Совместная сорбционная иммобилизация гидролитических ферментов α-амилазы, протеазы BACILLUS SUBTILIS и витамина B12 на полимерном носителе

• Автор: Григорьева, Екатерина Павловна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 142 с.

Содержание
Введение.

1. Литературный обзор

1.1. Современные подходы к созданию

иммобилизованных форм лекарственных веществ

1.2. Практическое применение сорбентов в биотехнологии

1.2.1. Сорбционные технологии для выделения и очистки биологически активных веществ.

1.2.2. Сорбенты полимерные носители биологически активных

веществ.

2.Экснериментальная часть.

2.1. Объекты исследования.

2.1.1. Структура и свойства гидролитических
ферментов и витамина В2.
2.1.2. Физикохимические характеристики сорбентов.
2.2. Методы исследования
2.2.1. Определение концентрации белка по методу Лоури
2.2.2. Определение активности аамилазы.
2.2.3. Определение протеолитической активности
2.2.4. Определение концентрации витамина В2
2.2.5 Гельхроматографический анализ.
2.3. Методики проведения сорбционных экспериментов
2.3.1 Исследование сорбции белков в статических условиях
зависимость и изотермические процессы сорбции.
2.3.2. Исследование кинетики сорбции белков.
2.3.3. Проведение процесса сорбции и десорбции в
динамических условиях.
2.4. Математические методы обработки результатов.
3. Результаты и их обсуждение.
3.1. Выбор эффективного сорбента для выделения и очистки гидролитических ферментов из технического
препарата Амилосубтилина ГЗХ.
3.1.1. Сорбция гидролитических ферментов на модифицированных
и немодифицированных молекулярных сорбентах
3.1.2. Сорбция гидролитических ферментов на карбоксильном
катионите Биокарб
3.1.3. Сорбция гидролитических ферментов на сверхсшигых
сорбентах марки Стиросорб
3.1.4. Сравнительная оценка методов очистки аамилазы и протеазы i ii с использованием различных сорбентов
3.2. Исследование процессов соиммобилизации аамилазы,
протеазы i ii и витамина Ви на полимерном носителе.
3.3. Технологическая схема получения субстанции иммобилизованных на Биокарбе аамилазы, протеазы
и витамина Вп.
Список литературы


Включения в волокна эго эмульсия водного раствора БАВ в органическом растворе волокнообразующего полимера, продавленная через фильтры в жидкость, вызывающую коагуляцию полимера. В качестве такого полимера могут выступать производные целлюлозы, поливинилхлорида, и др. Полученные волокна представляют собой пористые полимерные гели, содержащие гомогенную дисперсию небольших капель водного раствора активного вещества, размером около 1 мкм. Включения в липосомы. Суть этого метода в том, что раствор липида обычно лецитина в органическом растворителе упаривают в вакууме и липид остается на стенках сосуда в виде тонкой пленки. Затем в колбу вносят водный раствор лекарственного вещества, встряхивают до полного удаления пленки липида со стенок колбы и оставляют на некоторое время. В полученной таким образом дисперсии липида происходит самопроизвольное образование мультиламеллярных липосом, содержащих включенный объект. Во избежание окисления липида все операции проводят в атмосфере инертного газа. Иммобилизация БАВ с использование систем двухфазного типа достигается не за счет взаимодействия веществ с жесткими носителями адсорбентом, гелем, мембраной, а в следствие их способности растворяться только в одной из двух фаз двухкомпонентной системы. Преимуществом таких систем является то, что оми позволяют осуществлять ферментативные превращения макромолекулярных субстратов в случае, когда молекула БАВ является ферментом . БАВ создаются новые ковалентные связи, в частности между молекулой БАВ и носителем. Препараты, полученные с применением химических методов иммобилизации лекарственных веществ, обладают по крайне мере двумя важными достоинствами. Вопервых, ковалентная связь с носителем обеспечивает высокую прочность образующегося комплекса вовторых, химическая модификация БАВ способна приводить к существенным изменениям их свойств. Именно химическими методами, в частности, путем многоточечного ковалентного закрепления молекулы, удалось достигнуть наибольших эффектов стабилизации БАВ 3. Исключительную значимость в этом методе приобретает выбор реакции модификации и условий ее проведения желательно, чтобы эти условия были мягкими и неденатурирующими для белковых молекул 9 . При сопоставлении различных приемов иммобилизации, химические методы для крупномасштабных процессов являются мало привлекательными изза сложности и дороговизны. Совместная иммобилизация различных биологически активных соединений является новым и перспективным методом создания иммобилизованных препаратов . В основе совместной иммобилизации лежат процессы статистической или привитой сополимеризации, достаточно хорошо разработанные в настоящее время в химии высокомолекулярных соединений. Соиммобилизация в структуре гелей осуществляется методом синтеза или сшивки функциональных сополимеров акриламид, виниловый спирт, виниламин в присутствии различных соединений, например, фермента и витамина, фермента и антибиотика и т. Комплексная соиммобилизация состоит в синтезе двойных а если необходимо, то и многокомпонентных сополимеров, содержащих активные центры, способные образовывать комплексные соединения с иммобилизуемыми веществами. Статистическая соиммобилизация заключается в получении исходных соединений иммобилизуемых веществ с мономерами и их последующей сополимеризацией. Так, виниловые производные ферментов могут вступать в сополимеризацию с виниловыми производными антибиотиков и антисептиков. Перспективность рассмотренных методов заключается в том, что используя теорию и методы, разработанные для процессов сополимеризации, можно точно варьировать природу, количество и распределение вдоль сополимерной цепи сомономерных звеньев, ответственных за тот или иной физиологический эффект. Это в свою очередь открывает широкие возможности для изучения фармакологических эффектов, обусловленных как природой иммобилизованных соединений, так и присутствием самой макромолскулярной цепи. Иммобилизованные биологически активные вещества могут находить применение в двух формах водорастворимой и нерастворимой форме.