Реакция здоровых и опухолевых клеток организма животных на воздействие физических факторов

• Автор: Сергеева, Екатерина Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.16
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Красноярск
• Количество страниц: 243 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. МЕТОДОЛОГИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ

1.1. Асцитная карцинома Эрлиха как модель для инициации различных видов клеточной гибели

1.2. Особенности апоптоза и некроза в опухолевой ткани.

1.3. Регуляторная роль АФК и характеристика ферментативного звена антиоксидантной системы.

1.4. Механизмы биологических эффектов лазерного излучения и магнитных нолей

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Экспериментальная модель

2.2. Исследование блеббинга плазматической мембраны клеток асцитной карциномы Эрлиха i vi.
2.3. Определение степени ПОЛ по содержанию малоиового диальдегида
2.4. Получение раствора карбоксигемоглобина для опытов i vi
2.5. Определение сульфгидрильных групп в белках
2.6. Методика определения активности супероксиддисмутазы
2.7. Методика определения активности каталазы
2.8. Методика определения активности глутатионпероксидазы.
2.9. Методика определения активности глутатион8трансферазы
2 Методика определения концентрации глутатиона.
2 Измерение микровязкости мембран клеток.
2 Измерение мембранного потенциала и функции митохондрий методом МТТтеста.
2 Определение дыхания митохондрий и неорганического фосфата
2 Методы выделения и электрофореза ДНК.
2 Статистическая обработка результатов.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ДЕЙСТВИЯ ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ С ДЛИНОЙ ВОЛНЫ 3 НМ НА ОПУХОЛЕВЫЕ И ЗДОРОВЫЕ КЛЕТКИ МЫШЕЙОПУХОЛЕНОСИТЕЛЕЙ И ЗДОРОВЫХ МЫШЕЙ I VI И I VIV.
3.1. Влияние излучения второй гармоники лазера с длиной волны 3 нм на процесс блеббинга, ПОЛ, показатели МТТтеста клеток асцитной карциномы Эрлиха и концентрацию карбоксигемоглобина i vi .
3.2. Влияние излучения второй гармоники лазера с длиной волны 3 нм на процесс блеббинга, ПОЛ и показатели МТТтеста клеток костного мозга мышей с асцитной карциномой Эрлиха и здоровых мышей i vi
3.3. Влияние излучения второй гармоники лазера с длиной волны 3 нм на процесс блеббинга, ПОЛ и показатели МТТтеста клеток печени мышей с асцитной карциномой Эрлиха и здоровых мышей i
vi.
ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ДЕЙСТВИЯ МАГНИТНЫХ ПОЛЕЙ НА ОПУХОЛЕВЫЕ И ЗДОРОВЫЕ КЛЕТКИ МЫШЕЙОПУХОЛЕНОСИТЕЛЕЙ И ЗДОРОВЫХ МЫШЕЙ I VI И I VIV.
4.1. Влияние различных частот переменного магнитного поля на выживаемость клеток асцитной карциномы Эрлиха, печени и костного мозга мышейопухолсносителей и здоровых мышей по показателям МТТтеста
i vi
4.2. Влияние различных режимов воздействия магнитными полями на среднюю и максимальную продолжительность жизни мышейопухоленосигелей, скорость накопления асцитической жидкости, величину опухолевого узла и концентрацию карбоксигемоглобина в крови i viv
4.3. Изменение количества быстрорсагирующих и медленнореагирую
щих групп при действии комбинированных постоянного и низкочастотного переменного магнитных полей в клетках асцитной карциномы Эрлиха и асцитной жидкости.
4.4. Действие комбинированных постоянного и низкочастотного переменного магнитных полей на процессы блеббинга и перекисное окисление липидов клеток асцитной карциномы Эрлиха i vi.
4.5. Действие комбинированных постоянного и низкочастотного переменного магнитных полей на процессы блеббинга и перекисное окисление липидов клеток печени мышей с асцитной карциномой Эрлиха и здоровых мышей i vi
4.6. Действие комбинированных постоянного и низкочастотного переменного магнитных полей на процессы блеббинга и перекисное окисление липидов клеток костного мозга мышей с асцитной карциномой Эрлиха и здоровых мышей i vi.
4.7. Изменение ферментативной активности каталазы, супсроксиддис
мутазы, глутатионпероксидазы, глутатион8трансферазы и количества глутатиона при действии комбинированных постоянного и низкочастотного переменного магнитных полей в асцитных клетках, клетках печени и костного мозга мышей с асцитной карциномой Эрлиха и здоровых мышей i viv.
4.8. Изменение мембранного потенциала митохондрий клеток печени и асцитных клеток, клеток костного мозга, асцитных клеток мышей с асцитной карциномой Эрлиха при действии комбинированных постоянного и низкочастотного переменного магнитных полей i viv
4.9. Изменение микровязкости мембран асцитных клеток, клеток костного мозга, мембран митохондрий асцитных клеток мышей с асцитной карциномой Эрлиха при действии комбинированных постоянного и низкочастотного переменного магнитных полей i viv
4 Фрагментация ДНК при действии комбинированных постоянного и низкочастотного переменного магнитных полей.
