Реализация действия пролактина на мейоз ооцитов коров

• Автор: Скотти, Ольга Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Санкт-Петербург, Пушкин
• Количество страниц: 125 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Роль пролактина в репродукции млекопитающих.

1.1.1. Структура молекулы пролактина общие сведения

1.1.2. Биологические функции пролактина

1.1.3. Гормональная регуляция фолликулогенеза и

мейоза ооци гов коров.

1.1.4. Участие пролактина в апоптозе и пролиферации клеток в процессе

фолликулогенеза

1.2. Внутриклеточные механизмы реализации эффектов

гипофизарных гормонов на созревание яйцеклетки
1.2.1. Характеристика рецепторов к гипофизарным гормонам
на овариальных клетках.
1.2.2. Современные представления о механизмах реализации
эффектов пролактина на фолликулярные клетки.
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНР1Й
2.1. Материал исследований.
2.2. Методы исследований.
2.2.1. Выделение и морфологическая оценка ооциткумулюсных комплексов.
2.2.2. Культивирование ооциткумулюсных комплексов
2.2.3. Культивирование клеток гранулезы.
2.2.4. Цитогенетический анализ
2.2.5. Определение уровня пикнозов в кумулюсных клетках.
2.2.6. Анализ активности киназы гистонов Н1.
2.2.7. Определение активности МАР киназ
2.2.8. Получение клеток эпителия яйцевода.
2.2.9. Оплодотворение ооцитов.
2.2 Статистическая обработка полученных данных
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Исследование влияния пролактина на созревание ооцитов,
выделенных из фолликулов разного диаметра.
3.2. Деструктивные процессы в кумулюсе ооциткумулюсных комплексов при культивировании в средах с пролактином.
3.3. Культивирование доимплантационных эмбрионов
в средах с пролактином
3.4. Влияние пролактина на кинетику мейоза в ооцитах коров
3.5. Активация киназы гистонов Н1 в процессе созревания
ооцитов коров i vi в средах с добавлением пролактина
3.6. Влияние пролактина на активацию МАР киназ в динамике
мейоза ооцитов коров i vi.
3.7. Роль цАМФзависимых внутри клеточных механизмов, опосредующих действия пролактина
3.7.1. Влияние теофиллина и пролактина па созревание
ооцитов коров i vi
3.7.2. Эффект дбцАМФ на созревание ооцитов коров i vi.
3.7.3. Оплодотворяемость ооцитов и развитие эмбрионов в культуральных средах с добавлением дбцАМФ.
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Установлено, что пролактин, добавленный в культуральную среду в процессе созревания ооцитов благоприятно влияет в дальнейшем при оплодотворении i vi на выход полноценных эмбрионов на стадии бластоцисты , 6. Показано, что гомозиготные самки мышей с инактивированным геном для лактогенного рецептора бесплодны, вследствие многочисленных репродуктивных аномалий, включая овуляцию, увеличение количества не возобновивших мейоз ооцитов, понижение оплодотворяемости яйцеклеток и их способности к дальнейшему развитию . Полученные недавно данные об экспрессии мРНК рецепторов пролактина в ооцитах и ранних эмбрионах мышей, а также в овариальных клетках овец указывают на возможность прямого воздействия пролактина на формирование зрелой яйцеклетки 5, 8. Исследовать механизмы реализации эффектов пролактина на мейоз ооцитов при их созревании i vi и вовлечение в эти процессы соматических клеток фолликулов. Изучить действия пролактина на активацию киназы гистоиов Н1 и МАР киназ . Проанализировать роль цАМФпротеинкиназа Азависимого сигнального пути в реализации действия ПРЛ на созревание окруженных кумулюсом ооцитов коров. Впервые с использованием модели вне фолликулярного дозревания ооцитов, выделенных из фолликулов различного диаметра, проведен комплексный анализ эффектов бычьего пролактина на мейотические преобразования хромосом, статус хроматина кумулюса, развитие преимплантационных эмбрионов коров. Проанализирована кинетика мейоза в ооцитах овариальных фолликулов коров разного диаметра, прокультивированных в присутствии пролактина. Показано вовлечение в процессы реализации эффектов пролактина на мейоз ооцитов i vi киназы гистонов Н1 и МАР киназ. Идентифицирован характер действия дбцАМФ на завершение мейоза ооцитах, созревших в присутствии пролактина, дальнейшее их оплодотворение и развитие эмбрионов. Получены данные, свидетельствующие о возможном участии цАМФзависимого внутриклеточного пути в опосредовании действия пролактина на ооциткумулюсные комплексы коров. Теоретическая и практическая значимость работы Теоретически обоснована модель опосредованного клетками кумулюса характера действия пролактина на созревание коровьих яйцеклеток. Наблюдаемое пролонгируещее действие ПРЛ на процесс мейоза ооцитов, вероятно, способствует синхронизации ядерного цитоплазматического созревания. Полученные результаты дополняют имеющиеся представления о внутриклеточных сигнальных путях реализации эффектов пролактина ш уйго на мейоз в ооцитах коров. Наши экспериментальные данные доказывают, что действие гормона может осуществляться через разные сигнальные пути, в том числе и через цАМФзависимый путь, по крайней мере частично, как на уровне синтеза и распада цАМФ, так и через регуляцию активностей МАР киназы и киназы гистонов Н1. Анализ данных исследований по выявлению эффектов пролактина и теофиллина на ооцит и его кумулюс свидетельствуют о сопряжении сигнального каскада, индуцированного ПРЛ в ооциткумулюсных. АМФзависимого внутриклеточного пути. Результаты экспериментов позволяют предположить, что запуск определенного сигнального каскада пролактином в ооциткумулюсном комплексе зависит от стадии фолликулярного созревания, соответственно, степени зрелости яйцеклетки. Практическая ценность работы представлена разработкой системы дозревания ооцитов, выделенных из фолликулов диаметром 58 мм, на основе использования нгмл прола, позволяющая повышать выход биологически полноценной яйцеклетки и эмбрионов коров. Материалы диссертации были доложены и одобрены на ежегодных аспирантских сессиях и отчетах ГНУ ВНИИГРЖ Россельхозакдемии, представлены на Международных конференциях. Рецепция и внутриклеточная сигнализация Пущино , годы, Клеточное ядро. Институт Цитологии РАН, СанктПетербург, . По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе в журнале Цитология. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов исследований, их обсуждения, выводов, предложений, списка использованной при написании диссертации литературы, включающего 5 источников, в том числе 4 на иностранном языке. Диссертация изложена на 5 страницах, включает 7 таблиц, рисунок.