Изучение морфологии, структуры и пространственной организации хроматина трофоцитов яичников Calliphora erythrocephala : Diptera: calliphoridae

• Автор: Ананьина, Татьяна Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 104 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Трофоциты яичников насекомых происхождение, развитие и функция

1.1.2. Политснизация хроматина трофоцитов яичников формирование первичных политенных хромосом.

1.1.3. Пространственная организация политенных хромосом трофоцитов

1.1.4. Эндомитотические преобразования и формирование ретикулярной

структуры хроматина в ядрах трофоцитов

1.2. Интерфазное ядро основные принципы ядерной архитеюуры.

1.2.1. История вопроса

1.2.2. Современные представления о структуре интерфазного ядра компартментализация ядра, хромосомные территории, территории активных и неактивных генов, хромосомная динамика, регуляторные взаимодействия между хромосомами.
1.3. Использование метода микродиссекции для изучения структуры и локализации хромосомных районов.
1.4. С. егуИгосерю1а М как объект цитогенетических исследований
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3. 1. Развитие фолликулов и политенных хромосом трофоцитов яичников С. егу1ИгосерИа1а
3.1.1. Развитие фолликулов яичников.
3.1.2. Морфология хроматина трофоцитов яичников С. егуИгосер1ю1а. Формирование первичных политенных хромосом
3.1.2. Формирование вторичных ретикулярных ядер.
3.1.3. Влияние температу ры на динамику изменения морфологии хроматина
трофоцитов С. егИуМгосерИЫа.
3.2. Идентификация первичных политенных хромосом трофоцитов яичников
С. егуОгосерЪаа
3.3. Взаиморасположение первичных политенных хромосом в ядрах трофоцитов яичников С.
3.4. Флуоресцентная i i гибридизация I ДНКбиблиотск, полученных методом мнкроднссекции, на первичные политенные хромосомы трофоцитов С. .
3.4.1. Хромосомоспецифичная Дбиблиотека хромосомы 6.
3.4.2. Хромосомоспецифичная ДНКбиблиотека хромосомы 3
3.4.3. Районоспецифичная ДНКбиблиотека хромосомы 2.
3.5. III ДНКбиблиотск на ядра трофоцитов с различной морфологией хроматина
3.6. Упорядоченность хроматина в высокополиплоидном ретикулярном ядре
хромосомные территории.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Трофоциты яичников насекомых прекрасная модель для изучения важнейших клеточных процессов, происходящих в интерфазном ядре эндоредупликации, транскрипции, пространственной реорганизации интерфазного хроматина, являющейся ключевым событием в процессе видообразования Стегний, . Несомненна их огромная роль не только в обеспечении ооцнта всеми необходимыми для формирования яйца продуктами, но и в создании видоспецифичной конформации цито и нуклеоплазмы ооцита, т. Айзснштадт, . Формирование политенных хромосом с последующим переходом их материала от сильно компакгизованного диски первичных политенных хромосом к деком пактизо ван ному состоянию хроматина ядра с ретикулярной структурой позволяет оценить значение уровня компактизации хроматина и общей архитектоники шггерфазного ядра в процессе оогенеза. Данный объект является уникальным для проведения детального анализа воздействия внутренних и внешних факторов на динамику изменений структурнофункциональной организации ядра. Цели и задачи исследования. Цслыо дайной работы является изучение пространственной организации и структуры хроматина трофоцитов яичников С. Изучить развитие фолликулов яичников и изменение морфологии хроматина трофоцитов. Идентифицировать первичные иолитенные хромосомы трофоцитов и проанализировать их пространственное взаиморасположение. Получить ДНКбиблиотски путем микродилетнрования районов и хромосом для изучения пространственной организации хроматина ядер трофоцитов. Проанализировать локализацию ДНКбнблнотек в ядрах трофоцитов с различной морфологией хроматина. С помощью ДНКзондов оценить упорядоченность хроматина в ядрах трофоцитов с ретикулярной струюурой хроматина. Научная новизна. Впервые показано, что но морфологии хроматина трофоцитов яичников С. Проведена идентификация первичных политенных хромосом трофоцитов методом сопоставления с цитологической картой вторичных политенных хромосом и оценена их пространственная организация в ядре. Впервые для изучения архитектуры ядер трофоцитов яичников С. I полученных ДПКпроб с хроматином трофоцитов. Получена информация об особенностях гибридизации ДНКпроб с хроматином, находящимся на различных стадиях эндомитотического цикла. Впервые показано, что у С. Основные результаты получены автором самостоятельно. Мнкродиссекция, ПЦР и I проводились на базе лаб. ИЦиГ СО РАН совместно с д. И. Б. Рубцовым и к. Т.В. Карамышевой. Практическая ценность работы. Практический интерес имеет применение методики мнкроднссекции политенных хромосом для изучения пространственной организации интерфазных ядер, модификация методики флуоресцентной i i гибридизации I для работы с хромосомами трофоцитов яичников насекомых. Работа имеет теоретическое значение в области цитогенетики. Апробация результатов. Результаты исследований были представлены на Научных чтениях Проблемы эволюционной цитогенетики, селекции и интродукции, посвященных 0летию профессора В. П. Чехова, Томск Конференции Сибирская школа молодого ученого, Томск II Съезде ВОГиС, СПетсрбург XIV Всероссийском совещании Структура и функции клеточного ядра, СПетербург I Съезде Общесгва клеточной биологии и Международном симпозиуме по проблемам мейоза, СПстсрбург . Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ. Благодарности. Выражаю глубокую признательность и благодарность В. П.Степино за руководство и помощь в проведении исследований и написании диссертации. Особая благодарность Н. Б.Рубцову и Т. В.Карамышсвой за руководство, огромную помощь, максимальное содействие и обсуждение молекулярноцитологической части раборты. Хочу искренне поблагодарить Т. Б.Н. Кудрявцева, Н. А.Попову и Л. П.Кузнецову за ценные комментарии и проявленный интерес к работе, И. Э.Вассерлауф за постоянную поддержку и ценные советы при написании диссертации, А. К.Сибатаева за методическую и организационную помощь, А. Е.Всдерникова за помощь в культивировании и участие в работе по микродиссскции и флуоресцентной i i гибридизации. Большое спасибо моим коллегам из лаборатории эволюционной цитогенетики НИИ Биологии и Биофизики за участие, моральную поддержку и постоянный интерес к проводимым исследованиям.