Теоретическое и научно-методическое обоснование использования белковых фракций чумного микроба при создании новых диагностических препаратов и тест-систем

• Автор: Зайцев, Александр Алексеевич
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Ставрополь
• Количество страниц: 293 с. : 50 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Основные этапы в изучении белков чумного микроба

1.2. Электрофоретический анализ белков чумного микроба

1.3. Иммунохимический анализ белков возбудителя чумы

1.4. Антигены чумного микроба, используемые при конст

руировании диагностических препаратов

1.5. Серологическая диагностика и индикация чумного

микроба и специфических чумных иммуноглобулинов

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Штаммы бактерий, использованные в работе
2.2. Бактериологические методы
2.3. Биологические методы
2.4. Биохимические методы
2.5. Иммунохимические и иммунологические методы
2.5.1. Агглютинационные тесты
2.5.2. Реакции иммунопреципитации
2.5.3. Гемагглютинационые тесты
2.5.4. Иммуноферментный анализ
2.5.5. Иммунолатексные тесты
2.6. Методы генетического анализа
2.7. Методы статистической обработки
ГЛАВА 3. ФИЗИКОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ БЕЛКОВ ЧУМНОГО МИКРОБА
3.1. Электрофоретический спектр водорастворимых белков
чумного микроба
3.2. Электрофоретический анализ суммарной фракции водорастворимых и мембранных белков чумного микроба
3.3. Влияние температуры культивирования на биосинтез белковых биополимеров чумного микроба
3.4. Перспективы использования протеинограмм для внутривидовой дифференциации чумного микроба
3.5. Использование протеинограмм белковых биополимеров для дифференциальной диагностики чумы от других видов иерсиний
ГЛАВА 4. ИММУНОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ВОДОРАСТВОРИМЫХ БЕЛКОВ ЧУМНОГО МИКРОБА
4.1. Серологическая активность фракции I чумного Микроба
4.2. Серологическая активность фракции II чумного микроба
4.3. Перспективы применения РИД для серодиагностики штаммов чумного микроба
ГЛАВА 5. ОПТИМИЗАЦИЯ БИОТЕХНОЛОГИИ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЧУМНЫХ АНТИГЕННЫХ ДИАГНОСТИКУМОВ НА ОСНОВЕ ФРАКЦИИ I И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЧУМЫ
5.1. Конструирование и использование диагностикума чумного полиакролеинового антигенного на основе фракции I
5.2. Оптимизация биотехнологии изготовления диагности
кума чумного антигенного пероксидазного и перспективы использования его в конкурентном варианте ТИФА П

