Физико-химическая характеристика клеточных антигенов эхинококков и разработка иммунопрофилактического средства

• Автор: Сасикова, Марина Руслановна
• Шифр специальности: 03.00.19
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 152 с. : ил.

Введение

Глава . Обзор литерату ры.

1.1. Способы получения и характеристика антигенов эхинококков

1.2. Иммунопрофилактика эхинококкозов

Глава II. Собственные исследования.

2. Материалы и методы.

2.1.1. Получение вторичных ларвоцист i ii, цист Е. , приготовление первичной клеточной
культуры.
2.1.2. Культивирование клеток протосколексов . ii и Е. в синтетической питательной среде, получение клеточных метаболитов
2.1.3. Получение 3днсвных экскреторносекреторных продуктов протосколексов . ii и Е. .
2.1.4. Исследование клеточных метаболитов иммуноферментной реакцией ИФР, выделение антигеноактивных серий, определение в них антигенов паразита реакцией иммунодифузии РИД
2.1.5. Физикохимическая характеристика клеточных метаболитов и 3дневных экскреторносекреторных продуктов протосколексов Е. ii и Е. электрофорезом в полиакриламидном геле ПААГ.
2.1.6. Иммунопрофилактические свойства клеточных антигенов протосколексов . ii в комплексе
2.1.6.1. с иммуномодулятором ГалаВет
2.1.6.2. с иммуномодулятором ронколейкииом.
2.1.6.3. с противоопухолевым биопрепаратом К.
2.1.7. Изучение иммунотерапевтического действия клеточных антигенов протосколексов . ii при экспериментальном альвеолярном эхинококкозе в комплексе
2.1.7.1. с иммуномодулятором ронколейкииом
2.1.7.2. с противоопухолевым биопрепаратом К
2.1.8. Протективные свойства клеточных антигенов . ii при эхинококкозе собак в комплексе с иммуномодулятором
ронколейкииом.
2.2. Результаты исследований.
2.2.1. Анализ данных по культивированию клеток протосколексов Е. ii и Е.
2.2.2. Характеристика и контроль метаболитов клеточных культур и 3дневных экскреторносекреторных продуктов протосколексов из вторичных ларвоцист . ii и Е. .
2.2.3. Отбор и характеристика антигеноактивных клеточных метаболитов клеток протосколексов . ii и Е. ИФР, РИД
2.2.4. Результаты физикохимической характеристики клеточных метаболитов и экскреторносекреторных продуктов протосколексов Е. ii и Е.
2.2.5. Оценка иммунопрофилактического действия клеточных антигенов . ii при экспериментальном вторичном альвеолярном эхинококкозе в комплексе
2.2.5.1. с иммуномодулятором ГалаВет.
2.2.5.2. с иммуномодулятором ронколейкииом
2.2.5.3. с противоопухолевым биопрепаратом К.
2.2.6. Оценка иммунотерапевтического действия клеточных антигенов протосколексов . ii при экспериментальном альвеолярном эхинококкозе в комплексе
2.2.6.1. е иммуномодулятором ронколейкииом
2.2 с противоопухолевым биопрепаратом К
2.2.7. Оценка протекгивиого действия клеточных антигенов Е. ii при эхинококкозе собак с иммуномодулятором
ронколейкином
Обсуждение полученных результатов
Список использованной литературы.
Приложения
Список сокращений
АТ антиген
ИФР иммуноферментная реакция КлАГ клеточный антиген I латекс агглютинации
НРИФ непрямая реакция иммунофлуоресценции
ОП оптическая плотность
ПААТ полиакриламидный гель
РИД реакция иммунодифузии
I А реакция непрямой гемагглютинации
Введение
Актуальность


Особую сложность представляют собой тканевые формы гельминтозов. В связи с вышеизложенным актуальными представляются исследования по разработке иммунопрофилактических средств против ларвального и имагинального эхинококкозов с использованием антигенов паразита различного происхождения и способов получения. В последние годы в паразитологии успешно применяются биотехнологические методы получения антигеноактивных препаратов, к числу которых относится и клеточная инженерия, которая позволяет использовать культуры клеток для решения многих научных и прикладных задач биологии, медицины и сельского хозяйства. Преимущества клеточной технологии в получении антигенов гельминтов и других биологических объектов сводятся к тому, что клеточные культуры можно приготовить из различных антигеноактивных субстанций паразитов и длительное время сохранять в функциональном состоянии в искусственных питательных средах путем их многократного пассирования. Хотя работ но культивированию клеток тканей и органов гельминтов немного, подобные исследования проводились давно и были сделаны конкретные выводы о такой возможности . Гламаздин, , . Очищенные экскреторносекреторные антигены, полученные при культивировании гельминтов рода i, используются для изучения иммунитета и вакцинации животных , i, i, , , , . Для получения специфических антигенов цестод методом клеточной инженерии можно использовать как протосколсксы, так и яйца паразитов, содержащие инвазионные онкосферы. Тем не менее в целях безопасности и с учетом обеспечения необходимой стерильности наиболее предпочтительным является использование протосколексов или герминативной оболочки. Яйца же с инвазионными онкосферами, хотя и обладают значительной антигенной активностью, представляют опасность для исследователей и требуют более тщательной и длительной стерилизации от микрофлоры кишечника, что может повлиять на жизнеспособность получаемых из них клеток и на процесс культивирования. В свете вышеизложенного считаем целесообразными и актуальными исследования по получению клеточных антигенов эхинококков, их физикохимической характеристики и разработки на их основе иммунопрофилактического препарата при эхинококкозе. Цели и задачи исследования Целью работы было получить клеточные антигены и 3дневные экскреторносекреторные продукты протосколексов . Е. , провести их физикохимическую характеристику и разработать на основе клеточных антигенов эхинококков и иммуностимулирующих средств иммунопрофилактический препарат при эхинококкозе. Впервые проведена сравнительная физикохимическая характеристика клеточных антигенов протосколексов . Е. ii и 3дневных экскреторносекреторных продуктов культивирования протосколексов методом электрофореза в ПААГ. Е. соответственно и 9, а . Наиболее четко выраженные мажорные белковые компоненты в исследуемых антигенах протосколексов обоих видов эхинококков располагались в области подвижности белков мол. Да. Антигенные компоненты исследуемых биоматериалов выявляли антитела класса I в сыворотках больных цистной и альвеолярной формой эхинококкоза, что подтверждает значительную идентичность входящих в их состав белковантигенов и возможность их взаимозаменяемости. Впервые изучены протективные свойства иммунопрофилактических препаратов на основе клеточных антигенов протосколексов . ГалаВет, ронколейкином и противоопухолевым биопрепаратом К при экспериментальном альвеолярном эхинококкозе. Эффективность защиты составила соответственно ,7 ,3 0. Установлено, что 2кратная внутримышечная иммунизация собак клеточным антигеном протосколексов Е. Материалы диссертационной работы Сасиковой М. Теория и практика Борьбы с паразитарными болезнями гг. Ученою совета ВИГИС гг. Инвазионные болезни животных Отделения ветеринарной медицины РАСХН протокол . Получение клеточных метаболитов и 3дневных экскреторносекреторных продуктов протосколексов Р. Физикохимическая характеристика клеточных антигенов и 3дневных экскреторносекреторных продуктов протосколексов Е. Иммунопрофилактические свойства клеточных антигенов протосколексов .