Диагностическая эффективность иммуноферментных тест-систем (ИФР и дот-ИФА) при трихинеллезе свиней

• Автор: Написанова, Людмила Александровна
• Шифр специальности: 03.00.19
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 160 с. : ил.

Оглавление
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Антигены трихинелл и их характеристика.

1.2. Диагностика трихинеллеза иммуноферментным методом.

1.3. ДотИФА в диагностике гельминтозов

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы

2.1.1. Материалы.

2.1.2. Методы исследований.

а Получение личинок ii ii, приготовление соматического экстракта.

б Получение соматического фракционированного антигена трихинелл.
в Получение экскреторносекреторного антигена трихинелл.
г Физикохимическая характеристика соматического фракционированного и экскреторносекреторного антигенов трихинелл.
д Постановка и учет иммуноферментной реакции при трихинеллезе свиней с экскреторносекреторным антигеном
е Разработка дотИФА при трихинеллезе свиней
ж Изучение динамики антител при экспериментальном трихинеллезе свиней в ИФР и дотИФА
з Диагностическая эффективность ИФР при трихинеллезе свиней с соматическим фракционированным и экскреторносекреторным антигенами
и Диагностическая эффективность дотИФА и ИФР при трихинеллезе свиней с экскреторносекреторным антигеном в производственных условиях.
к Статистическая обработка результатов.
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Анализ данных по получению соматического фракционированного и экскреторносекреторного антигенов ii ii
2.2.2. Анализ данных по физикохимической характеристике соматического фракционированого и экскреторносекреторного антигенов трихинелл
2.2.3. Результаты исследований по постановке и учету иммуноферментной реакции при трихинеллезе свиней с экскреторносекреторным антигеном
2.2.4. Результаты исследований по разработке дотИФА при трихинеллезе свиней
2.2.5. Анализ данных по динамике антител при экспериментальном трихинеллезе свиней в ИФР и дотИФА
2.2.6. Диагностическая эффективность ИФР при трихинеллезе свиней с соматическим фракционированным и экскреторносекреторными антигенами .
2.2.7. Диагностическая эффективность дотИФА и ИФР при трихинеллезе свиней с экскреторносекреторным антигеном.
3. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
4. ВЫВОДЫ
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
Приложение
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Проверили сыворотки от автохтонных свиней испанская селекция в эндемичной по трихинеллезу зоне. Антиген получали из синантропных штаммов северного и африканского. При гельминтологическом вскрытии обнаружили следующих паразитов саркоцисты, эймерии, балантидии, С. Е. , М. О. , . Трихинеллоскопией и искусственным перевариванием подтвердили отсутствие Т. Перекрестные реакции наблюдались только с . Специфичность уровень доверия v i. Результаты, полученные при обследования иберийских свиней, свободных от трихинелл из эндемичной зоны, также показали перекрестные реакции при наличии инвазии . Авторы пришли к выводу, что уровень фона не зависит ни от штамма трихинелл, используемых в качестве антигена, ни от возраста или породы свиней и отметили, более высокий фоновый уровень с сыворотками от испанских свиней по сранению с ландрасами. I А 9 сывороток крови свиней из эндемичного и 0 из неэндемичных по трихинеллезу районов Югославии, а также в качестве контрольных сыворотки свиней с уровнем заражения от до личинок трихинелл ЛТ на 1г мышц и с инвазией 0,9 лтг мышц. В качестве антигена использовали экскреторносекреторные ЭС продукты I, полученные i vi после , или ч культивирования. Методами электрофореза в ПААГ и связывания моноклональными антителами в и часовых ЭС антигенах обнаружены дополнительные белковые фракции с высокой молекулярной массой. Ложнонегативных реакций было больше с и часовыми ЭС антигенами. Делается вывод, что экскреты и секреты, продуцируемые ЛТ в течение часов культивирования i vi, являются высоко специфичными для иммунологической диагностики трихинеллеза свиней. Пятьдесят сывороток убойных свиней с 3мя антигенами поверхностностихосомальным, экскреторносекреторным и экстрактом инвазионных личинок Т. I i . Установили, что первые два антигена были высокочувствительными в I по сравнению с цельным экстрактом личинок трихинел. Вэстернблотинг показал, что основные диагностические компоненты имели молекулярную массу 5, , , и кДа. I1, являющимися основными для диагностики спонтанной инвазии у свиней. После вспышек трихинеллеза в 3х провинциях Таиланда были отобраны сыворотки от свиней в количестве , и образцов и проверены в I с соматическим антигеном. Семь образцов были позитивными. Исследование мышц методом искусственного переваривания показало, что две свиньи из одной провинции и 3 из 5 из второй оказались зараженными. I повторили с экскреторносекреторными АГ и подтвердили инвазию только у 3 зараженных свиней из второй провинции. Было сделано заключение, что I с экскреторносекреторным АГ перспективный лабораторный метод для эпидемиологических обследований и контроля трихинеллеза у человека Vi . Неочищенные экстракты, экскреторносекреторные продукты, именуемые также стихоцитными, личинок Т. Вестернблотингом. С помощью поликлональной сыворотки в продуктах личинок Т. Да. Профиль экскретов и секретов Т. Т. ii, за исключением того, что компонент мол. Да был менее растворимым. Все антигенные компоненты выявлялись в неочищенных экстрактах личинок обоих видов моноклональными антителами, которые распознавали молекулы стихоцитного происхождения, идентифицировали все 3 главных экскреторносекреторных антигена, подтверждая, что эти молекулы являются частью одного эпитопа. Кроме того, эти монАТ идентифицировали 2 другие молекулы в неочищенном экстракте личинок Т. Т. ii и кДа. Двухмерным анализом с помощью моноклональных антител выявлена комплексность антигенов в неочищенном экстракте личинок трихинелл наиболее иммуногенной во всех исследуемых антигенах была молекула мол. Да. Как отметили i . I поверхностностихосомальных иили экскреторносекреторных антигенов мышечных личинок трихинелл. Т. ii в непрямой I с гликопротеиновым экстрактом личинок трихинелл в качестве антигена на 5 свиньях, экпериментально зараженных 0 личинокживотное. Уровень антител у свиней при заражении 0 0 личинок увеличивался медленно до дня, стабилизировался в период с по день, а затем внезапно быстро поднимался до дня после заражения. Все животные реагировали положительно с 8 дня инвазии.