Исследование генов иммунной системы низших позвоночных

• Автор: Алябьев, Борис Юрьевич
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 116 с.

Содержание

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Врожденный иммунный ответ

1.1.1. Врожденный иммунный ответ беспозвоночных.

1.1.2. Врожденный иммунный ответ высших беспозвоночных.

1.1.3. Врожденный иммунный ответ млекопитающих

1.1.4. Хемокины и их рецепторы.

1.1.4.1. Структура и классификация хемокинов и их рецепторов

1.1.4.2. Хемокины и ангиогенез.

1.1.4.3. Роль хемокинов в росте и метастазировании опухолей.
1.1.4.4 Роль хемокинов в органогенезе и миграции лимфоцитов.
1.1.4.5. Хемокины в противовоспалительной и противовирусной терапии
1.1.4.6. Хемокины и их рецепторы у низших позвоночных
1.2. Адаптивный иммунный ответ
1.2.1. Клеточная основа адаптивного иммунитета
1.2.2. Антигенраспознающие молекулы иммунной системы
позвоночных
1.2.3. Надсемейство генов иммуноглобулинов генетическая основа адаптивного иммунного ответа
1.2.4. Иммуноглобулины белковые молекулы, осуществляющие у позвоночных функцию гуморального иммунитета.
1.2.4.1. Иммуноглобулины птиц.
1.2.4.2. Иммуноглобулины рептилий.
1.2.4.3. Иммуноглобулины амфибий
1.2.4.4. Иммуноглобулины костистых рыб
1.2.4.5. Иммуноглобулины костнохрящевых рыб
1.2.4.6. Иммуноглобулины хрящевых рыб.
1.2.5. Структура и функции Тклсточного рецепторного комплекса
1.2.5.1. Структура Тклеточного рецепторного комплекса
1.2.5.2. Сигнальные мотивы Тклеточных рецепторных комплексов.
1.2.5.3. Эволюция Тклеточного рецепторного комплекса.
1.3. Эволюция генов иммунного распознавания.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Объект исследования
2.2. Материалы и реактивы.
2.3. Выделение лейкоцитов из крови.
2.4. Выделение и очистка нуклеиновых кислот.
2.4.1. Выделение ДНК
2.4.2. Выделение РНК
2.5. Электрофоретическое разделение нуклеиновых кислот
2.5.1. Гельэлектрофорез ДНК
2.5.2. Гельэлектрофорез РНК
2.6. Микробиологические методы
2.6.1. Химическая трансформация Е.СоН.
2.6.2. Электротрансформация.
2.7. Синтез кДНК
2.8. Амплификация библиотеки кДНК.
2.9. Приготовление радиоактивно меченых зондов
2 Скрининг библиотек рекомбинантных клонов.
2 Полимеразная ценная реакция и олигонуклеотиды
2 КТПЦР.
2 Методы работы с рекомбинантной ДНК.
2 Блотгибридизация нуклеиновых кислот.
2 Определение нуклеотидной последовательности
2 Субтрактивная гибридизация.
2 Компьютерный анализ последовательностей
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Поиск генов иммунной системы низших позвоночных
3.2. Идентификация 1Ь8 гомолога у миноги раннее эволюционное
происхождение и дивергенция семейства хемокинов.
3.3. Клонирование СХСЯ4 гомолога костнохрящевых рыб и
характеризация СХСК4специфичных структурных особенностей.
3.4. Клонирование генов легких цепей иммуноглобулинов стерляди
3.4.1. Клонирование кДНК. кодирующей вариабельную область легких
цепей иммуноглобулинов стерляди.
3.4.2. Клонирование VIи У2 семейств генов иммулобулинов стерляди
3.4.3. Не случайная ассоциация VI С1 и У2 С2 генов.
3.4.4. Построение филогенетического дерева
3.4.5. Обсуждение.
3.5. Клонирование и анализ генов, кодирующих СИЗвсубъединицу Т
клеточного рецепторного комплекса стерляди
3.5.1. Клонирование.
3.5.2. Анализ СЕЗе1 и СЮЗе2 вариантов
3.5.3. Консервативные структурные мотивы СДЗе стерляди
3.5.4. Обсуждение.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
Список литературы