ГЛАВА 5. МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ КОМБИНИРОВАННЫХ ПОСТОЯННОГО И НИЗКОЧАСТОТНОГО ПЕРЕМЕННОГО МАГНИТНЫХ ПОЛЕЙ И ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ ДЛЯ ИНИЦИАЦИИ ГИБЕЛИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК
5.1. Механизм действия излучения лазера с длиной волны
нм для инициации гибели опухолевых клеток.
5.2. Механизм действия комбинированных постоянного и низкочастотного переменного магнитных полей для инициации гибели опухолевых
клеток
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Другой путь связан с активацией каспазы 9 медиатор митохондриального пути апоптозного сигналинга в результате образования гетеродимеров белков семейства Вс Щепина, , третий осуществляется при помощи гранзимов В. Такой путь актуален в случае индукции апоптоза цитотоксическими Тлимфоцитами, при этом необходимо присутствие порообразующих белков перфоринов. Гранзим А относится к семейству трипсинов, расщепляет пептидные связи лизина и аргинина. Гранзимы В расщепляют пептидные связи аспартата, их мишенями являются каспазы 1, 3 и 9, , , . Каспаза 8 первая из каспаз апоптотического каскада, активируемая взаимодействием лиганда с рецептором или x с 1 , . Связывается с любым из этих рецепторов через адапторную молекулу i i, образуя I сигнальный комплекс, индуцирующий гибель клетки, в составе которого предшественник подвергается прогеолитической активации гранзимом В, каспазой и дополнительному автокаталитическому процессингу зрелой каспазой 8. Нротеолитически инактивирует полиАТФрибозополимеразу i, расщепляет i, находящийся в цитоплазматической фракции погибающих клеток, на два фрагмента 6,5 кДа концевой полипептид и кДа Скоицевой, содержащий ВН3 домен. Последний перемещается в митохондрии, индуцируя высвобождение митохондриального цитохрома с в цитоплазму , . По одной версии i встраивается во внешнюю мембрану митохондрий, образуя пору, что способствует выходу цигохрома с из межмембранного пространства. По другой версии i взаимодействует с переносчиком адениловых нуклеотидов, стимулируя открытие поры во внутренней мембране митохондрий. В результате митохондрии набухают, что ведет к разрыву внешней мембраны и выходу цитохрома с. По третьей версии, роль i заключается в олигомеризации проапоптозного белка Вах. После олигомеризации Вах приобретает способность либо встраиваться во внешнюю мембрану митохондрий, образуя пору, либо вызывает закрытие порформирующего белка V v , чья активность также регулируется трансмембранным градиентом потенциала мВ и полианионами Егорова, , и тормозит транспорт через внешнюю мембрану. Это ведет к подавлению синтеза АТР, повышению мембранного потенциала, набуханию матрикса митохондрий и нарушению целостности внешней мембраны Белецкий, v, . Высвобождение цитохрома с включает формирование апоптосомы, состоящей, помимо цитохрома с, из прокаспазы 9 и протеазоактивирующего фактора 1, который может взаимодействовать как с прокаспазой 9 Кконцевыми Здоменами в присутствии АТФ, так и с ингибитором апоптоза X,. В первом случае происходит расщепление на субъединицы р и р и активация каспазы 9, индуцирующей иротеолиз эффекторной каспазы 3, во втором ингибирование этого процесса. Каспаза3 подобные лротеазы ответственны за активацию цитоплазматической эндонуклеазы iv xi, расщепляющей ДНК на олигонуклеосомальные фрагменты. ДНК. Помимо цитохрома с, в цитоплазму из митохондриальной поры высвобождается белок межмембранного пространства I i ii , зависимый флавопротеин, транслоцирующийся в ядро и индуцирующий конденсацию хроматина по периферии и расщепление его на крупные не олигонуклеосомальные фрагменты i, , . Ингибирование митохондриального пути аиоптоза может быть осуществлено на различных уровнях, помимо антиапоптозных белков семейства 2 2, X, протеинами I iii i i, связывающимися с эффекториыми каспазами 3,7 и 9. К представителям семейства I относятся белки I нейрональный, XI Хсценленный, I1, I2 и сюрвивин vivi, содержащий Iпоследовательность бакуловируса. Сюрвивин регулирует прогрессию клеточного цикла в фазах 2, ассоциируясь с микротрубочками митотического веретена, непосредственно ингибирует активность каспаз 3 и 7, освобождает циклинзависимую киназу 4 от ее ингибитора р , транслоцирует ее в ядро для инициации вхождения клетки в фазу клеточного цикла. Описана гиперэкспрессия сюрвивина в значительной части опухолей человека, но не в нормальных тканях. Протеины семейства I в свою очередь инактивируются белком I iiiv iv i I ii i i i. Другая возможность ингибирования митохондриального пути апоптоза заключается в трансдукции сигналов выживания ростовых факторов и цитокинов, которые активируют фосфоинозитол3киназный путь I3. Протеинкиназа I3 активирует АКТкиназу. Вс.