Система малярийный паразит - эритроцит: биохимические основы и действие антималярийных препаратов

• Автор: Гринберг, Леонид Наумович
• Шифр специальности: 03.00.19, 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 386 c. : ил

1ЛАВА I. СИСТЕМА КРАСНОЙ КРОВИ ПРИ МАЛЯРИИ.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МОДЕЛИ И ПРЕПАРАТИВНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

1.1. Обзор литературы .

1.1.1. Краткая характеристика возбудителя .

1.1.2. Некоторые гематологические аспекты малярии

1.1.3. Препаративные методы исследований эритроцитарных форм малярийных паразитов .

1.2. Экспериментальная часть.

1.2.1. Паразитемия и возрастные цопуляции эритроцитов у крыс, зараженных i i

1.2.2. Паразитологическая и гематологическая характеристика мышей, зараженных .i

1.2.3. Удаление лейкоцитов, отделение пораженных эритроцитов, возрастное фракционирование паразитов.

1.3. Резюме.

ГЛАВА П. КИСЛОРОДНЫЙ И КИСЛОТНОЩЕЛОЧНОЙ БАЛАНС КРОВИ
ПРИ МАЛЯРИИ. ФУНКЩЮНАЛШЕ СВОЙСТВА ГЕМОГЛОБИНА В ПОРАЖЕННОМ ЭРИТРОЦИТЕ.
2.1. Физикохимические параметры транспорта газов
и буферной емкости крови .
2.2. История изучения кислородного и кислотнощелочного баланса крови при малярии. .
2.3. Кислородный баланс крови при экспериментальной малярии, вызванной .i
2.4. Кислотнощелочное равновесие крови при экспериментальной малярии, вызванной .i
2.5. Влияние внутриклеточного паразита на функцию гемоглобина. .
2.6. Резюме
ГЛАВА Ш. МЕТАБОЛИЗМ В ЭРИТРОЦИТАХ, ПОРАЖЕННЫХ МАЛЯРИЙНЫМ ПАРАЗИТОМ. ОБМЕН УГЛЕВОДОВ, ЭНЕРГИИ И ОКИСЛИТЕЛЬНОВОССТАНОВИТЕЛЬНЫЕ РЕАКЦИИ
8.1. Обзор литературы
3.1.1. Энергетика и гликолиз. .
3.1.2. Система глутатиона и пентозофосфатный путь.
3.1.3. Антиоксидантная система и другие реакции
3.2. Собственные исследования
3.2.1. Энергетическая характеристика эритроцитов прималярийной инфекции, вызванной
3.2.2. Гликолиз.в эритроцитах, пораженных
РЬбгб
3.2.3. Восстановленный глутатион в пораженных эритроцитах. .
3.2.4. Гемоглобин и аспартатаминотрансфераза в пораженных эритроцитах .
3.2.5. Ферменты пентозофосфатного пути в пораженных эритроцитах
3.2.6. Ферментативная защита клетки от окисления
3.2.7. Ферментативное окисление пиридиннуклеотидов в метаболизме эритроцита и паразита
3.3. Интеграция и регуляция метаболизма в системе паразитэритроцит. .
3.4. Резюме
ГЛАВА У. БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ АНТИМАЛЯРИЙ
НЫХ ПРЕПАРАТОВ РЯДА ХИНОЛИНА.
4.1. Обзор литературы.
4.1.1. Биохимические механизмы шизонтоцидного действия аминохинолинов.
4.1.2. Биохимические механизмы гемолитического действия 8аминохинолинов
4.2. Экспериментальное изучение антималярийного действия соединений ряда хинолина
4.2.1. Гликолиз в пораженных эритроцитах под действием антиыадярийных соединений
4.2.2. Взаимодействие аминохинолинов с ферритемом
4
4.2.3. Дополнительные исследования механизмов анти
малярийной активности производных хинолина
4.3. Экспериментальное изучение гемолитического действия примахина.
4.3.1. Модель для изучения гемолиза i vi . . .
4.3.2. Роль супероксида в окислительном повреждении эритроцитов примахином
4.3.3. Защитный эффект антиоксидантов в отношении гемолиза, индуцированного примахином
4.4. Резюме
ГЛАВА У. ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ И ПРИКЛАДНЫЕ АСПЕКТЫ ПРОВЕДЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
5.1. Биохимические основы взаимодействия малярийного паразита с эритроцитом хозяина
5.2. Использование полученных результатов в научных исследованиях, диагностике и лечении малярии
ВЫВОДЫ.
УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ.
Приложения
