Культивирование можжевельника сибирского (Juniperus sibirica B.) в условиях in vitro и получение биологически активных веществ на его основе

• Автор: Аёшина, Екатерина Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Красноярск
• Количество страниц: 151 с. : ил.

Содержание
Введение.

1 Аналитический обзор

1.1 Народнохозяйственное значение можжевеловых лесов

1.2 Химический состав хвои i .

1.3 Культура клеток и тканей растений в решении задач биотехнологии

1.3.1 Вторичный метаболизм в условиях i vi.

1.3.1 Культивирование хвойных пород в условиях i vi

2 Методическая часть

2.1 Объект исследования

2.2 Исследование химического состава хвои i iii В.

2.3 Определение влажности
2.4 Определение суммарного содержания алкалоидов.
2.5 Определение содержания подофиллотоксина в хвое.
2.6 Определение флавоноидов
2.7 Определение сапонинов
2.8 Количественное определение витаминов.
2.9 Определение содержания хлорофилла А, Б и каротина
2. Разделение липидов на силикагеле
2. Спектрометрическое определение содержания белка.
2. Определение минеральных компонентов.
2. Определение концентрации редуцирующих веществ.
2. Определение легкогидролизуемых полисахаридов
2. Определение трудногидролизуемых полисахаридов.
2. Определение содержания лигнина
2. Определение содержания эфирного масла.
2. Определение экстрактивных веществ.
2. Введение в культуру i iii В
2. Получение каллусной ткани i iii В.
2. Иммобилизация растительных тканей на инертные носители.
2. Методы оценки физиологического состояния культуры
2. Определение содержание подофиллотоксина в клеточной биомассе методом ВЭЖХ
2. Определение подофиллотоксина в клеточной биомассе методом ИК спектров
3 Экспериментальная часть.
3.1 Химический состав хвои i iii В
3.2 Культивирование i iii В. в условиях i vi
3.2.1 Получение интактных стерильных растений и введение в культуру i vi.
3.2.2 Влияние фитогормонов на каллусогенез i iii В
3.2.3 Влияние типа эксплантов i iii В. на каллусогенез
3.2.4 Получение каллусных культур
3.2.5 Влияние способа культивирования на рост каллусной ткани i iii В
3.2.6 Микроклональное размножение i iii В.
3.2.6.1 Стимулирование развития пазушных спящих почек
3.2.6.2 Культивирование побегов i iii В
3.2.6.3 Укоренение размноженных побегов i iii В. и адаптация к условиям i viv о.
4 Выделение подофиллотоксина из хвои и каллусной ткани
i iii В.
5 Микроклональное размножение i iii В.
в условиях i vi
Выводы.
Список используемых источников


Эфирные масла служат источником получения душистых веществ, для улучшения парфюмерных свойств и повышения устойчивости к окислению . Можжевеловое масло находит применение в медицине как эффективное антисептическое средство, а в микроскопической технике как иммерсионное масло. Растительные воска в растениях встречаются наиболее часто. Они покрывают в виде налета или тонкой пленки стебли, листья, плоды растений. По своим физическим характеристикам воска растений имеют твердую консистенцию. Воскообразные вещества являются ценным веществом для медицины, парфюмерии, для получения полирующих средств, смазочных масел. Наибольшее применение получила юниперовая кислота, выделенная из воска казацкого можжевельника. Юнипсровая кислота дает ценные душистые вещества с мускатным запахом циклогексаномид 4. Термин дубитель происходит от слова дуб. Наросты, образующиеся на некоторых видах дубов галлы, издавно использовались, как отличные источшпси дубящих галлотаншшов . Содержание дубильных веществ в галлах составляет . Значительное количество дубильных веществ содержат представители семейств i, i, . В хвое, молодых побегах и коре рода i содержится от 5 до 8 дубильных веществ, пригодных для производства дубителей 4. Вся фитомасса растения можжевельника обыкновенного i i . В зависимости от частей растений содержание макро и микроэлементов различное. Хвоя наиболее богата такими минеральными веществами как азот 1, от а. По содержанию азота и минеральных элементов в различных частях, можжевельник подобен такой лесообразующей породе, как сосна обыкновенная i vi . При сравнении минерального состава этих двух видов видно, что наибольшее содержать азота и минеральных элементов обнаружено в хвое можжевельника. Эти данные согласуются с данными других исследователей. Культура клеток высших растений может рассматриваться с трех точек зрения как уникальная биологическая система, как модель в физиологии растений и как инструмент для разнообразных исследований в биотехнологии . Культура клеток высших растений является экспериментально созданной популяцией соматических клеток. Основное отличие ее от естественных популяций отсутствие полового размножения особей клеток. Выращивание в условиях i vi дает возможность контролировать многие факторы внешней среды температуру, влажность, продолжительность и интенсивность светового дня, состав питательных веществ. Это определяет широкое использование растительных клеток i vi в качестве модельных систем при изучении метаболизма и его регуляции в клетках и тканях, а также онтогенеза, генетики, растительной вирусологии и др. Простота клеточных моделей, возможность быстро получать достаточную биологическую массу в асептических условиях выращивания является преимуществами такого моделирования . Большой научный и практический интерес представляют продукты вторичного метаболизма растительных клеток. С помощью метода культуры ткани в настоящее время создан ряд клеточных технологий, позволяющих получать гликозиды, алкалоиды, некоторые другие биологически активные вещества , . Культура клеток и тканей растений, как один из разделов биотехнологии, является не только одним из альтернативных источников получения необходимых биологически активных веществ, но и нетрадиционным методом охраны лекарственных растений. Создание коллекций i vi позволяет сохранять и восстанавливать генофонд культурных и диких видов . При отделе биологии клеток и биотехнологии ИФР РАН существует Всероссийская коллекция клеточных культур высших растщшй, в которой депонировано около едишщ хранен каллусные и суспензионные культуры клеток различных штаммов. За последние десять лет различными биотехнологическими лабораториями введены в культуру многие виды растений. Введение в культуру i vi предполагает дедифференциацшо клеток исходного экспланта и их дальнейшее размножение. При этом происходит выход клеток из под интегрирующих систем органшма, меняются их функщш и метаболизм .