Гликозилированный флагеллин полярного жгутика бактерий рода Azospirillum : выделение и свойства

• Автор: Беляков, Алексей Евгениевич
• Шифр специальности: 03.01.04, 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 118 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Жгутики бактерий как важный компонент поверхности прокариотической клетки

1.1.1. Строение бактериальных жгутиков

1.1.2. Механизмы сборки бактериального жгутика

1.1.3. Общие свойства бактериальных флагеллинов.

1.2.1ликозилированис белка в прокариотических организмах.

1.2.1. Феномен гликозилирования бактериальных белков

1.2.2. Гликозилирование флагеллина бактериальных жгутиков.

1.3. Характеристика бактерий рода АгоэртИит.
1.3.1. Разнообразие азосиирилл
1.3.2. Поверхностные антигены бактерий рода АтярМИит
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Бактериальные штаммы и условия выращивания бактерий
2.2. Получение антител
2.3. Получение препаратов липополисахаридов
2.4. Получение препаратов флагеллина полярного жгутика бактерий
рода АгоэртИит
2.5. Воднофенольная экстракция флагеллинсодержащих систем.
2.6. Спектроскопические исследования
2.7. Гидролиз флагеллина и деградация полисахаридов
2.8. Линейный иммуноэлектрофорез .
2.9. Денатурирующий электрофорез в полиакриламидном геле и иммуноблоггинг
2 Твердофазный непрямой иммуноферментиый анализ .
2 Просвечивающая электронная микроскопия.
Глава 3. Полученные результаты и их обсуждение.
3.1. Выделение и очистка гликозилировашюго флагеллина полярного жгутика бактерий рода АгоБртПит
3.1.1. Оценка удельного содержания флагеллина на разных стадиях роста бактериальной культуры.
3.1.2. Сравнение эффективности различных методов отделения жгутика от бактериальной клетки
3.1.3. Оптимизированная схема выделения гликозилировашюго флагеллина.
3.1.4. Осаждение флагеллина полярного жгутика А. i. Бр7 раствором сульфата аммония.
3.1.5. Воднофснольная экстракция флагеллинсодержащих систем
3.2. Изучение физикохимических и иммунохимических свойств
флагеллина полярного жгутика А. ЬгаяИепзе Бр7
3.2.1. Иммунохимический анализ флагеллина полярного жгутика азоснирилл
3.2.2. Исследование углеводных фрагментов гликозилированного флагеллина полярного жгутика А. ЬгаяИеняе Яр7
3.2.3. Серологические свойства флагеллина азоспирилл.
3.2.4. Термостабильиость белковых антигенных детерминант гликозилированного флагеллина азоспирилл.
Выводы.
Заключение.
Список использованных источников


Оценить вариабельность углеводных фрагментов в составе флагеллина у штаммов азоспирилл, относящихся к различным Оссротипам. Научная новизна работы. Проведена оптимизация метода выделения и очистки гликозилированного флагеллина полярного жгутика азоспирилл, позволившая впервые получить данный белок в препаративном количестве. В работе впервые показано наличие нетипичной для бакгериальных гликозилированных флагеллинов доли углеводных фрагментов у типового штамма А. ЬгазИепэе 8р7. Впервые установлено строение повторяющегося звена Освязанного полисахарида, входящего в состав молекулы гликозилированного флагеллина полярного жгутика А. Впервые показана серологическая вариабельность углеводных фрагментов флагеллинов азоспирилл. Практическая значимость работы. Выделены и иммунохимически охарактеризованы флагеллипы полярных жгугиков штаммов бактерий рода ii, которые могут быть рекомендованы к использованию в i vi экспериментах по исследованию роли этих структур в реализации различных типов межорганизменных взаимодействий. Полученные в работе препараты были использованы при выполнении плановых НИР ИБФРМ РАН. Результаты диссертационной работы использованы при подготовке курсовых и дипломных работ студентами химического факультета Саратовскою госуниверситета. Типовой штамм . 7 обладает нетипичной для бактериальных гликозилированных флагеллинов долей углеводных фрагментов, представленных полисахаридом. Соотношение белковой и углеводной долей флагеллина составляет 31. Углеводные фрагменты флагеллина полярного жгутика типового, штамма . 7 состоят из остатков рамнозы, глюкозами на, фукозы и галактозы в равном соотношении. Серологическая вариабельность углеводных фрагментов сочетается с родовой специфичностью белковых детерминант флагеллина азоепприлл. Апробация работы. Актуальные аспекты современной микробиологии Москва, . Диссертация обсуждена и одобрена на расширенном заседании лаборатории иммунохимии ИБФРМ РАН 8 октября года. Работа выполнена в лаборатории иммунохимии ИБФРМ РАН в соответствии с плановыми темами НИР Комплексный иммунохимический анализ антигенных структур, определяющих ассоциативные взаимодействия микроорганизмов с растениями гос. Щеголев С. Ю. и Комплексный иммунохимический анализ эктосимбиотичсских растительномикробных систем гос. Щеголев С. Ю.. Работа поддержана грантами Президента РФ НШ4 и НШ4 для молодых российских ученых и ведущих научных школ Российской Федерации. Глава 1. На поверхности прокариотической клетки располагаются структуры, различающиеся по морфологии и химическому составу. У грамотрицательных бактерий отмечают наличие капсул, жгутиков, микрофибрилл, а также фимбрий пилей. Капсулы и микрофибриллы состоят, как правило, из полисахаридного материала, в то время как фнмбрии, пили и жгутики сформированы белковыми субъединицами. Бактериальный жгутик представляет собой ключевой компонент бактериальной подвижности и во многом определяет способность многих бактерий приспособливаться к большому разнообразию биологических ниш, в которых они обитают. Это разнообразие включает водную и почвенную среду, а также уникальные микросреды в пределах животных или растений, которые колонизируют патогенные бактериальные организмы. В связи с поверхностной локализацией жгутики являются также одним из важных поверхностных антигенов бактериальной клетки Нантигеном i ix, i, Тимаков с соавт. 3. Вариабильность жгутикового антигена является одним и факторов вирулентности, а в лабораторной диагностике используется для серотипирования бактерий . . Модельными организмами в изучении процессов биосинтеза, сборки и регулирования жгутиков были i и ii i К , . Обе эти бактерии продуцируют пергрихальные жгутики, составленные из одного структурного белка флагеллина простые жгутики. Недавний постгсномный анализ, показал, что существующая парадигма структурной и регулирующей организации жгутиков в общих чертах справедлива для представителей многих бактериальных таксонов ivv, .