Изменение пула протеасом в постнатальном развитии и в злокачественно трансформированных клетках грызунов

• Автор: Астахова, Татьяна Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.30
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 107 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Множественность форм протеасом, их структу рная организация и физиологическая роль

1.1.1. Бпротеасомы

1.1.2. 8протсасомы .

1.1.3. Смешанные или гибридные протеасомы .

1.1.4. Иммунные протеасомы и их роль в иммунном ответе

1.2. Протеасомы в развитии животных

1.3. Система полиубиквитинирования белков.

1.4. Сигналы убиквитинзависимой деградации белков.
1.5. Изменения убиквитинзависимого протеолиза, связанные со злокачественной трансформацией .
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Животные и реактивы, используемые в работе.
2.2. Препаративное выделение протеасом
2.2.1. Получение осветленного гомогенета и фракционирование протеасом сульфатом
аммония.
2.2.2. Гельфильтрация на сефарозе 2В и ультрацентрифугирование
2.3. Аналитическое выделение протеасом
2.4. Определение активности протеасом.
2.5. Иммуноблоттинг
2.6. Получение 8ОДК
2.7. Гистологическое исследование селезенки
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Разработка метода разделения пулов 8 и 8протеасом
3.2. Особенности формирования пулов 8 и 8протеасом в селезенке и печени крысы в постнатальном развитии.
3.2.1. Изменение удельной активности и субъединичного состава пулов 8 и 8протеасом в селезенке
и печени на 1, 5,9, ,, , и сутки
развития крысы
3.2.2. Динамика появления иммунных субъединиц
в пулах 8 и 8 протеасом в селезенке и печени
крысы в постнатальном развитии
3.2.3. Динамика изменения удельной активности пулов
8 и 8протеасом в постнатальном развитии.
3.2.4. Оценка количества протеасом в пулах 8 и Б в селезенке и печени крысы в
постнатальном развитии .
3.3. Развитие белой пульпы селезенки в онтогенезе крысы
3.4. Особенности пула протеасом в клетках асцитной карциномы КгсЬяН мыши
3.4.1. Пул 8протеасом в селезенке, печени, легких и асцитной карциноме КгеЬзН мыши.
3.4.2. Пул 8протеасом в селезенке, печени, легких и асцитной карциноме КгеЬэИ мыши.
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Особенности формирования пула 8 и пула 8протеасом
в печени и селезенке крысы в ностнатальном
развитии.
4.2. Формирование иммунных протеасом и вторичных лимфоидных органов селезенки крысы
в постнатальном развитии.
4.3. Особенности пула протеасом в злокачественно трансформированных клетках
4.3.1. Иммунные протеасомы злокачественных клеток
4.3.2. Конститутивные 8протеасомы злокачественных клеток.
4.3.3. 8протеасомы злокачественных клеток.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Стр. Список сокращений. ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Смешанные или гибридные протеасомы . Система полиубиквитинирования белков. Сигналы убиквитинзависимой деградации белков. Изменения убиквитинзависимого протеолиза, связанные со злокачественной трансформацией . ГЛАВА 2. Животные и реактивы, используемые в работе. Определение активности протеасом. ГЛАВА 3. Особенности формирования пулов 8 и 8протеасом в селезенке и печени крысы в постнатальном развитии. Пул 8протеасом в селезенке, печени, легких и асцитной карциноме КгеЬзН мыши. Пул 8протеасом в селезенке, печени, легких и асцитной карциноме КгеЬэИ мыши. ГЛАВА 4. Конститутивные 8протеасомы злокачественных клеток. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ. Актуальность темы. Протеасомы это мультисубъединичные и мультикаталитические протеиназные комплексы эукариотических клеток ii i x, МРС. Термин протсасома был предложен К. Танака и А. Голдбергом и отражает как иротеолитическую протеаза функцию комплекса, так и его природу как дискретной частицы сомы. Клетки млекопитающих и человека содержат несколько форм и субтипов протеасом. Наиболее изученными формами являются и протеасомы. Они гидролизуют убиквитинированные белки в АТФзависимой реакции. протеасомы, помимо того, что являются протеолитическим ядром протеасом, способны, как самостоятельные частицы, гидролизовать некоторые белки без их предварительного убиквитинирования независимо от АТФ. Каждая из этих форм образована четырьмя субтипами, различающимися сочетанием конститутивных и иммунных протеолитических субъединиц. Конститутивные 5протеасомы участвуют в регуляции клеточных процессов, таких как репликация и репарация ДНК, транскрипция, передача сигналов, клеточный цикл, апоптоз, поскольку гидролизуют белки, осуществляющие эти процессы, строго контролируемым способом. Иммунные 8протеасомы необходимы для развития иммунного ответа. Функции всех субтипов связаны, главным образом, с уничтожением поврежденных белков. Литературные данные об изменениях пула протеасом в индивидуальном развитии животных малочисленны и разрозненны. Совсем нет сведений о функционировании протеасом в постнатальном развитии млекопитающих, сопряженном с интенсивными биохимическими и физиологическими перестройками организма. Исследования в этой области могут расширить представление о молекулярных механизмах онтогенеза и содействовать пониманию причин как врожденных, так и приобретенных заболеваний в том числе злокачественных, связанных с нарушениями системы гидролиза белков в протеасомах. Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось исследование изменения пула и пула 8протеасом в печени нелимфоидном органе и селезенке лимфоидном органе крысы в постнатальном развитии и в клетках асцитной карциномы II мыши. Разработать метод разделения пулов и 8протеасом для их сравнительного анализа в различных органах. Изучить активность химотрипсинподобных центров и относительное количество протеасом в пулах и в селезенке и печени крысы в постнатальном развитии. Исследовать динамику появления иммунных субъединиц 7 и 2 в пулах и 8протеасом в селезенке и печени крысы.