Сравнительный анализ вклада различных лиганд-рецепторных комплексов в процесс адгезии эпидермальных клеток к изоформам ламинина

• Автор: Черепанова, Ольга Александровна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 136 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Внеклеточный матрикс

2. Ламинины

2.1. Домены ламинина

2.1.1. Короткие плечи креста молекулы ламинина

2.1.1.1. Домен VI

2.1.1.2. Домен IV

2.1.1.3. Домены V и III
2.1.2. Длинное плечо креста молекулы ламинина
2.1.2.1. Домены I и II
2.1.2.2. Домен В
2.1.2.3. Домен в
2.2. Свойства ламинина
2.2.1. Полимеризация и связывание с другими компонентами внеклеточного матрикса
2.2.2. Взаимодействие с клетками
2.3. Рецепторы ламинина
2.4. Биологически активные фрагменты ламининов
2.4.1. Протеолитические фрагменты ламинина
2.2.2. Пептиды ламинина
3. Роль ламининов в гистогенезе кожи
4. Сравнительный анализ структуры ламинина1 и ламинина24
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 4
Получение ламининов Электрофорез Цммуноблотинг Клеточные культу ры
Применение латексных шариков для изучения ранней стадии
взаимодействия клеток с внеклеточным матриксом
Обработка клеток различными агентами
Окраска клеток антителами на инволюкрин
Изучение структуры цитоскелета
Электронная микроскопия
Компьютерная обработка
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Очистка и сравнительный анализ изоформ ламинина
2. Изучение адгезивных свойств изоформ ламинина
2.1. Использование латексных шариков для изучения ранней стадии взаимодействия клеток с внеклеточным матриксом
2.1.1. Кератиноциты человека
2.1.1.1. Кератиноциты первичной культуры человека
2.1.1.2. Культивируемые кератиноциты человека
2.1.2. Клетки эпидермоидной карциномы человека линии Л1
2.2. Изучение поздней стадии адгезии клеток, включающей распластывание
2.2.1. Кератиноциты человека
2.2.2. Клетки эпидермоидной карциномы человека линии А1
3. Исследование вклада интегриновых рецепторов и ряда фрагментов ламинина на ранней стадии взаимодействия клеток с ламининами
3.1. Влияние обработки клеток антителами к р 1 субъединице
интегринов на взаимодействие с ламининами
3.2. Влияние обработки клеток антителами к р4 субъединице
интегринов на взаимодействие с ламининами
3.3. Влияние обработки клеток пептидом УЮЭЯ на взаимодействие с ламининами
3.4. Влияние одновременной обработки клеток антителами к р4 субъединице интегринов и пептидом УЮБЯ на взаимодействие с ламининами
3.5. Влияние обработки клеток пептидом 1КУАУ на взаимодействие с ламининами
3.6. Влияние обработки клеток ламинином1 и ламипином24 на взаимодействие с ламининами
4. Исследование вклада интегриновых рецепторов и ряда фрагментов ламинина в распластывание клеток на субстратах, покрытых ламининами
4.1. Кератиноциты человека
4.2. Клетки эпидермоидной карциномы человека линии А
ОБСУЖДЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Это гликопротсин с молекулярной массой около 0 кДа, состоящий из двух гомологичных цепей , . Фибронектин содержится в виде растворимых димеров в плазме крови, а так же является компонентом фиброзного ВМ. Он способствует адгезии клеток и является хемоатрактантом i, , . Коллагены составляют скелет ВМ Vii, , . В зависимости от источника ВМ, коллагены могут быть представлены в различных комбинациях фибриллярными коллагенами I, И, III типов, не фибриллярным коллагеном IV типа и так называемыми I iii i i i i коллагенами. Коллаген I типа формирует относительно жесткую, линейную фибриллярную сеть, тогда как коллаген IV типа собирается в комплексную сеть, найденную в основном в БМ i, i, , . Ламинин это однин из важных компонентов БМ, он непосредственно контактирует с различными эпителиальными и мезенхимальными клетками, включая мышечные, нервные и жировые клетки. Ламинин оказывает на клетки целый ряд биологических действий способствует пролиферации, дифференцировке, адгезии и хемотаксису клеток, ингибирует распространение метастазов, вызываег активность коллагеназыIV и тирозиш ироксилазы , . Поскольку ламинин является объектом настоящего исследования, то его структура и функции будут подробно рассмотрены ниже. Еще одним широко распространенным компонентом ВМ являются протеогликаны. Это комплексные макромолекулы, состоящие из корового белка, к которому ковалентно присоединены, линейные гетеросахариды гликозаминогликаны ГАГи. В зависимости от типа ГАГов протеогликаны делятся на гепарансульфат протеогликаны, хондроитин сульфат протеогликаны, дерматансульфат протеогликаны или кератансульфат протеогликаны i . Протеогликаны образуют гелеподобное, сильно гидратированное основное вещество, в которое погружены полимерные сети фибрилярных белков. Водная фаза этого геля обеспечивает диффузию питательных веществ, метаболитов и гормонов между кровью и клетками ткани. Гепарансульфат протеогликан перлекаи является компонентом БМ. Кроме структурной роли, по поддержанию организации ВМ, протеогликаны принимают участие в регуляции пролиферации и миграции клеток, а также являются потенциальными резервуарами для факторов роста и цитокинов i . , . Кроме вышеперечисленных, ВМ содержит и другие компоненты энтактин, витронектин, фибриноген и т. Ремодслирование тканей во время морфогенеза и заживления ран, клеточная метаплазия, пролиферация, метастазирование опухолевых клеток, все это процессы, при которых происходит изменение адгезивного состояния клеток под действием специфических белков ремоделирования матрикса. Тромбоспондины, i, ii i i i и тенасцинС стимулируют реорганизацию актиновых стрессфибрилл и разборку фокальных контактов i, , i, . Матриксные металлопротеиназы необходимы для деградации ВМ, они участвуют во многих биологических процессах, включая развитие молочных желез и нервной сетчатки, процесс овуляции, рост бластоцистов, дифференцировку фагоцитов и др. , . Для примера комплексного воздействия ВМ на клетки, на рис. ВМ оказывает ключевое влияние. Рис. Взаимодействия между клетками и ВМ влияют на многие важные для заживления повреждений кожного покрова и возникновения фиброзов клеточные процессы . Двухсторонние стрелки, соединяющие ВМ с различными клеточными процессами, демонстрируют динамическую взаимосвязь матрикса с клетками. В ответ на взаимодействие с прилежащим ВМ клетки часто синтезируют собственный матрикс, в результате чего меняется качественный и количественный состав клеточного окружения. Самым крупным классом рецепторов ВМ является семейство интегринов. Это трансмембранные, гетеродимерные гликопротеины, состоящие из а и р субъединиц и участвующие во взаимодействиях клеткаматрикс и клеткаклетка. Интегриновое семейство у позвоночных включает, по крайней мерс, различных а субьединиц и 8 или более 3 субьединиц, которые могут быть ассоциированы в известный интегриновый рецептор. На рис.