Исследование функциональных взаимодействий между границами регуляторных доменов гена Abd-B у Drosophila melanogaster

• Автор: Тощаков, Степан Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.26
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 99 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Развитие i . Роль гомеозисных генов в процессе

ЭМБРИОГЕНЕЗА

1.1.1 Сегментация в процессе развития i генетический контроль

1.1.2 Роль гомеозисных генов в процессе эмбриогенеза

1.2 РЕГУЛЯ1ЩЯ IX КОМПЛЕКСА.

1.2.1 Общие положения

1.2.2 Фазы функционирования ВХС.

1.2.3. Белки групп и ix и их роль в регуляции ВХС.

1.3 Границы регуляторных доменов гена АвпВ. Инсуляторы

1.3.1 Организация регуляторной области гена
1.3.2. Граница
1.3.3 Граница
1.3.4 Граница Мер
1.3.5 Граница б
1.4 Модели регуляции гена АвпВ
1.4.1 Взаимодействие между инсуляторами
1.4.2 Антииисуляторные элементы. i
1.5 Белковые компоненты границ регуляторных доменов ix комплекса.
1.5.1. Белок .
1.5.2 Белок СР0.
1.5.3 Другие белковые компоненты границ ix комплекса.
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1 Генетические методы
2.1.1 Линии и мутации i
2.1.2 Трансформация эмбрионов i и получение грансгенных линий
2.1.3 Фенотипический анализ экспрессии гена iii в трансгенных линиях .
2.1.4 Генетические скрещивания.
2.2 Молекулярные методы
2.2.1 Приготовление компетентных клеток линии .i II5.
2.2.2 Трансформация бактериальных клеток плазмидной ДНК
2.2.3 Выделение плазмидной ДНК методом щелочного лизиса
2.2.4 Выделение геномной ДНК из дрозофилы
2.2.5 Псреосаждепие ДНК
2.2.6 Горизонтальный гель электрофорез.
2.2.7 Выделение фрагментов ДНК из геля и очистка ДНК от продуктов ферментативных реакций.
2.2.8 Определение концентрации нуклеиновых кислот
2.2.9 Метод полимеразной цепной реакции ПЦР
2.2. Рестрикция плазмидной ДНК.
2.2. Метод анализа изменения электрофоретической подвижности в полиакриламидном геле
2.3 Саузернблотанализ
2.3 Используемые в работе олигонуклеотиды
2.4 Получение трансгенпых конструкций
2.4.1 Основные векторы, используемые в работе
2.4.2 Создание конструкций.
3 РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1 Исследование способности Рлв8 инсулятора взаимодействовать на
БОЛЬШИХ ДИСТАНЦИЯХ
3.2 Наличие сайтов белка сНЛСР необходимо для осуществления
ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ МЕЖДУ ДВУМЯ КОПИЯМИ РЛВ8 ИНСУЛЯТОРА.
3.3 Границы Еав7 и Рлв8 способны к осуществлению функционального
ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ДРУГ С ДРУГОМ
3.4 Границы Рлв7 и РТ8Рав8 способны взаимодействовать с ПРЕДПРОМОТОР1ЮЙ ОБЛАСТЬЮ ГЕНА АВИВ.
4 ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ.
СЛИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
А абдоминальный сегмент i А i i x ii
комплекс X ix x
модуль клеточной памяти
СССТС связывающий фактор
связывающий белок
I i i

x x
i
сайт узнавания сай гснецифической рскомбиназы x гомсозисиый
iiv сайт гиперчувствителыюсти к ДНКазе I i ii
x сайт узнавания сайтспецифичсской рекомбиназы Сге Мер i ii
4 ii 4 i ii
1 2 iv x 1 2 ii iv x
ii 1 ix i x i i
ii i
ix
ixi
x ix i
ivi
x ix
а крила мид
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
МБА метиленбисакриламид
пн пар нуклеотидов
1С парасегмент
РНК рибонуклеиновая кислота
тпн тысяч пар нуклеотидов
ВВЕДЕНИЕ


СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ. ВВЕДЕНИЕ. Развитие i . РЕГУЛЯ1ЩЯ IX КОМПЛЕКСА. Фазы функционирования ВХС. Белки групп и ix и их роль в регуляции ВХС. Границы регуляторных доменов гена АвпВ. Антииисуляторные элементы. Белковые компоненты границ регуляторных доменов ix комплекса. Белок . Белок СР0. Другие белковые компоненты границ ix комплекса. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Фенотипический анализ экспрессии гена iii в трансгенных линиях . Генетические скрещивания. Приготовление компетентных клеток линии . II5. Горизонтальный гель электрофорез. Выделение фрагментов ДНК из геля и очистка ДНК от продуктов ферментативных реакций. Рестрикция плазмидной ДНК. Создание конструкций. ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ МЕЖДУ ДВУМЯ КОПИЯМИ РЛВ8 ИНСУЛЯТОРА. Границы Рлв7 и РТ8Рав8 способны взаимодействовать с ПРЕДПРОМОТОР1ЮЙ ОБЛАСТЬЮ ГЕНА АВИВ. ВЫВОДЫ. СЛИСОК ЛИТЕРАТУРЫ. Регуляция транскрипции генов эукариот характеризуется рядом особенностей, связанных с поддержанием координированной экспрессии генов в сложноорганизованной генетической системе. Каждый тип клеток многоклеточного организма характеризуется собственной уникальной комбинацией белковых факторов, появление которых в ходе дпфференцировки обеспечивается эффективной регуляцией активности кодирующих их генов. Такая высокоэффективная пространственновременная регуляция экспрессии генов обеспечивается за счет сложноустроенных и, как правило, протяженных регуляторных областей, которые состоят из специфических элементов, активирующих транскрипцию энхансеров или репрессирующих ес сайленсеров. Для функционирования генома очень большое значение имеет организация независимых доменов экспрессии генов. Механизмы формирования таких доменов в настоящее время мало изучены. Существует гипотеза, постулирующая, что функцию границ доменов с разными паттернами экспрессии выполняют инсуляторы. Инсуляторы это регуляторные элементы, которые способны функционально изолировать промотор от энхансера, если располагаются между ними, а таюке ограничивать распространение репрессии i . Для запуска работы гена важно, чтобы энхаисер правильно находил промотор, несмотря па то, что расстояние между ними иногда может достигать нескольких сот тпн. Существуют экспериментальные доказательства того, что в процессе активации энхансер и промотор сближаются в пространстве, а находящийся между ними участок ДНК выпетливается .