Участие зависимых от убиквитина систем в регуляции эндоцитоза рецептора ЭФР

• Автор: Меликова, Мария Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 105 с. : ил.

Взаимодействие ЭФР с рецептором стимулирует два ряда событий с одной стороны, инициируются каскадные сигнальные пути, с другой стороны, происходит поступление ЭФРрецепторных комплексов внутрь клетки с помощью рецепторопосредованного эндоцитоза. Схематично этот процесс можно представить следующим образом после связывания лиганда с рецептором ЭФРрецепторные комплексы интернализуются и попадают в ранние эндосомы РЭ, где происходит их сортировка часть комплексов рециклирует обратно на плазматическую мембрану ПМ, а остальные попадают в предлизосомальный комиартмент, называемый поздними эндосомами ПЭ, после чего деградируют в лизо. Никольский и др. В последние годы появляются данные, отводящие рецептору, находящемуся в эндосомах. ЭФР. В связи с этим изучение механизмов регуляции вступления рецептора на путь деградации и продвижения по нему приобретает большое значение. Несмотря на длительную историю исследований, ответа на вопрос о том, как именно происходит сортировка ЭФРрецепторных комплексов на путь лизосомальной деградации т. РЭ в ПЭ, до сих пор нет. Все больше подтверждений получает точка зрения, в соответствии с которой переход из РЭ в ПЭ связан с попаданием белков, направляемых в лизосомы, в везикулярные домены мембраны РЭ, на которых в дальнейшем образуются инвагинации. Эти инвагинации превращаются затем во внутренние пузырьки, что приводит к формированию так называемых мультивезикулярных эндосом МВЭ, встречающихся на поздних стадиях эндоцитоза практически у всех известных организмов . Образование инвагинаций и заякоривание в них направляемых на деградацию белков начинается, повидимому, уже на стадии РЭ, полностью сформированная МВЭ соответствует по характеристикам ПЭ. Таким образом, РЭ превращаются в ПЭ в ходе процесса, называемого созреванием. Молекулярные основы этого процесса неясны. В настоящее время можно считать установленным, что для перехода в ПЭ рецептор ЭФР должен обладать активированной тирозинкиназой ТК Благовещенская и др. Известен также ряд белков и белковых комплексов, нарушения в функционировании которых в той или иной степени нарушают доставку рецепторов в лизосомы. Это фосфатцдилинозитол3киназа РБК, убиквитинлигаза сСЫ, адапторный белок X1, субстрат рецепторной тирозинкиназы , комплексы I, II, III и др. Сайты действия этих белков не всегда известны, а механизм координации их действия практически не изучен. Давно показано, что рецептор ЭФР подвергается убнквитшшрованшо пострансляционной модификации, заключающейся в ковалентном присоединении убиквитина к остаткам лизина, содержащимся в молекуле рецептора vv . Убиквитинирование, как известно, является маркером для деградации на протеасомах ii, . МВЭ . Показано, что рецептор ЭФР подвергается убиквитинированию убиквитинлигазой сСЫ vi . Данные о том, на каком этапе сСЫ ассоциируется с рецептором, как долго сохраняется комплекс, каков статус убиквитинирования рецептора, т. Не исключена вероятность того, что убиквитинированпый рецептор узнается протеасомой и подвергается частичному протеолизу, в результате чего он становится доступен белкам, вовлекающим его на путь лизосомальной деградации. Существует ряд работ, авторы которых делают вывод об участии протеасом в регуляции эндоцитоза рецептора ЭФР v . Подобное заключение делается ими на основании того, что ингибиторы активности протеасом, в частности, наиболее широко применяемый синтетический ингибитор 2, подавляют процессинг рецепторов по лизосомалыюму пути. Этими авторами, однако, не анализируется и не учитывается неоднозначность действия 2 на клетку. Таким образом, вопрос о том, насколько протеасомы вовлечены в регуляцию внутриклеточного процессинга рецепторов ЭФР на поздних стадиях эндоцитоза, и какова роль убиквитинирования рецептора, остается открытым. Цели и задачи исследовании. Цель настоящей работы заключалась в том, чтобы проанализировать возможное участие протеасом в регуляции разных стадий эндоцитоза рецептора ЭФР, а также исследовать поведение убиквитинирующего рецептор белка сСЫ в процессе эндоцитоза.