Получение суспензионной перевиваемой линии клеток тестикул поросенка и оптимизация условий ее культивирования

• Автор: Жданова, Наталья Александровна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 153 с.

Целью исследования являлось получение суспензионной перевиваемой линии клеток тестикул поросенка, оптимизация условий суспензионного культивирования клеток данной линии и оценка их вирусрепродуцирующей активности к адаптированным вирусам. Методом селекции получить новую сублинию перевиваемых клеток ПТП, способную к безопорному росту. Оптимизировать условия суспензионного культивирования линии клеток ПТПс в лабораторных ферментерах посевную концентрацию клеток, время культивирования, скорость перемешивания, условия аэрации, состав питательной среды для обеспечения их максимального накопления. Стабилизировать основные биологические характеристики клеток ПТПс и определить пассажный интервал использования клеток, в течение которого сохраняется их стандартность, включая кариологические показатели. Определить вирусрепродуцирующую активность линии клеток ПТПс к адаптированным вирусам. Изучить возможность использования ряда антимикробных препаратов для повышения уровня надежности процесса суспензионного культивирования клеток по фактору бактериальной контаминации. Получена новая суспензионная перевиваемая линия клеток тестикул поросенка ПТПс, имеющая индекс пролиферации 4 6 в среде с 0, ФГМС на солевом растворе Эрла без солей кальция и магния и сыворотки крови КРС. Оптимизированы условия суспензионного выращивания перевиваемой линии клеток ПТПс в лабораторных ферментерах, обеспечивающие через часа культивирования накопление клеток с плотностью 1,8 2,1 млн клсм3. Установлена пермиссивносгь линии клеток ПТПс к вирусу болезни Тешена штамм Закарпатский и вирусу инфекционного гепатита собак штамм Корнелл2. Определена возможность применения антибактериального препарата цефтриаксона и изучена его стабильность в среде при различных методах культивирования клеток для профилактики контаминации клеточных культур. ПТПс и создан рабочий банк клеток изготовителя БРКИ для глубинного культивирования вирусов болезни Тешена и инфекционного гепатита собак. Паспортизирована перевиваемая линия клеток ПТПс, паспорт утвержден директором ГПУ ВНИИВВиМ г. Методические рекомендации по поддержанию и хранению перевиваемой суспензионной линии клеток ПТПс, утвержденные в установленном порядке РАСХН. Для профилактики бактериальной контаминации клеточных культур предложен цефтриаксон и схема его применения при различных способах культивирования клеток. Культуральные, цитоморфологические, кариологические и вирусрепродуцирующие характеристики суспензионной перевиваемой линии клеток тестикул поросенка ПТПс и се использование в вирусологической практике. Биотехнологические параметры суспензионного способа культивирования указанных клеток ПТПс. Стабильность биологических свойств суспензионной перевиваемой линии клеток тестикул поросенка ПТПс в процессе непрерывного суспензионного культивирования пассажей. Биологические свойства, включая антимикробную активность, антибиотика цефтриаксона при различных способах культивирования клеток стационарный, роллерный монослойный и суспензионный способы. Заседаниях Ученого совета ВНИИВВиМ гг. Международной научнопрактической конференции, декабря г. ВНИТИБП Научные основы производства ветеринарных препаратов, Щелково, г. Россельхозакадемии, Щелково, г. Материалы работы включены в отчеты по НИР ГНУ ВНИИВВиМ и
Основные результаты диссертации опубликованы в 3 научных работах, в том числе 1 в научном журнале по перечню ВАК. Основная часть диссертационной работы автором выполнена самостоятельно. Исследования по определению чувствительности линии клеток ПТПс к вирусам различных таксономических групп проводились на базе лабораторий Эпизоотологии и Музейных штаммов. При выполнении отдельных фрагментов работы оказывали методическую или консультативную помощь сотрудники лаборатории Культур клеток с музеем клеточных штаммов. Автор выражает искреннюю благодарность Юркову С. Г., Смысловой Н. Ю., Кушнир С. Д., Анисимовой Л. И., Филатову , Неверовской Н. С., Леонтьевой , Бурдинской О. Н., Стрижакову , Балышеву В. М., Румянцевой К. А., Телковой , Мадыриной Н.