхЛмутанта У ау ЕУ линии НИИЭГ, лишенного маркеров лекарственной устойчивости.
3.5 Обсуждение.
4 ИЗУЧЕНИЕ ЭНДОТОКСИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЫрхММУТАНТА ВАКЦИННОГО ШТАММА У. резШ ЕУ НИИЭГ.
4.1 Оценка ТЫЕаиндуцирующей активности ЛПС, выделен
ного из У. i VIx, для клеток мыши и человека.
4.2 Оценка конкурентного связывания препаратов ЛПС, выделенных из штаммов i V Ix и i V НИИЭГ, с перитонеальными макрофагами мыши и моноцитами человека.
4.3. Оценка индуцирующей активности ЛПС, выделенного из штамма . i V Ix в экспериментах i viv.
4.4 Определение летальной токсичности ЛПС, выделенного из штамма i V Ix для мышей линии
4.5 Обсуждение Глава 5 Изучение биологических свойств штамма . i V Ix в
экспериментах на биологических моделях
5.1 Определение безвредности остаточной вирулентности
штамма ревИэ VД1рхМ
5.2 Диссеминация клеток мутантного штамма У. реяйэ в организме мышей линии Ва1ЬС при подкожном заражении
5.3 Оценка иммуногенных и протективных свойств штамма
У. реэШ VД 1рхМ
5.3.1 Определение уровня антител к ведущим протективным антигенам У. реэШ после иммунизации мышей исследуемым штаммом У. i ЕУА1рхМ
5.3.2 Оценка иммуногенной активности штамма У. реэИэ Еx и оценка напряженности создаваемого им противочумного иммунитета для мышей.
5.4 Обсуждение
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ ЮЗ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ


Конструирование мутанта У. Изучение основных фенотипических характеристик вакцинного штамма У. Определение ЬО препаратов ЛПС У. Определение безвредности штамма У. Конструирование 1рхМ мутанта вакцинного штамма У. Изучение основных фенотипических характеристик полученных ЕрхМ вариантов вакцинного штамма У. Сравнение иммуногенности полученных ЬрхМ вариантов вакцинного штамма У. Ня ЕУ линии НИИЭГ с помощью феномена переживания. Определение структуры липополисахарида рхЛмутанта У ау ЕУ линии НИИЭГ, лишенного маркеров лекарственной устойчивости. Обсуждение. ИЗУЧЕНИЕ ЭНДОТОКСИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЫрхММУТАНТА ВАКЦИННОГО ШТАММА У. Ш ЕУ НИИЭГ. У. i VIx, для клеток мыши и человека. Оценка конкурентного связывания препаратов ЛПС, выделенных из штаммов i V Ix и i V НИИЭГ, с перитонеальными макрофагами мыши и моноцитами человека. Оценка индуцирующей активности ЛПС, выделенного из штамма . V Ix в экспериментах i viv. Обсуждение Глава 5 Изучение биологических свойств штамма . Диссеминация клеток мутантного штамма У. Определение уровня антител к ведущим протективным антигенам У. Ш после иммунизации мышей исследуемым штаммом У. Оценка иммуногенной активности штамма У. Иэ Еx и оценка напряженности создаваемого им противочумного иммунитета для мышей. ГИСК им. Л.А. Тарасевича дицинских биологических препаратов им. Л.А. ЗФР вать формирование специфического иммунитета, обеспечивающего выживание животных, вакцинированных этой дозой и зараженных на е сутки 0 вирулентного штамма .