Роль летучих стероидов (на примере андростенона) в регуляции агрессивного поведения у домовой мыши

• Автор: Ключникова, Мария Александровна
• Шифр специальности: 03.00.28, 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 168 с. : ил.

1.1. Общая морфофункциональная организация обонятельного анализатора

млекопитающих.

1.1.1. Обонятельная выстилка

1.1.2 Обонятельные рецепторы млекопитающих.

1.1.3. Трансдукция и кодирование сигнала в обонятельных сенсорных

нейронах.

1.1.4 Основная обонятельная луковица ООП

1.1.5 Проекции основной обонятельной луковицы

1.1.6 Кодирование обонятельного сигнала в ООЛ

1 1.1.7. Вомероназальный орган.

1.1.8. Вомероназальные рецепторы.

1.1.9 Дополнительная обонятельная луковица.
1.1. Конвергенция и синергизм ДОС и ООС
1.1. Другие хемосенсорные образования носовой полости у млекопитающих .
1.2 Химические сигналы позвоночных.
1.2.1. Виды химических сигналов
1.2.2. Андростенон.
1.3. Роль химических сигналов в агрессивном поведении млекопитающих
1.3.1 Агрессивное поведение
1.3.2. Генетические детерминанты межсамцовой агрессии
1.3.3. Участие обонятельной системы в регуляции межсамцовой агрессии.
1.3.4. Химические сигналы, влияющие на межсамцовую агрессию
Глава 2. Материалы и методы
2.1 Общая схема работы.
2.2. Методы тестирования поведения.
2.2.1 Определение порогов чувствительности к андростенону
2.2.2 Оценка уровня межсамцовой агрессии
2.2.3 Исследование предпочтения запахов мочи.
2.2.4 Тест открытое поле.
2.2.5 Статистические методы обработки поведенческих экспериментов
2.3. Хирургическое удаление вомероназального органа
2.4. Материал и методы исследований локализации нейрональной активности в обонятельной системе.
2.4.1 Экспозиции животных к андростенону и контрольным одорантам
2.4.2 Приготовление и окрашивание срезов.
2.4.3 Анализ Роэиммунореактивности
2.5. Определение содержания гормонов методом твердофазного иммуноферментого анализа
2.5.1 Иммунохимическое определение содержания тестостерона и
кортикостерона в плазме крови после экспозиции к андростенону.
2.5.2. Статистические методы обработки
2.6. Генетический анализ чувствительности к андростенону и межсамцовой агрессии
2.6.1 Получение гибридов
2.6.2 Фенотипирование животных
2.5.3 Анализ фенотипов
2.5.4. Генотипирование животных с использованием ДНК маркеров.
2.5.5 Анализ ассоциаций между фенотипами и генотипами.
Глава 3. Результаты и обсуждение
3.1. Генетический анализ признаков чувствительности к андростенону и параметров межсамцовой агрессии.
3.1.1. Анализ фенотипов родительских линий и гибридов первого поколения
3.1.2. Анализ фенотипов второго поколения гибридов
3.1.3. Анализ ассоциаций фенотипов и генотипов второго поколения гибридов, определенных с использованием ДНК маркеров
3.1.4. Обсуждение
3.2 Участие дополнительной обонятельной системы в рецепции андростенона у домовой мыши.
3.2.1 Удаление вомероназального органа.
3.2.2. Исследование нейрональной активации в ВНО в ответ на стимуляцию андростеноном
3.2.3 Обсуждение.
3.3. Влияние андростенона на некоторые поведенческие и гормональные показатели у домовой мыши
3.3.1. Тест на межсамцовую агрессию
3.3.2. Влияние длительных экспозиций к андростенону на ряд поведенческих показателей
3.3.3. Влияние экспозиций андростенона на содержание основных стероидных гормонов в плазме крови.
3.3.4. Обсуждение
Заключение.
Выводы
Список литературы