Идентификация и анализ консервативных структурных особенностей генов иммунной системы низших позвоночных вносит существенный вклад в эволюционную иммунологию. Изучение иммуной системы миноги и стерляди вносит вклад в частную иммунологию исследованных видов, тем более, что они до сих пор оставались белым пятном в этой области исследований. Проведенный филогенетический анализ генов I позвоночных дает основания полагать, что наблюдаемые у современных видов типы легких цепей возникли в результате перетасовки предковых репертуаров V и С генов и последующих экспансии и сокращения различных комбинаций видоспецифическим образом. Идентификация 3 субъединицы комплекса у стерляди создает основу для поиска и анализа генов Тклеточных рецепторов у более примитивных позвоночных, таких как хрящевые рыбы и. Клонирование лейкоцитспеиифичной кДНК. 8 родственный альфахемокин миноги открывает новые возможности в изучении депонирования и миграции клеток лейкоцитарного ряда миноги и, соответственно, выявлении органов иммунной системы. Кроме этого, имея альфахемокин миноги как лиганд, становится возможным выявление рецептора хемокина и его клеточной локализации. В дальнейшем данные структурнофункционального анализа X4 могут быть полезными в разработке про тивовирусной и противовоспалительной терапии. Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на 4 i i i I, . i. и на отчетной сессии Института цитологии и генетики, г. Благодарности. Автор выражает благодарность своему научному руководителю Таранину Александру Владимировичу за мудрое и чуткое руководство при проведении экспериментальных работ и написании диссертации, сотрудникам лаборатории иммуногенетики Наякшину Александру Матвеевичу, Белоусову Евгению Сергееевичу, Перемыслову Валерию Вадимовичу, Мечетиной Людмиле Васильевне, аспиранту Гусельникову Сергею Владимировичу за помощь в проведении экспериментальных работ. Автор выражет признательность Блинову Александру Геннадьевичу за внимательное прочтение диссертации и сделанные конструктивные замечания и дополнения. Также автор благодарен всем, взявшим на себя труд прочитать эту рукопись. Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Историю человечества рассматривают с ратных аспектов как историю завоеваний и правителей, как историю религий и культурного наследия, но в то же время ее можно рассматривать как историю болезней и выздоровлений или смерти. Чтобы понять различие между здоровьем и болезнью, и, соответственно, найти пути к здоровью, человек изучает иммунную систему. Способность распознавать некую степень чужеродности или несвоего является универсальной для всех живых существ. Даже у бактерий существует, например, системы рестрикциимодификации, препятствующие проникновению и функционированию в клетке чужеродного генетического материала. Врожденный неадаптивный иммунный ответ. Специфический адаптивный иммунный отвез. Подходя чисто формально, иммунный ответ можно определить как индуцибельный защитный механизм, позволяющий отделять свое от чужого. Распознавание патогена или другой инородной субстанции. Возникновение реакции против патогена с целью его элиминации. Врожденный иммунитет является более древним в филогенетическом отношении, причем некоторые его формы сохранились и у современных многоклеточных организмов, в то время как адаптивный иммунный ответ возник около 0 миллионов лет назад и к настоящему времени обнаружен только у челюстных позвоночных Пютрхоп, . Главное различие между ними заключается в том, что адаптивный иммунный ответ высоко специфичен к каждому конкретному патогену. Специфичность иммунного ответа позвоночных обеспечивается способностью иммунной системы генерировать огромное разнообразие более , различных вариантов белковых эффекторных молекул с разной антигенной специфичностью, используя для этого относительно ограниченный набор кодирующих их генетических элементов. Кроме того, при новой инфекции тем же патогеном ответ усиливается, так как иммунная система запоминает патоген и может предотвращать болезнь при повторной инфекции. Этот феномен известен как иммунологическая память.