Молекулярно-генетическое исследование функции гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы у гипертензивных крыс линии НИСАГ

• Автор: Хворостова, Юлия Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 125 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. АРТЕРИАЛЬНАЯ ГИПЕРТОНИЯ

1.1. Гипсртония человека

1.2. Стпесс как фактор, провоцирующий развитие артсриальнрн гипертонии

2. ГИПОТАЛАМОГИПОФИЗАРНОАДРЕНОКОРТИКАЛЬНАЯ СИСТЕМА ГГАС И ЕЕ РОЛЬ В РЕГУЛЯЦИИ АРТЕРИАЛЬНОГО ДАВЛЕНИЯ

2.1. Организация ГГ АС

2.2. Проопномсланокортин ПОМК

2.2.1. Продукты ПОМК и их сосудистые эффекты

2.2.2. Рецепторы меланокортинов
2.2.2.1. Классификация
2.2.2.2. Рецепторы л I слано корт иное и регуляция артериального давления
2.2.3. Регуляция экспрессии ПОМК
2.2.3.1. Регуляция транскрипции гена ПОМК
2.2.3.2. Регуляция стабильности мРНКгена ПОМК
2.2.3.3. Регуляция трансляции ПОМК
2.2.3.4. Регуляция посттрансляционпого процессинга ПОМК
2.3. Кортикотропннрилизииг гормон КРП
2.4. Глюкокортикоилы
2.4.1. Сосудистые эффекты глюкокортикоидов
2.4.2. Стероидные пеиепторы
2.4.2.1. Биохимия стероидных рецепторов
2.4.2.2. Участие стероидных рецепторов в регуляции ГГАС
3. КРЫСЫ ЛИНИИ ИСАГ КАК ГЕНЕТИЧЕСКАЯ МОДЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТОНИИ
РЕЗЮМЕ
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. МАТЕРИАЛЫ
2. МЕТОДЫ
2.1. Выделение суммарной РНК ютканей
2.2. Получение кШК
2.3. Определение уровня мРНК гена ПОМК методом конкурентной ПНР
2.4. Определение уровней мРНК генов КРГ. I н ГР метолом мультиплексном ПЦР
2.5. Определение нуклеотидной последовательности кЛНК гена ПОМК
2.5.1. Подготовка вставки к лигнропанию
2.5.2. Подготовка вектора квитированию
2.5.3. Лигирование
2.5.4. Трансформация клеток .i тазмидпой ДНК
2.5.5. Выявление колоний, несущих плазмиду с нужной вставкой
2.5.6. Выделение таумидпой ЛНК
2.5.7. Секвепирование
2.6. Определение количества АКТЕ в ткани гипофиза и плазме крови
2.7. Определение количества кортикостероид н плазме крови
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ
1. УРОВЕНЬ мРНК ГЕНА ПОМК В ТКАНИ ГИПОФИЗА КРЫС ЛИНИЙ
И НИСАГ
2. СОДЕРЖАНИЕ АКТГ В ТКАНИ ГИПОФИЗА И ПЛАЗМЕ КРОВИ КРЫС ЛИНИЙ И НИСАГ
3. СОДЕРЖАНИЕ КОРТИКОСТЕРОНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ КРЫС ЛИНИЙ И НИСАГ
4. УРОВЕНЬ мРНК ГЕНА КРГ В ГИПОТАЛАМУСЕ КРЫС ЛИНИЙ И НИСАГ
5. УРОВЕНЬ мРНК ГЕНА I В ГИПОФИЗЕ КРЫС ЛИНИЙ И НИСАГ
6. УРОВЕНЬ мРНК ГЕНА ГР В ГИПОФИЗЕ, ГИПОТАЛАМУСЕ И
ГИППОКАМПЕ КРЫС ЛИНИЙ И НИСАГ
7. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НУКЛЕОТИДНОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ кДНК ГЕНА ПОМК КРЫС ЛИНИЙ И НИСАГ
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА АКТИВНОСТИ ГИПОТАЛАМУСА И ГИПОФИЗА КРЫС ЛИНИЙ И НИСАГ
2. УРОВЕНЬ КОРТИКОСТЕРОИД В ПЛАЗМЕ КРОВИ КРЫС ЛИНИЙ И
НИСАГ
3. УРОВЕНЬ мРНК ГЕНА ГР В ГИППОКАМПЕ ГИПОТАЛАМУСЕ И ГИПОФИЗЕ КРЫС ЛИНИЙ И НИСАГ
4. ВОЗМОЖНАЯ ВЗАИМОСВЯЗЬ ОБНАРУЖЕННЫХ ИЗМЕНЕНИЙ АКТИВНОСТИ ГГАС С ПОВЫШЕНИЕМ УРОВНЯ АД У КРЫС
ЛИНИИ НИСАГ
5. СРАВНЕНИЕ СОСТОЯНИЯ ГГАС У КРЫС ЛИНИЙ НИСАГ И
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРОВАНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АГ артериальная гипертония
АД артериальное давление
АКТ адренокортикотропный гормон
АНП атриальный натриуретический пептид
БТШ белки тспловго шока
ВИП вазоактивный интестинальный пептид
ГАМК уаминомасляная кислота
ГГЛС гнпоталамогииофизарноадренокортикальная система
гк глюкокортикоиды
ГР глюкокортикоидный рецептор
КРГ кортикотропинрилнзинг гормон
КРГР1 рецептор 1го типа для кортикотропинрилнзинг гормона
КРГР2 рецептор 2го типа для кортикотропинрилнзинг гормона
ктпп кортикотропи н подобиы й пептид
рлпг рлипотропный гормон
уЛПГ улилотроппый гормон
МР минералокортикоидный рецептор
аМСГ амеланоцитстимулирующий гормон
рмсг Рмеланоцнтстимулируюший гормон
уМСГ у меланоцитстнмулирующнй гормон
НИСАГ наследственная индуцируемаястрессом артериальная гипертония
1ТР нетранелнруемый район
ПВЯ паравентрикулярное ядро
ПКА протеинкиназа А
помк проопиомеланокортии
соя супраоптическос ядро
стДНК стандартная конкурентная ДНК
чсс частота сердечных сокращений
ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота
ЭПР эндоплазматичсский ретикулум
i ii i
I ангиотензиновый рецептор 1 го типа

