Состав и свойства фракций гуминовых кислот, различных по молекулярным массам

• Автор: Ростовщикова, Ирина Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.27
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 157 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Методы фракционирования гуминовых веществ

1.2. Современное состояние исследований состава и свойств молекулярных фракций гуминовых веществ

1.2.1. Весовое содержание различных по размеру фракций

гуминовых кислот

1.2.2. Элементный состав молекулярных фракций гуминовых кислот

1.2.3. Электронные спектры поглощения

1.2.4. Инфракрасные спектры

1.2.5. Влияние молекулярных фракций гуминовых кислот на
активность ферментов
1.2.6. Другие характеристики молекулярных фракций гуминовых кислот
2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования
2.2. Схема работы
2.3. Выделение препаратов гуминовых кислот
2.4. Выделение различных по молекулярным массам фракций гуминовых
кислот
2.5. Методы исследования
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Молекулярномассовое распределение гуминовых кислот
3.2. Характеристика молекулярных фракций гуминовых кислот физическими
и химическими методами
3.2.1. Элементный состав
3.2.2. УФспектры
3.2.3. Спектры в видимой области
3.2.4. Степень бензоилности
3.2.5. Инфракрасные спектры
3.2.6. Гидрофильногидрофобные свойства
3.3. Характеристика молекулярных фракций гуминовых кислот методами
ферментативног о анализа
3.3.1. Подбор условий ферментативного гидролиза в присутствии , гуминовых кислот
3.3.2. Деструкция гуминовых кислот протеазами
. Кинетика деструкции гуминовых кислот трипсином
. Изменение молекулярномассового распределения гуминовых кислот после воздейсгвия трипсина
3.3.3. Влияние гуминовых кислот и их фракций на ферментативный
гидролиз белков
. Зависимость активности трипсина от концентрации гуминовых
кислот
. Зависимость скорости ферментативного гидролиза азоказеина трипсином от в присугствии гуминовых кислот
В Влияние молекулярных фракций гуминовых кислот на активность
трипсина
3.3.4. Влияние свойств гуминовых кислот на степень ингибирования ферментативного гидролиза белков
А. Молекулярные массы
Б. Г и дроф ильногидрофобные свойства
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Теория и техника метода iельхроматографии подробно описаны в ряде работ Детерман, Фракционирование полимеров, Жидкостная колоночная хроматография, Остсрман, . Метод основан на пространственном разделении молекул при их прохождении через пористые гели, как правило, представляющие собой поперечносшитые полимеры полисахариды, полиамиды, полистирены. Структура геля представляет собой систему пор, размер которых определен количеством поперечных связей в полимере. Степень, в которой молекулы будут задерживаться в порах геля, зависит от реальных размера и формы молекул. Гельпроникающая хроматография широко и успешно применяется в химии гумусовых веществ, однако, как и почти во всех методах анализа столь сложных систем, существует ряд трудностей и ограничений, которых сложно избежать и следует имегь ввиду для получения надежных достоверных результатов. Особенности применения гельфильтрации для анализа гумусовых веществ довольно подробно описаны в литературе Степаненко, Максимов, i, , i, , Каспаров, Тихомиров, Карпухин, , i, , i, , i, Орлов, Милановский, i, i, . Для калибровки хроматографических колонок для определения ММ необходимо использовать вещества с известными значениями молекулярных масс и близкой к анализируемому веществу формой молекул. Однако поскольку форма молекул ГК зависит и от природы объекта, и от условий, при которых проводится разделение, задача подбора стандартов для калибровки колонок в данном случае весьма сложна, если вообще разрешима. Многие работы . . vv . . В последнее время предложен новый подход iv . ММ ГВ по данным гельпроникающей хромакирафии, основанный на коррекции экспериментально полученных результатов путем учета электростатических и гидрофобных взаимодействий вещества с матрицей геля, исходя из состава ГВ элементный состав, распределение кислорода между Iруппами, соотношение гетероатомов и углерода, отношения СН и т. Необходимо отметить, что в используемых условиях хроматограммы всех исследуемых ГК представляли собой широкое мономодальное распределение, что, вероятно, свидетельствует о недостаточно качественном подборе условий разделения и, соответственно, несколько снижает значимость полученных результатов. Одна из возможных причин искажения конечных результатов при гельфильтрации ГВ взаимодействие элюируемых молекул с матрицей геля, изза которого наблюдаемая задержка на колонке вызвана не только внедрением молекул в поры геля, но и некоторой адсорбцией на матрице, как правило, за счет гидрофобных взаимодействий. ГК на сефадексах предложено использоват ь в качестве элюента 4 или 7М растворы мочевины v, ii, Трубецкой и др. а Наряду с учетом адсорбционных взаимодействий в интерпретацию результатов гельхроматографии определенные трудности вносит зарядное взаимодействие между остаточно заряженными группами геля и ГП , , i, . В результате остаточный отрицательный заряд матрицы геля способствует выталкиванию отрицательно заряженных молекул гуминовых кислот, что приводит к уменьшению времени выхода вещества с колонки и, соответственно, искажает значение его молекулярной массы. На определяемые методом гельхроматографии значения молекулярных масс влияет и выбор элюента. В качестве элюента при гельхроматографии гумусовых кислот применяют деионизованную воду, расгворы , 4 разной концентрации, различные солевые фосфатные, боратные, карбонатнобикарбонатные и органические трис, трисглицин, глицин и др. Результат фракционирования гумусовых кислот зависит от величины ионной силы элюента. При увеличении ионной силы элюента происходит смещение максимума фракции на хроматограмме в сторону уменьшения размера составляющих ее частиц Орлов, Милановский, , . Подобное поведение объясняется предложенной , i , i .