Сравнительная диагностическая эффективность клеточных антигенов протосколексов Echinococcus multilocularis в зависимости от типа клеток в культуре

• Автор: Хангалова, Инесса Баторовна
• Шифр специальности: 03.00.19
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 147 с. : ил.

Оглавление
Введение.

I. Обзор литературы

1.1 Биология клетки основные понятия, функции клетки, механизмы,

контролирующие рост клеток.

1.2 Методы клеточной технологии

1.3 Характеристика ларвоцисты эхинококка.

1.4 Антигены i ii и их эффективность в

иммунодиагностике эхинококкозов

II. Собственные исследования.

2.1 Материалы и методы.

2.1.1 Правила работы в лаборатории с клеточными культурами в боксе
2.1.2 Подготовка к опытам лабораторной посуды, резиновых изделий, различных материалов и инструментов
2.1.3 Получение инвазивного материала i ii, заражение белых крыс
2.1.4 Методика получения вторичных ларвоцист Е. ii, приготовление первичной клеточной культуры протосколексов, культивирование клеток протосколексов в синтетической питательной среде
2.1.5 Получение клеточных метаболитов протосколексов i ii, выделение антигеноакгивных серий иммуноферментной реакцией ИФР.
2.1.6 Исследование антигеноактивных серий клеточных метаболитов клеточных антигенов реакцией
иммуноди ффузи и.
2.1.7 Методы цитологических исследований, типирование
культивируемых клеток протосколексов.
2.1.7.1 Фиксация.
2.1.7.2 Методы окрашивания для определения типа клеток в культуре.
2.1.7.3 Типы клеток в неактивных и антигеноактивных сериях клеточных метаболитов протосколексов
. ii.
2.1.8 Диагностическая эффективность клеточных
антигенов протосколексов i ii в ИФР при эхинококкозах в зависимости от типа клеток в культуре
2.1.8.1 с сыворотками крови людей
2.1.8.2 с сыворотками крови свиней.
2.1.9 Статистическая обработка полученных результатов
III. Результаты исследований.
3.1 Цитологическая характеристика клеток первичной клеточной культуры
3.2 Анализ данных по культивированию типов клеток протосколексов i ii, получение антигеноактивных клеточных метаболитов клеточных антигенов
3.3 Иммунохимическая характеристика клеточных антигенов протосколексов . ii
3.4 Сравнительная оценка диагностической
эффективности клеточных антигенов протосколексов i ii в зависимости от типа клеток в культуре
IV. Обсуждение полученных результатов
V. Выводы
VI. Список использованной литературы
Приложение
Введение
Актуальность


По результатам цитологических исследований диссертанта подготовлена Методика фиксации и окрашивания клеток протосколексов i ii в культуре i vi, одобренная секцией Инвазионные болезни животных Отделения ветеринарной медицины сентябрь года. Заседаниях Ученого совета ВИГИС гг. Научной конференции Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями гг. Секции Инвазионные болезни животных Отделения ветеринарной медицины РАСХН гг. Культивирование клеток протосколексов из вторичных ларвоцист . ИФР и приготовление препаратов для цитологических исследований. Цитологическая характеристика клеток протосколексов в культуре i vi в процессе культивирования. Иммунохимический анализ антигеноактивных серий клеточных метаболитов протосколексов, полученных в процессе культивирования и выделенных ИФР. Сравнительная диагностическая эффективность при эхинококкозах клеточных метаболитов протосколексов Е. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, 3 из них в рекомендуемых ВАК изданиях. Материалы диссертации изложены на 8 страницах машинописного текста. Состоят из введения, обзора литературы, раздела собственных исследований, включающего материалы и методы, результаты исследований и их обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Список литературы включает 9 источников, в том числе отечественных и зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 7 таблицами и рисунками. Культивирование клеток эхинококков очень важно для исследования морфогенеза, дифференциации, регенерации органов и тканей паразитических стадий, так как за ними можно наблюдать в процессе метаморфоза Есенгалиев, . Клеточные культуры являются важным объектом в изучении механизмов канцерогенеза и дифференцировки клеток расширяется их внедрение в практику. Помимо производства вакцин культивируемые клетки начинают активно использоваться в современной биотехнологии как продуценты важных биологических веществ Вахтин, . Любая свободноживущая или входящая в состав организма клетка в течение своей клеточной жизни либо готовится к делению, либо в неделящемся состоянии выполняет специализированную функцию, либо находится в недифференцированном состоянии покоя, чтобы по сигналу при благоприятных условиях вновь подготовиться к делению. В условиях, обеспечивающих постоянство параметров среды и нормальное течение внутриклеточных процессов, в популяции культивируемых клеток воспроизводятся регулярные циклы роста и деления клеток, т. ДНК, затем переходили к митозу и одновременно делились. В действительности клетки в культуре неодинаковы и процессы в популяции клеток протекают асинхронно. Довольно часто приходится контролировать степень идентичности свойств клеток в популяции и соответственно определять долю клеток в популяции, обладающую данными свойствами. Например, жизнеспособность клеток может быть оценена по окраске трипановым синим. Синхронизация клеток в культуре достигается различными методами Лдамс, . Один из наиболее простых способов, не требующих дополнительных воздействий на клетки, митотическая тряска митотическая селекция, основанная на снижении адгезивности митотических клеток и более легком их откреплении от стекла или пластика при встряхивании культуры. Этот метод, по мнению , применим к большинству типов клеток, растущих монослойно. Клетки, выделенные из среды, в которой они дифференцировались, часто при этом не делятся и находятся под контролем химических, нервных и пространственных механизмов, регулирующих рост. Процесс культивирования является в высшей степени избирательным, поскольку выделенные клетки должны быстро адаптироваться к новым условиям, преобладать в культуре и расти быстро. Если даже получены такие клетки, то сохранить неизменными и высокоспециализированными их свойства очень трудно. Культивируемые клетки подвержены изменениям, таким, как утрата способности к дифференциации, дегенерации и трансформации. В определенной степени эти изменения являются следствием старения архитектуры клетки. Это явление состоит в том, что диплоидные клетки i vi проходят определенный цикл, завершающийся прекращением митозов, обычно с последующей гибелью клеток.