Роль клеток гранулезы при действии соматотропина и пролактина на мейоз ооцитов коров in vitro

• Автор: Кибардина, Татьяна Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Санкт-Петербург, Пушкин
• Количество страниц: 136 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Развитие и атрезия фолликулов в яичниках млекопитающих.

1.1.1. Динамика фолликулогенеза.

1.1.2. Атрезия как физиологический процесс регрессии фолликулов.

1.1.3. Центральная роль гонадотропных гормонов в регуляции фолликулогенеза

1.1.4. Влияние соматотропина и пролактина на рост, дифференцировку

и дегенерацию фолликулярных клеток.

1.1.5. Стероидогенез соматических клеток фолликулов в яичниках млекопитающих.

1.2. Регуляция созревания ооцитов млекопитающих.

1.2.1. Мейотические преобразования хроматина и цитоплазматические изменения в процессе созревания ооцитов.
1.2.2. Участие гипофизарных гормонов в контроле оогенеза
1.3. Влияние компонентов фолликулярной жидкости на приобретение
ооцитами компетенции к овуляции
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
2.1 .Материал исследований
2.2. Методы исследований
2.2.1. Выделение ооциткумулюсных комплексов коров и их оценка .
2.2.2. Культивирование ооциткумулюсных комплексов коров
2.2.3. Выделение клеток гранулезы.
2.2.4. Культивирование клеток гранулезы в отсутствии сыворотки .
2.2.5. Определение содержания стероидных гормонов продуктов секреции клеток гранулезы при их культивировании i vi
2.2.6. Получение монослойной культуры и кондиционированных сред.
2.2.7. Капацитация сперматозоидов, оплодотворение ооцитов i vi, культивирование зигот и ранних эмбрионов.
2.2.8. Цитогенетический анализ ооцитов, зигот и эмбрионов крупного рогатого скота.
2.2.9. Определение содержания кальция во внутриклеточных депо ооцитов.
2.2 Микроскопирование, микрофотосъемка и статистическая обработка полученных данных.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Влияние клеток гранулезы на способность к развитию ооцитов коров, созревших в присутствии пролактина i vi
3.2. Влияние гипофизарных гормонов на соматические клетки фолликула модель i vi.
3.2.1. Эффекты пролактина, соматотропина и инсулина на клетки гранулезы при их культивировании в бессывороточггой системе. .
3.2.2. Статус хроматина клеток кумулюса при их культивировании в средах, кондиционированных клетками гранулезы в присутствии пролактина и соматотропина
3.2.3. Функциональная активность клеток гранулезы коров в монослойной культуре под действием пролактина и соматотропина.
3.3. Влияние соматотропина и пролактина на мейотические преобразования хромосом в ооцитах коров i vi
3.4.Стероидогенез гранулезных клеток коров при их совместном культивировании с соматотропином, пролактином и инсулином .
ОБСУЖДЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Анализ контролируемых параметров мейоза, выявил положительные эффекты соматотропина и пролактина в присутствии КГ на уровень дегенераций хромосом снижение и цитоплазматическое созревание яйцеклетки. Обнаруженное тормозящее влияние СТГ и ПРЛ на реинициацию мейоза ооцитов является обратимым, и не наблюдается при дальнейшем культивировании. Пролонгация дозревания предполагает возможность синхронизации ядерноцитоплазматического созревания ооцита, что обеспечивает в дальнейшем приобретение яйцеклеткой способности к дальнейшему развитию. При одновременном использовании клеток гранулезы 6 клмл и пролактина нгмл повышался процент выхода нормальных эмбрионов, преодолевших блок развития на стадиях 8 клеток. Результаты исследования позволяют предположить, что ПРЛ и СТГ влияют на продукцию КГ паракринно действующих факторов, участвующих в регуляции мейоза. С учетом данных исследований для увеличения выхода зрелых яйцеклеток и нормальных эмбрионов коров i vi предложена система дозревания ооцитов с использованием КГ 6 клмл, пролактина нгмл или соматотропина нгмл. Клетки гранулезы коров из антральных фолликулов диаметром мм опосредуют действие пролактина или соматотропина на завершение мейотического созревания яйцеклетки i vi. Культивирование ооцитов из антральных овариальных фолликулов в средах, кондиционированных клетками гранулезы в присутствии ПРЛ или СТГ, приводит к торможению ядерного созревания в начале культивирования, при этом снижается уровень содержания кальция во внутриклеточных депо созревших яйцеклеток маркер цитоплазматического созревания. Пролактин и соматотропин при культивировании ооцитов i vi оказывают влияние на статус хроматина соматических клеток, снижая долю клеток с дегеиерированным хроматином СТГ или, повышая число клеток с ядрами на стадии митоза ПРЛ. Введение в систему дозревания ооцитов коров клеток гранулезы из фолликулов мм в концентрации 6 клеток на мл среды совместно с пролактином нгмл способствует повышению выхода нормальных эмбрионов на завершающих стадиях доимлантационного развития. Апробация работы. Европейской ассоциации животноводства, Италия на ом международном конгрессе по биотехнологии в репродукции сх животных, Чехия, сентябрь Клеточное ядро Институт Цитологии РАИ, СанктПетербург, . Публикации. По материалам диссертации опубликовано нучных работ, в том числе 6 в журналах, входящих в Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки России. Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов исследований, их обсуждения, выводов, предложений, списка использованной при написании диссертации литературы, включающего 5 источников, в том числе 5 на иностранном языке. Диссертация изложена на 6 страницах, включает 7 таблиц, рисунка в том числе микрофотографий. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1. Фолликулогснез сложный, тонко регулируемый процесс, зависящий от баланса между локальными овариальными факторами роста и циркулирующими в крови животного гормонами, продолжающийся до момента истощения запаса примордиальных фолликулов в яичниках животных , , , 2, 3. К периоду репродуктивной зрелости в яичнике млекопитающих имеется пул примордиальных фолликулов, каждый из которых состоит из ооцита, блокированного на стадии профазы мейоза I, и одного слоя уплощенных клеток гранулезы. У одних видов приматы, жвачные такие фолликулы развиваются в эмбриональном периоде, а у других грызуны, кролики во время раннего неонатального периода. После формирования когорты примордиальных фолликулов они начинают постепенно и непрерывно покидать остающийся пул и расти. Природа сигналов, инициирующих рост, и механизмы, которые заставляют фолликул покинуть пул, до сих пор еще не окончательно выяснены 9,1, 6, 9. Анализ характера развития больших фолликулов у различных видов млекопитающих показал, что фолликулогенез происходит только во время особого репродуктивного состояния самки иили в течении определенного времени репродуктивного цикла. И, напротив, рост фолликулов до овуляторного размера не происходит во время ложной беременности или беременности до последних дней перед следующим эструсом.