ГЛАВА 6. ОПТИМИЗАЦИЯ БИОТЕХНОЛОГИИ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЧУМНЫХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВЫХ ДИАГНОСТИКУМОВ И ТЕСТСИСТЕМ А ТАКЖЕ ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВТШЯ ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ ЧУМЫ
6.1. Особенности приготовления диагностикумов полиакролеиновых чумных иммуноглобулиновых
6.2. Оптимизация условий постановки серологических реакций с полиакролеиновыми чумными антительными диагностикумами
6.3. Сравнительный анализ чувствительности и специфичности чумных полиакролеиновых диагностикумов на основе моно и поликлональных антител
6.4. Оптимизация экспрессдиагностики капсульного антигена Ф1 чумного микроба з иммуносуспензионных реакциях
6.5. Сравнительный анализ перспектив серодиагностики капсульного антигена возбудителя чумы в иммуносуспензионных реакциях и иммуноферментном анализе
6.6. Использование РСНАг для поиска антител к Ф1 чумного микроба в сыворотках животных
6.7. Перспективы совершенствования серодиагностики фракции I чумного микроба с помощью магноиммуносорбентов
6.8. Разработка и перспективы использования метода непрямого иммунофлуоресцентного анализа для диагностики чумного микроба
6.9. Биотехнология получения и использования иммуно
глобулинов для серодиагностики безфракционныхФ1 штаммов чумного микроба
ГЛАВА 7. БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ОПТИМИЗАЦИИ БИОСИНТЕ 4 ЗА ФРАКЦИИ I И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ТЕСТСИСТЕМ ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ ЧУМЫ В ОБЪЕКТАХ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ И ОБНАРУЖЕНИЯ ГЕНОВ, КОДИРУЮЩИХ БИОСИНТЕЗ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИГЕНОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ
7.1. Влияние факторов внешней среды на специфичность и 5 чувствительность иммуносуспензионных и иммуноферментных серологических реакций
7.2. Некоторые особенности влияния температуры культи
вирования бактерий чумы на продукцию капсульного антигена Ф
7.3. Перспективы оптимизации серодиагностики чумы с по 5 мощью биомоделей
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРА ТУРЫ ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Авторы предложили использовать этот метод в качестве эпидемиологического маркера. Ю.М. Евченко с соавт. Индийских штаммов и гг. Три штамма г имели идентичные белковые спектры, однако их протеинограммы отличались от таковых у староиндийских штаммов г. Явы, Азии и Западного полушария, обнаружили, что электрофоре граммы одних из них очень схожи, а другие значительно различаются. На основе проведенных исследований штаммы были условно разделены на три группы. В первую группу вошли штаммы, выделенные на Яве и в Бразилии, с большим содержанием протеина, соответствующего мышиному токсину. К другой группе относились штаммы, выделенные во Вьетнаме, с большим количеством белка в области быстромигрирующих биополимеров. Остатки Яванских и Бразильских штаммов, а также Североамериканские штаммы были отнесены в следующую группу. Р. Тенждери и Р. Хиллам , изучив штаммы возбудителя чумы из разных регионов, также обнаружили различия на протеинограммах, которые, по их мнению, сводились преимущественно к значительному колебанию продукции мышиного токсина с молекулярной массой 0 КД. Значительное количество этого белка они обнаружили у некоторых штаммов из Явы, что соответствовало данным . В дальнейшем . Южней Азии Индия, Бирма, Непал, Вьетнам, Центральной Азии СССР, Манчжурии, Африки Кения, ЮАР, Явы, Йемена, Ирака, Южной Америки Боливия, Бразилия, Перу, Эквадор, США и Мадагаскара. Только 7 штаммов не удалось отнести ни к одной из групп. Л.И. Калмыковой изучены биологические свойства и белковый спектр водорастворимых фракций чумного микроба, выделенных в очагах Кавказа, Горного Алтая и Гиссарского природного очага чумы. Установлено, что одни штаммы имели схожие протеинограммы, другие, напротив, существенно различались по этому признаку. Наиболее существенные различия заключались в биосинтезе протеина с ОЭП 0, 0, , который был отнесен к мышиному токсину, хотя, к сожалению, не был выделен в очищенном виде для подробного изучения. Наибольшее количество этого белка выявлено в ПААГ у штаммов чумного микроба из Гиссарского, Закавказского высокогорного и Дагестанского горного природных очагов чумы. Установлено, что количественное содержание мышиного токсина, определенное методом дискэлектрофореза, не всегда соответствовало токсигенности и вирулентности изученных штаммов. В процессе работы были составлены усредненные протеинограммы штаммов чумного микроба, характерные для каждого из 8 изученных природных очагов, которые отличались между собой по количеству и качеству белковых фракций. У 5 изученных штаммов из разных регионов мира результаты обычных биохимических тестов в основном были одинаковы рамноза, уреаза, фибринолизин, неподвижны при и С, фракция 1 и т. Все, кроме двух штаммов из Йемена, были нитрат и глицерин. Ян Гуйжун на основании анализа электрофореграмм белков выделены протеино граммы протеиновары штаммов основного, Кавказского отдельно для штаммов ВосточноКавказского высокогорного и Закавказского высокогорного природных очагов, Алтайского, Гиссарского и Улэгейского подвидов. Электрофореграммы белков штаммов из природных очагов Китая разделены на три протеиновара, первый из которых соответствует основному подвиду, два других представляют самостоятельные варианты. Таким образом, очевидно, что протеинограммы можно использовать для внутривидовой дифференциации штаммов . По мнению Л. И. Калмыковой с соавт. Ян Гуйжун видит различия преимущественно на уровне 5 основных подвидов. Практически каждый исследователь предлагает свою модель усредненной протеинограммы. По нашему мнению, эти вопросы требуют дальнейшего изучения. С практической точки зрения наиболее важное значение имеет наметившаяся тенденция к использованию протеинограмм в качестве эпидемиологического маркера. Поэтому необходимо продолжение исследований, направленных на изучение стабильности этого теста, выбора оптимальной методики дискэлектрофореза для этой цели. Очевидна целесообразность в развитии наметившейся тенденции применения дискэлектрофореза белков для межвидовой дифференциации представителей рода ii .