Разработка иммуноферментной тест-системы для диагностики хламидиоза овец

• Автор: Кочиш, Иван Иванович
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Щелково
• Количество страниц: 130 с.

введение

1 ОЬЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1 I 1ммупофермс1гшмн анализ в ветеринарии

1.1 1 шщ1пы и методы ИФА

1.1.2 Выбор ферме псубстратной системы

1. 1.4. Синтез иммупофермситпых конъюгатов

1. I I. Результаты ИФД и практическое применение анализа

1.2 Характеристика возбудителя хламидиоюв

1.2.1. Хдпмидиоз овец и коз

1.2.2. Культивирование и очистка хламидий

1.2.3. Методы лабораторной диагностики хламидиозов

1.2.3.1. Серологические методы
1.2.3.2. Методы индикации хламидий
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. МАТЕРИАЛЫ И МРЛОДЫ
2.1.1 II1 гаммы хламидий
2.олучепие хлампдийиых и аитивидовых сывороток
2 1.3 Животные и куриные эмбрионы
2.1.4 Выделение из сыворотки крови барана
2.1 Очистка аитивидовых антител
2.1.6 ояучение иммупоерментных коиыогагов
2.1.7 Концентрирование препаратов антигенов и антител
2 Иммунологические реакции
2.1.9. биохимические методы
2.1 . Статистическая обработка результатов
V РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИИ
3.1. Кулы ивированис, очистка и концентрирование хламидии
3.2 олучсмие антигенов хламидии
3.3. 1 олучсине хламидийиых сывороток
3.3 олучснис хламидийиых сывороток па кроликах
3.3.2. олучснис хламидийиых сывороток па овцах
Получение антител меченных ферментом нсроксидазы для поста 6 нов к и реакции ИФА
3.4.1 Выделение из нормальной сыворотки крови барана у
.2. Иммунизация кроликов препаратом барана для получения ан 7 ти в и.чо во сыворотки
3.4 3 Выделение специфических антител из антинидовых сывороток 7 .4. Мочение антивидовых антител с ферментом нсроксидазы
3.4.5. Контроль иммупонероксидазиых конъюгатов
3 5. Отработка оптимальных условий постановки реакции ИФА для вы 7 явления ан ти тел к антигенам хламидии
3.6 Конструирование набора для иммуноферментной диагностики хла 8 мидио а овец
3.7. Апробация набора для иммуноферментной диагностики хдамидио 8 за овец
3.8 Внедрение набора для иммуноферментной диагностики хламидиоза г овец
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
6 ПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
7 ПРИЛОЖЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ


РСК РДСК и ФА при количсо воином определении антител в этих сыворотках. ИФЛ и РСК РДСК при количественном определении аптихламидийиых антител в сыворотках иммунизированных овец. Научная новизна. Впервые для ветеринарных лабораторий России разрабоан набор компонентов для иммуноферментной диагностики, позволяющим выявлять инфицированных хламидиями овец. Экспериментально доказана возможность повышения эффективности диагностики хламидиоза на . ПФА. Практическая значимость работы. I 4 Набор для иммупофермеитной диагностики хламидиоза овец, утвержденные 3 марта г. Временное наставление по применению набора для иммупофермеитной диагностики хламидиоза овец, утвержденное ГУВ Минсельхоза и продовольствия Российской Федерации марта г. V Всероссийской конференциях Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов, Москва,
2. Всероссийской научнопрактической конференции Вирусные болезни сельскохозяйственных животных, Владимир, г. Всероссийской научной конференции Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных, Москва, г. Ученых советах ВИТИБ. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи, заключительный отчет но научноисследовательской работе, нормативнотехническая документация на изготовление, контроль и применение диагностнкума. Объем и структура диссертации. Диссертационный материал изложен на 8 машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы и приложения. Диссертация иллюстрирована таблицами и рисунками. Список литературы содержит 0 источников, в том числе 5 иностранных. Для диагностики инфекционных заболеваний человека и животных успешно применяются иммуиохиммческие методы, основанные на использовании высоко специфической реакции аигигенантитело. Успех этих методов объясняется их высокой специфичностью и чувствительностью, достигаемой благодаря применению специальных маркеров, позволяющих современными физическими методами рег истрировать образование иммунного комплекса. В качестве маркеров используют флюоресцирующие красители, радиоактивные изогоны, свободные стабильные радикалы, бактериофаги, эритроциты, фермен ты и др. Идея пометить анти тело или антиген молекулой фермента была реализована в г. Лташеа Б. Г а1. ВагГоиг М. Метод, получивший название Иммунофермеитный анализ ИФЛ, первоначально был разработан для гистохимических исследований. Иммунофермеитный анализ как способ количественного определения концентрации антигенов и антител в биологических жидкостях был введен в лабораторную и клиническую практику к начале х годов. Н.ЕпуаП и Р. ИФЛ название ЕЫЯЛ, которое прочно у твердилось в литературе. К.Н. КиЬекяеп в г. ИФЛ без разделения компонентов. К настоящее время имеются сведения о многочисленных методологических разновидностях ИФЛ. Методом иммуноферментного анализа доказана возможность обнаружения антител и антигенов практически для всех известных руин микроорганизмов, вызывающих заболевания человека и живо пых В последнее время 5Ю лет ежегодно публикуется более тысячи ста н посвященных ИФЛ. Это свидетельствует как о популярности метода пк п о трудностях, с которыми приходится сталкиваться авторам при практическом применении данного анализа. Условно иммуноферментиый анализ можно разделить на три основные стадии формирование специфического комплекса АгЛт иммунохимически й процесс, введение в него ферментной метки и се визуализация различными физическими способами. Методы ИФЛ но принципу проведения реакции на первой стадии разделяются на гетерогенный твердофазные и гомогенные. КоКрС1ГГМ. Сначала определяемый антител конкурирует с меченым антиге1 ним в реакции с растворимыми антителами, а татем лебзхляют иммвбилпиимиие ыпипидовыс антитела . А,. ТОГО же вила, что и Ац . Последовательное аьлимодействис иммобилизованных ангитс1 с тестируемым антигеном. Последовательное взаимодействие иммобилизованных антител с тестируемым анткгеном. А и ангнвиловим конъюгатом 5 ,3Л 1.