i ii i
ii ii i
ii i
СРВ карбоксипсптидаза
ii i
дитиолтрейтол
дсзокситимидинтрифосфат
I1 iii
I интерлейкин 1 I
I i iii
меланокортиновый рецептор
ацетилтрамсфсраза
РЛСАР ii ivi i
пептид и л аамидирующая монооксигеназа
I прогормон конвергаза 1 го типа
2 прогормон конвергаза 2готипа
ii i
i iii
рибосоми ый белок
додецилсульфат натрия
iv
3 i ii
i i x
i iv
i 1 iv
i
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Эю, однако, не приводит к увеличению концентрации АК7Т в плазме периферической крови у нсстресссированных крыс. Мсжлинейных различий в содержании мРНК генов КРГ в гипоталамусе и I в гипофизе, а также кортикостерона в плазме крови в покое не найдено. В условиях эмоционального стресса, вызванного ограничением подвижности, крысы линии НИСАГ отличаются от крыс линии , повышенным содержанием мРНК гена ПОМК в гипофизе, и повышенным ответом коры надпочечников, о чем можно судить по более высокому уровню циркулирующего в крови кортикостерона. В условиях эмоционального стресса у крыс линии НИСАГ происходит увеличение мРНК гена КРГ в гипоталамусе, чего не наблюдается у крыс линии . У крыс линии НИСАГ в условиях стресса повышается также уровень АКТГ в гипофизе и плазме крови, тогда как у крыс стресс вызывает повышение содержания АКТГ только в плазме крови. Впервые у крыс НИСАГ и исследована динамика изменении изучаемых показателей в процессе продолжающегося эмоционального стресса. У крыс линии НИСАГ происходит существенный рост и последующее незначительное понижение уровня АКТГ в ткани гипофиза, тогда как уровень АКТГ в гипофизе крыс на протяжении стресса существенно не изменялся. Достижение максимазьного уровня АКТГ в плазме крови у крыс линии НИСАГ во время стресса происходит позже, чем у крыс . Кроме того, только у крыс НИСАГ зафиксирован прирост уровня кортикостерона между ой и ой мин стресса. У стрсссированных крыс линии НИСАГ, в отличие от крыс , наблюдается рост уровня мРНК гена ГР в гипофизе и снижение количества этой мРНК в гиппокампе. Полученные новые результаты имеют значение для выяснения природы сгрсссчувствительнй формы АГ, что, в свою очередь, может внести вклад в профилактику и лечение этого широко распространенного заболевания. Апробация работы. По материалам диссертации опубликовано 5 печатных работ. Результаты исследований были представлены на им международном симпозиуме i, i i Берлин, , а также на научной конференции с международным участием, посвященной летию со дня рождения проф. М.Г. Колпакова Эндокринные механизмы регуляции физиологических функций в норме и патологии Новосибирск, . Повышенный уровень артериального давления регистрируется приблизительно у взрослого населения индустриально развитых стран мира ii, . Общепризнанным является тот факт, что гипертоническая болезнь это не моноэтиологическое заболевание, и фактически при стойком повышении артериального давления необходимо говорить не о моноэтиологической гипертонической болезни, а о гипертензивном синдроме, так как финальный результат повышение АД может быть общим у различных по природе и механизмам патологий. Отсюда следует, что возникновение связанных с артериальной гипертонией, казалось бы, одинаковых осложнений у разных людей также может иметь в своей основе различные генетикофизиологические механизмы. При исследовании репрезентативных групп населения было обнаружено, что АД, измеренное в состоянии относительного покоя, характеризуется значительной индивидуальной вариабельностью. Разброс полученных величин соответствует нормальному гауссову распределению. У здоровых молодых людей пик кривой распределения величин систолического давления приходится на 0 мм рт. У большинства людей систолическое давление колеблется от 0 до 0 мм рт. С возрастом систолическое давление повышается в большей степени, чем диастолическое. Это связано со снижением эластичности сосудов. Установлены возрастные нормы величин АД. В том случае, если АД превышает нормальный уровень, говорят об артериальной гипертензии. По классификации Всемирной Организации Здравоохранения, принятой в году, повышенным следует считать систолическое давление выше 0 мм рт. Все случаи проявления гипертонической болезни принято разделять на 2 группы. Гипертонию называют первичной, или эссенциальной, если конкретная причина с возникновения остается неизвестной. Полагают, что этот тип гипертонии в значительной степени обусловлен генетическими факторами. На долю эссенциалыюй гипертонии приходится всех случаев проявления данного заболевания ii, .