Роль цитоскелета сердечных фибробластов в механизме генерации механоиндуцированных потенциалов

• Автор: Казанский, Виктор Евгеньевич
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 103 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Электрофизиолофические характеристики сердечных фибробластов.

2. Роль механосенситивных каналов в формировании электрического ответа клетки.

3. Роль цитоскелета в регуляции воротного механизма механосенситивных ионных

каналов у электронсвозбудимых клеток.

ГЛАВА II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Объект исследований.

2. Метод получения препарата правого предсердия

3. Перфузионная среда

4. Факторы воздействия на клетки
4.1. Электрические стимулы
4.2. Механические раздражители
4.3. Химические соединения
5. Микроэлсктроды
6. Экспериментальная установка для микроэлсктродных исследований клеток возбудимых тканей
6.1. Электронноизмерительная система.
6.2. Система жизнеобеспечения изолированного препарата правого предсердия
6.3. Электронноизмерительная аппаратура для регистрации сократительной активности фрагментов предсердий и их механической стимуляции
7. Характеристика регистрируемых параметров фибробластов.
8. Методы обработки результатов экспериментов.
ГЛАВА III РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. Электрофизиологическое исследование фибробластов в правом предсердии крыс
1.1.Электрофизиологаческая идентификация фибробластов.
1.2. Изменения I, вызванные спонтанными сокращениями ткани, в
условиях длительной перфузии ткани физиологическим раствором
2. Влияние внутриклкточной диффузии соединений, деполимеризующих и стабилизирующих цитоскелет па механоиндуцированные потенциалы фибробластов в правом предсердии крыс
2.1. Влияние i на биоэлектрическую активность фибробластов . .
2.2. Влияние ii на биоэлектрическую активность фибробластов. . .
2.3. Влияние совместного введения i и ii на биоэлектрическую активность фибробластов
2.4. Влияние АТР на биоэлектрическую активность фибробластов
2.5. Влияние совместного введения i и АТР на биоэлектрическую активность фибробластов
2.6. Влияние на биоэлектрическую активность фибробластов
2.7. Влияние x на биоэлектрическую активность фибробластов
2.8. Влияние совместного введения ii и на биоэлектрическую активность фибробластов.
2.9. Влияние совместного введения ii и x на биоэлектрическую
активность фибробластов.
З.Обсужденис результатов
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Для ряда электронсвозбудимых клеток показано, что механизм преобразования механического сигнала представляет собой комбинацию между передачей силы растяжения или сжатия через цитоскелетные элементы на механосенситивные ионные каналы и преобразование силы растяжения или сжатия в биохимические сигналы на механопреобразующем участке клетки. Большинство авторов рассматривают в качестве принципиальной преобразующей системы актин микрофиламентов, поскольку показано, что стимуляция аденилатциклазы и мсханосенситивный ответ клетки на деформацию ингибируется специфическим деполимеризующим актин микрофиламентов агентом 5. Микрофиламентная сетка поддерживает натяжение в клетке, которое совместно с микротубулярной жесткостью определяет клеточную форму . Поскольку фибробласты сердца являются механосенситивными клетками, было предположено, что они являются механоэлектрическим преобразователем в сердце и служат базовыми элементами для реализации механизма обратной связи между возбуждением и сокращением 6,,,,2, который пытаются найти на уровне кардиомиоцитов 7,1. Хотя гистологически фибробласты сердца изучены достаточно хорошо ,5,6,4,7, их элсктрофизиологичсское исследование проведено только в условиях культуры ткани неонатального сердца крыс 8,9 и на целом сердце холоднокровных животных 6,7,8,,,,,,,,,,,,, ,,,0,1,2,4. I. Проверке этой гипотезы посвящена настоящая работа. Исходя из этих предпосылок мы сформулировали цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение роли цитоскелета сердечных фибробластов в механизме генерации механоиндуцированных потенциалов. Изучение роли деполимеризации актина и тубулина в механизме возникновения МР. Изучение роли полимеризации актина и тубулина в механизме возникновения МР. Изучение эффекта стабилизаторов актина в условиях его деполимеризации. Изучение эффекта стабилизаторов тубулина в условиях его деполимеризации. Диссертация состоит из обзора литературы, описания материалов и методов, изложения полученных результатов с их обсуждением, выводов и списка цитированной литературы. В литературном обзоре, в соответствии с намеченной целью исследования, даются представления об электрофизиологических свойствах электроневозбудимых, но мсханосенситивных фибробластов сердца лягушки и крысы 6,. Представлены данные о роли iv в формировании биопотенциалов у некоторых клеток. Рассматривается возможная роль цитоскелета в регуляции воротного механизма iv у элсктроневозбудимых клеток. ii деполимеризующий тубулин микротубул и соединения стабилизирующие цитоскелет АТР стабилизирующая актин микрофиламентов и и x стабилизирующие тубулин микротубул. В главе, посвященной материалам и методам исследований, охарактеризован объект исследований сердце крысы. Описана методика выделения изолированного синусного узла. Описаны использованные в работе микроэлектроды. Описана экспериментальная установка, состоящая из системы жизнеобеспечения исследуемых тканей и электронноизмерительной системы. Последняя позволяет одним микроэлектродом регистрировать внутриклеточную электрическую активност и одновременно осуществлять искусственную поляризацию мембраны. Представлены характеристики регистрируемых параметров. Завершает главу описание математического аппарата для обработки результатов. Глава, посвященная результатам исследований и их обсуждению, содержит характеристики биоэлектрических параметров немышечных клеток сердца крысы, идентифицированных как фибробласты. На этих клетках изучены эффекты внутриклеточного введения i и ii, которые деполимеризуя актин и тубулин ингибируют МР. Изучено влияние на МР стабилизаторов актина и тубулина , и x. В работе получены данные о протективном эффекте стабилизаторов актина и тубулина на эффект i и ii. Работа демонстрирует, что передача механического сигнала на механосенситивныс ионные каналы у фибробластов сердца в значительной мере осуществляется при помоци актина микрофиламентов и тубулина микротубул. Работу заключают выводы, вытекающие из обобщения результатов экспериментов. Диссертация изложена на 3 страницах машинописного текста, включая 2 таблицы, рисунков и список литературы из 8 источников.