Продукты ПЦР были подвергнуты эндонуклеазной рестрикции с целью обнаружить продукт, содержащий члены мультигенного семейства. ПЦРпродукта, тем самым подтверждая гипотезу о мультигенном кодировании. Обонятельные рецепторы были классифицированы как члены суперсемейства рецепторов, ассоциированных с белкам по своей структурной организации и способности связываться с белками, а также их активировать , . По всей видимости, связывание с одорантами и активация ОР происходит согласно известным принципами взаимодействия лигандрецептор. Сравнительный анализ аминокислотных последовательностей обонятельных рецепторов показал наличие как консервативных, так и вариабельных областей. Первые, по всей видимости, вовлечены в структурную организацию рецептора, а вторые ответствены за связывание с лигандом , x, , , ii, . Обонятельные рецепторы имеют 7 гидрофобных трансмембранных доменов, дисульфидную связь между консервативными цистеинами во внеклеточных петлях, консервативный сайт гликозилирования на конце , . Для обонятельного рецептора мыши экспериментальными методами было продемонстрировано участие в связывании лиганда нескольких гидрофобных аминокислотных остатков, а также формирование кармана для связывания одоранта трансмембранными доменами 3, 5 и 6 , . Рис. Структура обонятельного рецептора по , . ТМ трансмембранные домены. Гены обонятельных рецепторов филогенетически подразделяют на два класса. Рецепторы класса I близки по своей организации к таковым у рыб, предполагают, что они участвуют в рецепции водорастворимых одорантов. Рецепторы класса II специфичны для наземных позвоночных i, . В геноме мыши насчитывается около функциональных генов , , , , ii, , в то время как у человека их около 0 , . В целом, у млекопитающих гены ОР составляют от общего числа генов в организме, что делает суперсемейство генов обонятельных рецепторов одним из самых крупных мультигенных семейств. Значительная часть генов обонятельных рецепторов у млекопитающих псевдогенизирована. У человека около псевдогенов ОР, у мыши и крысы около см. Доля псевдогенов нарастает в процессе эволюции в ряду грызуны обезьяны человек, таким образом количество функциональных генов ОР соответствует снижению роли обонятельного анализатора. Таблица 1. Функциональные гены обонятельных рецепторов у различных видов млекопитающих по ТоиИага, . Крыса i, . Гены обонятельных рецепторов мышиг в основном расположены в кластерах, локализованных на всех хромосомах рис. У человека гены ОР найдены расположенными одиночно и в кластерах в локусе на различной хромосоме i, . Большинство генов ОР состоит из экзонов, один из которых обыкновенно кодирует белок целиком. По крайней мере, две трети генов ОР имеют множественные транскрипционные варианты, образующиеся, в том числе за счет альтернативного сплайсинга 5 некодирующих экзонов, что характерно и для многих других неольфаюгорных рецепторных белков , . Рис. Очень небольшое число обонятельных нейронов 0. V, . Согласно наиболее распространенной гипотезе, именуемой один нейрон один рецептор, в одном сенсорном нейроне экспрессируется только один тип обонятельных рецепторов. Это положение было подтверждено различными экспериментальными методами, включая гибридизацию i i , . V, . ПЦР в одиночной клетке с обратной транскриптазой i i, . Vi, . Кроме того, гены обонятельных рецепторов относят к моноаллельным, то есть в обонятельном сенсорном нейроне экспрессируется либо материнская, либо отцовская аллель гена , . Iii, . Исключение одной из аллелей наблюдали между эндогенными и трансгенными аллелями гена ОР, и даже между идентичными трансгенными аллелями, интегрированными в один и тот же локус отдельной хромосомы, что говорит о наличии глобального механизма i, . Каковы транскрипционные механизмы, обеспечивающие экспрессию гена только одного рецептора в обонятельном нейроне По аналогии с другими генами, принадлежащими к мультигенным семействам, можно было б предположить необратимые перестройки ДНК рекомбинацию, конверсию гена или регуляцию при помощи локус контролирующих областей.