Изучение мутагенного и рекомбиногенного действия рентгеновского облучения на дрожжи-сахаромицеты

• Автор: Солдатов, Сергей Павлович
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 140 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Обзор литературы

Глава I. Репарация ДНР ДНК у дрожжей

Глава П. Мутанты дрожжей с повышенной чувствительностью

к ионизирующим излучениям

Глава 3. Генетическая нестабильность у дрожжей

Глава 4. Мутагенность генетической рекомбинации

Материалы и методы

Результаты и обсуждение

Глава I. Генетическая нестабильность по признаку

морфологии колоний у дрожжей сахаромицетов, индуцированных рентгеновским облучением
Глава П. Изучение мутаций по гену ьу индуцированных
рентгеновским облучением у гаплоидов и диплоидов дрожжей
Выводы
Список сокращений
Список литературы


Одним из наиболее убедительных свидетельств роли ДНР ДНК в гибели клеток являются данные по изучению репарации ДНР у радиочувствительных мутантов различных организмов. Так У i i i . В клетках дрожжей ,i, i, i, И ii i i,i, мутанты с повышенной чувствительностью к ионизирующей радиации не способны репарировать ДНР и гибель мутантных клеток наблюдается при дозах, вызывающих 12 двунитевых разрыва на клетку. У дрожжей, так же как у целого ряда других организмов обнаружена эффективная репарация ДНР при инкубации в питательной среде у гаплоидных клеток в логарифмической фазе роста Но, i, и у диплоидных клеток в логарифмической фазе роста i, i, . Это было показано по увеличению молекулярного веса ДНК с помощью седиментационного анализа. Эта репарация осуществлялась за 34 часа. Королев, Грачева, высказали предложение о рекомбинационном механизме репарации ДНР ДНК. Резник иеБпск , предложил две так называемые рекомбинационные модели репарации ДНР Согласно первой модели рис. ДНК образуются липкие концы рис. Затем происходит надрезание неповрежденного дуплекса и высвобождение одной из его полинуклеотидных нитей, которая образует иетеродуплекс с гомологичной последовательностью липкого конца порванного дуплекса рис. После этого липкий конец удлиняется в результате работы ДНКполимеразы рис. ДНК другого липкого конца во второй части порванного дуплекса рис. Эта модель не подкреплена экспериментами, указывающими на то, что такая последовательность событий действительно имеет место. Вторая модель рис. ДНК. В этом случае также происходят события в районе ДНР, приводящие к ситуации, представленной на рис. I в. Отличие заключается в том, что раскручивание диссоциация нити из неповрежденного дуплекса происходит на большем протяжении, что позволяет свободному концу второго фрагмента разорванной молекулы вступать в синапсис с неповрежденным гомологом с образованием полухиазмы Холидея с двумя гетеродуплексами рис. Затем в районе одного или обоих гетеродуплексов могут происходить процессы репликации, диссоциации гетеродуплексов, воссоединения первоначальной структуры гомологов, аналогично тому, что показано на рис. I г, д. Рис Л. Рекомбинационная модель репарации двунитевых . В ДНК Яезпл. Два гомологичных дуплкса ДНК с двойным разрывом, б Деградация ДНК от места разрыва к 3концам, в Образование гетеродуплексной структуры, г Синтез ДНК с 30Н конца в гетеродуплексе, д Возвращение неповрежденного дуплекса к своему исходному состоя нию и воссоединение вновь синтезированного района с другим фрагментом поврежденного дуплекса. ДНК. Для этого необходим вторичный эндонуклеолитический разрыв интактной нити неповрежденной молекулы в точке, отмеченной стрелкой на рис. В результате образуются две хромосомы, рекомбинантные по фланговым, по отношению к ДНР, маркерам рис. Для завершения репарации необходимо участие ДНКполимеразы и ДНКлигазы. Следовательно, последняя модель репарации ДНР подразумевает обязательный реципрокный митотический кроссинговер по фланговым, по отношению к участку репарации ДНР, маркерам. Кроме того, коррекция гетеродуплексов в районе репарации ДНР может приводить к нереципрокной рекомбинации конверсии. Следует отметить, что модель рекомбинационной репарации ДНР ДНК предложена ранее Королевым и Грачевой для ДНР, индуцируемых распадом включенного р. Рассмотренные выше схемы не исчерпывают всех возможностей для репарации ДНР с участием двух гомологичных дуплексов ДНК. В нашей лаборатории была предложена гипотеза о существовании у дрожжей особого пути репарации ДНР ДНК путем синтеза v утраченного фрагмента Лучник и др. Эта гипотеза подробно будет обсуждена в разделе, посвященном генетической нестабильности у дрожжей. Первое экспериментальное доказательство рекомбинационного механизма репарации ДНР ДНК было представлено в нашей лаборатории i i. Лучник и др. В этих работах была использована система восстановления облученных ионизирующей радиацией клеток в непитательной среде , разработанная Корогодиным .