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Общим условием является крайне нежелательное присутствие лейкоцитов, имеющих весьма активные метаболические системы, больше напоминающие паразитарные, чем эритроцитарные , 9. Помимо этого следует избегать появления в крови дополнительных ретикулоцитов, так как наличие этих клеток может искажать картину изменений, возникающих в эритроците под влиянием паразита 6, 0. К.Хоумвуд 6, много работавшая в области биохимии малярийных паразитов, подвергла серьезной критике многие экспериментальные данные ряда авторов только на основании недостаточно корректных методов отделения паразитов от контаминирующих мембран и клеток хозяина. По ее мнению, результаты опытов можно считать убедительными, если в работе представлены доказательства чистоты полученных биологических препаратов, либо имеется оценка влияния присутствующих посторонних клеточных элементов. Несмотря на спорность некоторых суждений К. Хоумвуд, мы в целом разделяем ее точку зрения, поскольку внутриэритроцнтар
ный малярийный паразит является многокомпонентной биологической системой. Он окружен рядом мембран, находится внутри эритроцита, который, в свою очередь, вместе с другими клетками и плазмой образует кровь объект первичного исследования. Из крови здоровых животных эритроциты осаждаются простым центрифугированием при 0 При этом лейкоциты образуют сероватый светлый слой клеток, расположенный на самом верху эритроцитаряого осадка. Однако в крови мышей, зараженных р. Ъеье1, накапливаются эритроциты, плотность которых близка к плотности лейкоцитов. Вопервых, это клетки, содержащие зрелых паразитов, которые концентрируются в легкой фракции кровяных клеток при центрифугировании. Вовторых, ретикулоциты, которые и в норме легче нормоцитов 5, при внедрении Р. Ъейе1 становятся еще легче и также располагаются в верхней части столба клеток при центрифугировании. Следовательно отделить лейкоциты от эритроцитов, пораженных р. В специальном исследовании 9 сравнивали различные способы удаления лейкоцитов из крови грызунов, зараженных р. ЪеЬе. В результате авторы пришли к выводу, что наиболее эффективным является пропускание суспензии клеток через колонку с целлюлозой 0. Определение активностей ферментов эритроцитов в гемолизатах облегчается тем, что лейкоциты более устойчивы к лизису сапонином и некоторым другим гемолитическим агентам. Целлюлозу, а достаточно прибавить сапонин ,3 мг на 0 мл суспензии и через мин отцентрифугировать. При этом паразиты и лейкоциты осаждаются в супернатанте кроме растворимых компонентов клетки остаются элементы стромы эритроцитов. Если необходимо удалить строму остатки мембран, субклеточные органеллы ретикулоцитов, то режим центрифугирования доводят до 0 в, а время до I ч. Обсуждая проблему выделения свободных паразитов, можно сослаться на прекрасный обзор Дж. Крейера , где детально описаны существующие методы выделения паразитов, а также морфологические, иммунологические и биохимические признаки получаемых фракций. По мнению этого и других авторов 2, 3, после лизиса пораженных эритроцитов сапонином паразиты, действительно, хорошо сохраняются, но их нельзя считать свободными от примесей эритроцитарного материала. Скорее всего паразиты после сапониновой обработки окружены мембраной паразитофорной вакуоли. Другие методы лизиса пораженных эритроцитов также имеют свои преимущества и недостатки, но ни один из них не дает гарантии получения паразитов, абсолютно чистых от мембран эритроцита . Трудности получения паразитов, свободных от материала клетки хозяина, на наш взгляд, связаны не только с отсутствием совершенного метода препаративного разделения, пригодного для данной биологической системы. На основании многочисленных данных литературы и собственных наблюдений, которые описаны в гл. Ш, мы полагаем, что основной причиной методических трудностей является тесная интеграция структурных компонентов и метаболических путей между паразитом и эритроцитом. Для подтверждения этого положения можно привести несколько примеров. Согласно современным представлениям, паразитофорная вакуоль образуется при впячивании плазматической мембраны эритроцита под влиянием проникающего в клетку паразита 5, 8.