Разработка технологии получения нового биопрепарата для восстановления нефтезагрязнённых акваторий на примере Балтийского моря

• Автор: Сребняк, Екатерина Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.16, 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 124 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Анализ методов исследования и особенностей природных ассоциаций углеводородокисляющих бактерий ПАУОБ

1.1.1. Выделение и исследование ПАУОБ.

1.1.2. Качественный состав ПАУОБ.

1.1.3. Физиологические и биохимические свойства углеводородокисляющих бактерий УОБ.

1.1.3.1. Поверхностноактивные свойства УОБ

1.1.3.2. Бактериальный матрикс.

1.1.3.3. Биохимические пути окисления углеводородов бактериями

1.2. Способы очистки нефтезагрязннных акваторий.

1.2.1. Биовосстановление нефтезагрязннных акваторий.
1.2.2. Биопрепараты
1.3. Методы определения эффективности бактериальной очистки нефтезагрязннных акваторий.
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
2.1. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1.1. Определение анионного состава воды
2.1.2. Получение накопительных культур.
2.1.3. Количественный учт.
2.1.4. Выделение чистых культур и идентификация УОБ
2.1.5. Экспрессметод определения полианионной природы межклеточного матрикса УОБ с цетавлоном
2.1.6. Получение поверхностной плнки микромицета
2.1.7. Конструирование биопрепарата
2.2.3.1. Определение общего содержания нефти методом ИК спектроскопии
2.2.3.2. Хроматограммы изменения налканов и их количество в нефтсзагрязннной и очищенной АУОБ морской воде
2.2.3.3. Изменение группового состава углеводородов в морской воде, очищенной ПАУОБ от нефтяного загрязнения.
2.2.3.4. Результаты биотестирования очищенной морской воды на микроводорослях i i и iii.
2.2.3.5. Результаты биотестирования культур ПАУОБ на микроводорослях . i и . iii.
2.2.3.6. Результаты биотсстирования очищенной морской воды на ракообразных i i.
2.2.3.7. Результаты биотсстирования культур ПАУОБ на ракообразных . i.
2.2.3.8. Результаты биотестирования биопрепарата Морской снег на микроводорослях . iii и ракообразных . i.
2.2.3.9. Определение фотосинтетической активности микроводорослсй спектральным методом.
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Молекулы компонентов нефти могут быть разрушены и преобразованы в безопасные формы только биологическими агентами , . Углеводородокисляющие бактерии являются обычным компонентом морских вод. В г. , а Крисс, . В этой и других работах было показано, что бактериальная биота морской воды содержит виды бактерий, активно разлагающих углеводороды. Таким образом, ПДУ ОБ представляют собой стратегический ресурс моря и являются единственным компонентом, способным очистить акваторию от нефтяного загрязнения Техника и технологии локализации и ликвидации аварийных разливов нефти и нефтепродуктов, . . Изучение обитающих здесь микроорганизмов особенно интересно, так как в поверхностном слое часто концентрируются загрязняющие вещества, в частности нефть и нефтепродукты i, . О толщине поверхностного микрослоя океана до сих пор нет единого мнения. Согласно одной точке зрения, его толщина не превышает размера нескольких молекул, а по результатам последних исследований можно считать, что своеобразие структуры поверхностного слоя распространяется на ЮООА и более. В зависимости от характера волнения толщина этого слоя может оцениваться от 53 до 0,1 см, составляя в среднем около 0, см Михайлов, . Для отбора проб из поверхностного микрослоя на микробиологический анализ разработаны различные приспособления, захватывающие в зависимости от конструкции слой толщиной от мкм до 12 см Ильинский, Цыбань, i, . Как правило, чем тоньше слой воды, отбираемой для анализа, тем большие количества микроорганизмов удается обнаружить. Наибольшее распространение для отбора проб из поверхностного микрослоя получили методы Харвея v . Гаррета , . Также применяют пробоотборник с капроновой сеткой вместо металлической Михайлов, . В ряде лабораторий для определения численности углеводородокисляющих бактерий методом предельных разведений используют морскую калийнодрожжевую среду МКД. В состав среды МКД кроме нефти входит дрожжевой экстракт мгл, который играет роль источника витаминов и факторов роста. В то же время это легкодоступный источник углерода для многих микроорганизмов Коронелли и Ильинский, . Большинство авторов учитывают углеводородокисляющую микробиоту на безвитаминных средах, поскольку эти микроорганизмы синтезируют сами все необходимые для роста вещества. i, , . Морская калийнодрожжевая среда готовится на основе морской воды. Морская вода, взятая в разных акваториях Мирового океана Ильинский, , неодинакова по солевому составу и может также содержать органические вещества, ингибирующие или стимулирующие рост бактерий. Использование жидкой среды, приготовленной на такой воде, может привести к завышению или занижению численности учитываемых на ней бактерий . Поэтому для приготовления жидких сред большинство морских микробиологов используют либо искусственно приготовленную морскую воду, либо старую морскую воду, что нашло отражение в практических руководствах и статьях , , i . i, . Для получения старой морской воды свежую воду выдерживают в темноте в течение нескольких месяцев в зависимости от количества в ней органических веществ до полной их минерализации , Коронелли и Ильинский, . Важную роль при учете углеводородокисляющих бактерий на жидких средах играет буферность среды недостаточная буферность приводит к занижению результатов определения численности i, . Буферность среды МКД очень низка она содержит малые количества фосфатов, и кроме этого в ее состав входит соль слабого основания и сильной кислоты 41, существенно подкисляющая среду. Вероятно, для устранения этого действия авторы методики рекомендуют добавлять до 7,27,5. В результате буферная система морской воды, на которой готовится среда МКД, нарушается. Большое значение для получения адекватных сведений о численности бактерий в природных водах наряду с составом среды имеют условия и сроки инкубирования посевов. Инкубировать посевы желательно при температуре, близкой естественной в месте отбора пробы.